丹参预给药对缺血再灌注后大鼠肠系膜微循环白细胞与血管内皮细胞相互作用的影响
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缺血再灌注后白细胞活化，与血管内皮细胞粘附、血管通透性增强等是微循环障碍的重要环节。本文介绍丹参预给药对缺血再灌注后白细胞与血管内皮细胞的粘附、细静脉通透性的影响。
材料和方法
动物及缺血再灌注微循环障碍模型的建立 取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital麻醉。从右侧颈静脉插入并留置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm长的切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面连续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜观察，高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
选直径在30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)为观察部位。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)之后，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处，在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组的给药方法和给药量同本报3月7日第9版介绍。
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粘附于细静脉内皮的白细胞计数：用连接于倒置生物显微镜的高感度CCD摄像系统(CC-090，Flovel，东京)记录微循环动态。重放录像，计数缺血再灌注前、再灌注后0分、10分、20分、30分钟时同一视野内停留于细静脉内皮30秒以上的白细胞数。以100 μm长细静脉上粘附的白细胞数来表示。
细静脉血管通透性测定：将FITC(荧光素)标记的白蛋白(sigma chemical)，按50 mg的剂量，经颈静脉缓慢注入、用荧光显微摄影系统连续记录、在所设定的时限上测定同一细静脉内外的FITC荧光素变化。根据从细静脉管内向细静脉管外漏出的FITC荧光素变化、经时计算白蛋白的漏出情况，以表示细静脉血管通透性的变化。
每组6只大鼠的测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组值用x±sx表示，设P< 0.05为差异有显著性。
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结 果
图1 3组粘附于细静脉内皮白细胞变化
图2
荧光显微摄影显示缺血再灌注前无FITC标记的白蛋白渗出
图3
荧光显微摄影显示缺血再灌注21分钟时,大量FITC标记的白蛋白渗出
图4 3组细静脉外FITC标记的白蛋白荧光强度变化
粘附于细静脉内皮的白细胞数：图1显示正常对照组在本观察的期间内，几乎没有白细胞的粘附。缺血再灌注组在再灌注开始后，粘附于细静脉内皮白细胞显著增多。并随着再灌注时间的延长持续增加。丹参预给药没能抑制缺血再灌注早期的白细胞粘附，但在再灌注10分钟之后，丹参预给药组粘附于细静脉内皮的白细胞数开始显著低于缺血再灌注组。即丹参对再灌注期间的白细胞与细静脉内皮的粘附有抑制作用。
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细静脉管壁通透性的变化：图2是缺血再灌注前的图像，没有观察到FITC标记的白蛋白在细静脉外漏出。图3是缺血再灌注后21分钟的图像，可观察到大量的FITC标记的白蛋白渗出到细静脉外。测定细静脉内外FITC标记的白蛋白荧光强度的变化，其结果如图4所示。正常对照组在观察期间内几乎没有观察到FITC标记的白蛋白渗出到细静脉外。缺血再灌注组，在再灌注开始时已有FITC标记的白蛋白外渗，在再灌注30分钟的观察期间内FITC标记的白蛋白外渗持续增加。在缺血再灌注早期，丹参预给药没能抑制FITC标记的白蛋白外渗，而在再灌注20分钟之后，丹参预给药组的FITC标记的白蛋白外渗显著地低于再灌注组。
讨 论
本研究证明了丹参预给药能够抑制缺血再灌注后白细胞与细静脉内皮的粘附，能够抑制白蛋白的外渗。
正常情况下，血管内分子量较小的成分可以透过内皮细胞和血管基底膜渗出于血管外。而分子量较大的血浆白蛋白，在正常情况下是不易渗出的。当血管内皮细胞损伤，内皮细胞的小孔隙或内皮细胞间隙增大，或血管基底膜损伤时，可引起血管的通透性增加，致使原本不能外渗的白蛋白可渗出到血管外。所以，白蛋白外渗可以表示血管损伤与否，及其损伤程度。因白蛋白外渗与否肉眼难以辨认，所以，向血管内注入FITC标记的白蛋白，在荧光显微摄影系统连续观察记录血管内外FITC荧光强度的变化，可以客观地研究血管的通透性变化。
缺血期间内皮细胞损伤，可以引起白蛋白的外渗，再灌注期间白细胞活化，与血管内皮细胞结合，进一步损伤内皮细胞和血管基底膜，因而导致白蛋白的外渗持续加重。
丹参预给药组，虽然没能抑制缺血期间白细胞与细静脉内皮粘附，但可以显著地抑制再灌注期间白细胞与细静脉内皮粘附。
除抑制白细胞与细静脉内皮粘附外，我们还报道过，丹参有保护血管内皮细胞，减少血管内皮细胞过氧化物产生的作用。丹参综合作用的结果，显著地抑制了FITC标记的白蛋白向细静脉外的渗出。, 百拇医药
材料和方法
动物及缺血再灌注微循环障碍模型的建立 取庆应义塾大学医学部实验动物中心饲养的Wistar雄性大鼠，按30 mg/kg的剂量腹腔注射sodium pentobarbital麻醉。从右侧颈静脉插入并留置3G聚乙烯管。沿腹正中线作2～3cm长的切口，轻柔地把近回盲部的回肠移至腹腔外，将肠系膜在附有薄玻片的板上展开。为维持温度和湿度，在展开的肠系膜的表面连续滴加37℃的Krebs-Ringer缓冲液。肠系膜微循环的动态，用置于37℃恒温槽内的倒置生物显微镜观察，高感度摄像机摄像，S-VHS录像机录像。
选直径在30～40 μm之间的细静脉(长200 μm以上)为观察部位。经10分钟基础观察之后，用4G聚乙烯管将还流于观察部的肠系膜动静脉血管同时结扎10分钟(缺血)之后，解除结扎(再灌注)，将时间记录仪调至0处，在同一视野连续观察30分钟。正常对照组不进行缺血再灌注处理。丹参预给药组的给药方法和给药量同本报3月7日第9版介绍。
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粘附于细静脉内皮的白细胞计数：用连接于倒置生物显微镜的高感度CCD摄像系统(CC-090，Flovel，东京)记录微循环动态。重放录像，计数缺血再灌注前、再灌注后0分、10分、20分、30分钟时同一视野内停留于细静脉内皮30秒以上的白细胞数。以100 μm长细静脉上粘附的白细胞数来表示。
细静脉血管通透性测定：将FITC(荧光素)标记的白蛋白(sigma chemical)，按50 mg的剂量，经颈静脉缓慢注入、用荧光显微摄影系统连续记录、在所设定的时限上测定同一细静脉内外的FITC荧光素变化。根据从细静脉管内向细静脉管外漏出的FITC荧光素变化、经时计算白蛋白的漏出情况，以表示细静脉血管通透性的变化。
每组6只大鼠的测定值用one-way analysis of variance(ANOVA)处理，Fisher's post hoc test检验。各组值用x±sx表示，设P< 0.05为差异有显著性。
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结 果
图1 3组粘附于细静脉内皮白细胞变化
图2
荧光显微摄影显示缺血再灌注前无FITC标记的白蛋白渗出
图3
荧光显微摄影显示缺血再灌注21分钟时,大量FITC标记的白蛋白渗出
图4 3组细静脉外FITC标记的白蛋白荧光强度变化
粘附于细静脉内皮的白细胞数：图1显示正常对照组在本观察的期间内，几乎没有白细胞的粘附。缺血再灌注组在再灌注开始后，粘附于细静脉内皮白细胞显著增多。并随着再灌注时间的延长持续增加。丹参预给药没能抑制缺血再灌注早期的白细胞粘附，但在再灌注10分钟之后，丹参预给药组粘附于细静脉内皮的白细胞数开始显著低于缺血再灌注组。即丹参对再灌注期间的白细胞与细静脉内皮的粘附有抑制作用。
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细静脉管壁通透性的变化：图2是缺血再灌注前的图像，没有观察到FITC标记的白蛋白在细静脉外漏出。图3是缺血再灌注后21分钟的图像，可观察到大量的FITC标记的白蛋白渗出到细静脉外。测定细静脉内外FITC标记的白蛋白荧光强度的变化，其结果如图4所示。正常对照组在观察期间内几乎没有观察到FITC标记的白蛋白渗出到细静脉外。缺血再灌注组，在再灌注开始时已有FITC标记的白蛋白外渗，在再灌注30分钟的观察期间内FITC标记的白蛋白外渗持续增加。在缺血再灌注早期，丹参预给药没能抑制FITC标记的白蛋白外渗，而在再灌注20分钟之后，丹参预给药组的FITC标记的白蛋白外渗显著地低于再灌注组。
讨 论
本研究证明了丹参预给药能够抑制缺血再灌注后白细胞与细静脉内皮的粘附，能够抑制白蛋白的外渗。
正常情况下，血管内分子量较小的成分可以透过内皮细胞和血管基底膜渗出于血管外。而分子量较大的血浆白蛋白，在正常情况下是不易渗出的。当血管内皮细胞损伤，内皮细胞的小孔隙或内皮细胞间隙增大，或血管基底膜损伤时，可引起血管的通透性增加，致使原本不能外渗的白蛋白可渗出到血管外。所以，白蛋白外渗可以表示血管损伤与否，及其损伤程度。因白蛋白外渗与否肉眼难以辨认，所以，向血管内注入FITC标记的白蛋白，在荧光显微摄影系统连续观察记录血管内外FITC荧光强度的变化，可以客观地研究血管的通透性变化。
缺血期间内皮细胞损伤，可以引起白蛋白的外渗，再灌注期间白细胞活化，与血管内皮细胞结合，进一步损伤内皮细胞和血管基底膜，因而导致白蛋白的外渗持续加重。
丹参预给药组，虽然没能抑制缺血期间白细胞与细静脉内皮粘附，但可以显著地抑制再灌注期间白细胞与细静脉内皮粘附。
除抑制白细胞与细静脉内皮粘附外，我们还报道过，丹参有保护血管内皮细胞，减少血管内皮细胞过氧化物产生的作用。丹参综合作用的结果，显著地抑制了FITC标记的白蛋白向细静脉外的渗出。, 百拇医药