复方丹参滴丸在细胞学微观水平对缺血再灌注的保护作用机制
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心肌缺血再灌注损伤主要包括5个方面的病理生理学改变：
自由基生成，细胞内钙超载及高能磷酸化合物缺乏，能量代谢障碍；再灌注性心律失常；心肌收缩共济障碍；心肌细胞凋亡和坏死；冠状微循环障碍。
在哈尔滨医科大学病理生理教研组王孝铭教授主持下，针对这些病理生理改变进行了针对性实验研究。
1.针对缺血再灌注时，自由基生成细胞内钙超载和高能磷酸化合物缺乏，能量代谢障碍的理论，专门进行了复方丹参滴丸对缺血再灌注心肌高能磷酸化合物及心肌细胞内钙离子影响的研究。
用Langendorff离体心脏灌流技术制备心肌缺血再灌注的损伤模型，利用高效液相色谱(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中高能磷酸化合物含量(包括AMP、ADP、ATP、TAN、腺苷酸总量)。实验证明，(1)缺血再灌注损伤，心肌能量代谢发生严重障碍；(2)缺血前的灌流液中加入复方丹参滴丸(20 μg/ml灌注液)，可使心肌组织中高能磷酸化合物及总腺苷酸水平明显提高，明显高于未加保护的单纯缺血再灌注组。其中，ATP和TAN含量已达到正常水平，说明复方丹参滴丸可能通过抑制ATP分解或通过相应酶类作用，使ADP合成ATP，从而对线粒体具有保护作用，从而发挥其对缺血再灌注损伤的保护作用。
2.用新生Wistar乳鼠心肌细胞离体培养36小时，给予缺氧/再给氧刺激，采用钙离子的分子探针-新型荧光示标剂Fluo-3/AM(戊二酰氧甲基酯)。用共聚集显微镜检测细胞内钙离子分布情况。
实验表明，心肌细胞缺氧前加入复方丹参滴丸，可以使心肌细胞内钙离子荧光强度明显下降，证明复方丹参滴丸有抵抗心肌细胞“钙超载”的作用。
3.针对缺血再灌注自由基所致心律失常的影响，进行了复方丹参滴丸对外源性自由基所致心律失常的实验研究。用Langendoff离体心肌，灌注外源性自由基(硫酸亚铁0.25 mmol/L、抗坏血酸1.0 mmol/L)，比较观察复方丹参滴丸及异搏定对自由基所致心律失常影响。
实验表明，复方丹参滴丸能使动作电位时程延长，钙离子内流增加，而拮抗自由基引起的心律失常。
4.针对缺血再灌注心肌细胞凋亡/坏死作用，进行了复方丹参滴丸对乳鼠心肌细胞培养缺氧及缺氧/复氧后Fas/Fasl蛋白表达影响的研究。用免疫组化方法和图像分析方法，在显微镜放大100倍时，每组选择5个视野，每个视野计数Fas/Fasl蛋白表达阳性细胞数。平均计算阳性细胞所占百分比作为Fas/Fasl蛋白阳性表达指数(PEI)。
结果证明，缺氧及缺氧/复氧后，心肌细胞均有凋亡，相关基因Fas/Fasl表达增强，复方丹参滴丸可通过下调Fas/Fasl蛋白表达以减少心肌细胞凋亡，从而减弱缺氧及缺氧/复氧损伤。
5.还进行了复方丹参滴丸对家兔血小板细胞膜流动性影响的研究。采用荧光偏振法观察对照组和实验组(给予复方丹参滴丸)家兔血小板细胞膜参数的变化，测定血小板细胞膜荧光偏振度P、微粘度η、膜流动性LFU。
结果证明，复方丹参滴丸可明显增加家兔血小板细胞膜流动性(LFU)，微粘度明显下降，与对照组相比P< 0.01。, 百拇医药
自由基生成，细胞内钙超载及高能磷酸化合物缺乏，能量代谢障碍；再灌注性心律失常；心肌收缩共济障碍；心肌细胞凋亡和坏死；冠状微循环障碍。
在哈尔滨医科大学病理生理教研组王孝铭教授主持下，针对这些病理生理改变进行了针对性实验研究。
1.针对缺血再灌注时，自由基生成细胞内钙超载和高能磷酸化合物缺乏，能量代谢障碍的理论，专门进行了复方丹参滴丸对缺血再灌注心肌高能磷酸化合物及心肌细胞内钙离子影响的研究。
用Langendorff离体心脏灌流技术制备心肌缺血再灌注的损伤模型，利用高效液相色谱(HPLC)测定离体大鼠心肌组织中高能磷酸化合物含量(包括AMP、ADP、ATP、TAN、腺苷酸总量)。实验证明，(1)缺血再灌注损伤，心肌能量代谢发生严重障碍；(2)缺血前的灌流液中加入复方丹参滴丸(20 μg/ml灌注液)，可使心肌组织中高能磷酸化合物及总腺苷酸水平明显提高，明显高于未加保护的单纯缺血再灌注组。其中，ATP和TAN含量已达到正常水平，说明复方丹参滴丸可能通过抑制ATP分解或通过相应酶类作用，使ADP合成ATP，从而对线粒体具有保护作用，从而发挥其对缺血再灌注损伤的保护作用。
2.用新生Wistar乳鼠心肌细胞离体培养36小时，给予缺氧/再给氧刺激，采用钙离子的分子探针-新型荧光示标剂Fluo-3/AM(戊二酰氧甲基酯)。用共聚集显微镜检测细胞内钙离子分布情况。
实验表明，心肌细胞缺氧前加入复方丹参滴丸，可以使心肌细胞内钙离子荧光强度明显下降，证明复方丹参滴丸有抵抗心肌细胞“钙超载”的作用。
3.针对缺血再灌注自由基所致心律失常的影响，进行了复方丹参滴丸对外源性自由基所致心律失常的实验研究。用Langendoff离体心肌，灌注外源性自由基(硫酸亚铁0.25 mmol/L、抗坏血酸1.0 mmol/L)，比较观察复方丹参滴丸及异搏定对自由基所致心律失常影响。
实验表明，复方丹参滴丸能使动作电位时程延长，钙离子内流增加，而拮抗自由基引起的心律失常。
4.针对缺血再灌注心肌细胞凋亡/坏死作用，进行了复方丹参滴丸对乳鼠心肌细胞培养缺氧及缺氧/复氧后Fas/Fasl蛋白表达影响的研究。用免疫组化方法和图像分析方法，在显微镜放大100倍时，每组选择5个视野，每个视野计数Fas/Fasl蛋白表达阳性细胞数。平均计算阳性细胞所占百分比作为Fas/Fasl蛋白阳性表达指数(PEI)。
结果证明，缺氧及缺氧/复氧后，心肌细胞均有凋亡，相关基因Fas/Fasl表达增强，复方丹参滴丸可通过下调Fas/Fasl蛋白表达以减少心肌细胞凋亡，从而减弱缺氧及缺氧/复氧损伤。
5.还进行了复方丹参滴丸对家兔血小板细胞膜流动性影响的研究。采用荧光偏振法观察对照组和实验组(给予复方丹参滴丸)家兔血小板细胞膜参数的变化，测定血小板细胞膜荧光偏振度P、微粘度η、膜流动性LFU。
结果证明，复方丹参滴丸可明显增加家兔血小板细胞膜流动性(LFU)，微粘度明显下降，与对照组相比P< 0.01。, 百拇医药