洋地黄生物检定法
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《仪器分析法概述》
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洋地黄生物检定法
本法系比较洋地黄标准品(S)与供试品(T)对鸽的最小公斤致死量，以测定供试品的效价。 标准品溶液的配制 迅速精密称取洋地黄标准品适量，避免吸潮，置玻璃容器内，按标示效价计算，每1单位精密加入76%乙醇1ml，密塞，连续振摇1小时，静置片刻,用干燥滤器迅速滤过，防止乙醇挥发，滤液即为每1ml中含1单位的溶液，4～8℃贮存，如无沉淀析出，可在1个月内使用。 标准品稀释液的配制 试验当日，精密量取标准品溶液适量,用0.9%氯化钠溶液稀释，稀释液浓度(u/ml)应调节适当(一般可用1→30),使鸽的平均最小公斤致死量在25～34ml之间。 供试品溶液和稀释液的配制 供试品如为粉末，精密称取适量，按标示量或估计效价(A<[T]>)，照标准品溶液及其稀释液的配制法配制；供试品如为片剂，取20片以上，精密称重，求出平均片重，迅速研细，再精密称取不少于20片的粉末，按称重及标示量(A<[T]>)计算，照标准品溶液及其稀释液配制法配制。供试品稀释液和标准品稀释液的鸽平均最小公斤致死量(ml)应相近。 检定法 取健康无伤的鸽，试验前16～24小时移去饲料，但仍给予饮水，临试验前准确称重，选取体重在250～400g的鸽(每次试验所用鸽的体重相差不得超过100g),分成两组，每组至少6只，一组为标准品组,一组为供试品组，两组间鸽的情况应尽可能相近。 将鸽仰缚于适宜的固定板上，在一侧翼静脉处拔除羽毛少许，露出翼静脉，插入与最小刻度不大于0.02ml的滴定管相连的注射针头，缓缓注入标准品稀释液或供试品稀释液，开始时，一次注入0.5ml，然后以每分钟0.2ml的等速连续注入，至鸽中毒死亡立即停止注入。一般死亡前有强烈颤抖、恶心呕吐、排便等现象发生，至瞳孔迅速放大、呼吸停止为终点。记录注入稀释液的总量(ml),换算成每1kg体重致死量(ml)中所含单位数(u/Kg)，取其10倍量的对数值作为反应值，照生物检定统计法(附录Ⅹ Ⅳ)中的直接测定法计算效价及实验误差。 本法的可信限率(FL%)不得大于15%。
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肝素生物检定法
本法系比较肝素标准品(S)与供试品(T)延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间的作用,以测定供试品的效价。 标准品溶液的配制 精密称取肝素标准品适量,按标示效价加灭菌水溶解使成每1ml中含100单位的溶液，分装于适宜的容器内，4～8℃贮存，如无沉淀析出，可在3个月内使用。 标准品稀释液的配制 试验当日，精密量取标准品溶液，按高、中、低剂量组(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>)用0.9%氯化钠溶液配成三种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值(r)应相等;调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素对照管组明显延长。高剂量组各管的平均凝结时间，用新鲜兔血者，以不超过60分钟为宜，其稀释液一般可配成每1ml中含肝素2～5单位，r为1:0.7左右；用血浆者,以不超过30分钟为宜，其稀释液一般可配成每1ml中含肝素0.5～1.5单位，r为1∶0.85左右。 供试品溶液与稀释液的配制 按供试品的标示量或估计效价(A<[T]>)，照标准品溶液与稀释液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、dT<[2]>、dT<[1]>)三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值(r)应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。 血浆的制备 迅速收集兔或猪血置预先放有8%枸橼酸钠溶液的容器中,枸橼酸钠溶液与血液容积之比为1:19，边收集边轻轻振摇，混匀，迅速离心约20分钟(离心力不超过1500×g为宜，g为重力常数)。立即分出血浆，分成若干份分装于适宜容器内，低温冻结贮存。临用时置37±0.5℃水浴中融化,用两层纱布或快速滤纸过滤，使用过程中在4～8℃放置。 检定法 (1)新鲜兔血 取管径均匀(0.8×3.8cm或1.0×7.5cm)、清洁干燥的小试管若干支，每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液0.1ml,每种浓度不得少于3管,各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血适量，分别注入小试管内，每管0.9ml,立即混匀,避免产生气泡，并开始计算时间。将小试管置37±0.5℃恒温水浴中，从动物采血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过3分钟，注意观察并记录各管的凝结时间。 (2)血浆 取上述规格的小试管若干支，分别加入血浆一定量，置37±0.5℃恒温水浴中预热5～10分钟后，依次每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液及1%氯化钙溶液(每种浓度不得少于3管,各浓度的试管支数相等)，血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液的加入量分别为0.5、0.4和0.1ml(或0.8、0.1和0.1ml)，加入氯化钙溶液后，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，注意观察并记录各管凝结时间。将各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法(附录Ⅹ Ⅳ)中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。 检定法(1)的可信限率(FL%)不得大于10%。 检定法(2)的可信限率(FL%)不得大于5%。, http://www.100md.com