血管紧张素原基因多态性与原发性高血压关系的研究
摘 要 目的 探索血管紧张素原(AGT)的M235T多态性与上海市嘉定区望新乡原发性高血压的关系。方法 以人群为基础进行高血压病例-对照研究，应用PCR-RFLP技术，分析AGT的M235T多态性。结果 望新乡高血压病例组中AGT基因TT基因型频率显著高于对照组，分别为42.8%和33.0%。相对于MM基因型，暴露于TT基因型的OR值为3.61。病例组中T等位基因的频率也显著高于对照组，分别为73.89%和60.31%，随着等位基因T的增加，患高血压的危险性显著增加，趋势检验P<0.05。 病例组中体质指数按MM、MT、TT基因型的顺序依次增大，各组差异有显著性。结论 TT基因型可能是望新乡原发性高血压的易感基因型。
关键词：高血压；血管紧张素原基因
高血压是一种严重影响人类健康的世界性常见慢性疾病,是心、脑、肾等器官损伤的主要危险因素,具有明显的家族聚集倾向,遗传因素与高血压发病密切相关,一般认为原发性高血压(EH)是在遗传易感性的基础上与许多环境因素的共同作用下发生的。肾素-血管紧张素系统(RAS)是调节血压和血容量的激素系统, 也是一个复杂的血压反馈系统，RAS由血管紧张素原(AGT),肾素(RESIN),血管紧张素Ⅰ,血管紧张素转化酶(ACE),血管紧张素Ⅱ(AⅡ),血管紧张素Ⅱ受体组成。其中AⅡ是强有力的血管平滑肌收缩剂，通过对周围小动脉和前毛细管平滑肌的直接作用，引起血管收缩，是形成高血压的重要原因。AGT是RAS系统中的唯一初始底物，血浆中AGT水平的高低，直接影响着RAS系统活性的强弱，AGT基因被认为是高血压的候选基因之一，它位于人染色体Iq42-43处编码区，由5个外显子和4个内含子构成，其中由于碱基的错义突变(T→C)导致了编码第235氨基酸由甲硫氨酸突变成为苏氨酸(M235T)。本研究是以上海市嘉定区望新乡人群为基础的病例-对照研究，应用PCR-RFLP技术，分析AGT的M235T多态性，目的在于探索AGT的M235T多态性与望新乡原发性高血压的关系。
, 百拇医药
材料与方法
一、研究对象
1.病例组：于1997年对上海市嘉定区望新乡进行全人群高血压普查，共查出高血压患者758人，分布于望新乡的11个自然村庄中。我们以每个村庄作为一个抽样点，按该村高血压患者名单，随机抽样(男∶女=1∶1)。根据高血压患者的既往病史，排除继发性高血压，11个村庄中共抽样高血压患者90例。
2.对照组：按性别、年龄相匹配的原则，在同一村庄中，选择与高血压患者性别相同、年龄相差小于5岁的血压水平正常的人(收缩压<140 mmHg,舒张压<90 mmHg＝,作为对照组。
二、方法
1.流行病学调查：对所有研究对象，均按统一调查表，由经过专门培训的调查员，以面对面的方式直接进行问卷调查。调查的内容包括：性别、民族、婚姻状况、文化程度、职业、经济收入、卫生知识水平、高血压及脑卒中家族史、各种危险因素(吸烟、饮酒、饮食)暴露水平等。在调查的同时进行测量身高、体重、血压水平并空腹静脉抽血5 ml，离心分离血清，血清用于作血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白等生化指标，血凝块用于基因组DNA的抽提。
, 百拇医药
2. AGT基因多态性分析：引物设计参照文献设计，AGT基因的扩增引物，由上海Sangon公司合成，引物序列如下： Primer1: 5′-CAGGGTGCTGTCCACACTGGACCCC-3′; Primer2: 5′-CCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCT-3′, PCR扩增反应总体积50 μl，反应终浓度MgCl2为2.5 mmol/L，dNTPs为100 μmmol/L，引物为1 μmmol/L，模板为3～100 ng ，Taq酶2 U。循环条件:94℃ 1 min，68℃ 1 min，72℃ 1 min。10个循环之后，按以下条件:90℃ 1 min，68℃ 1 min, 72℃ 1 min，再反应30个循环，72℃延伸10 min。反应产物用限制性内切酶TthⅢ进行酶切反应，12 h，于2.5%的琼脂糖凝胶进行电泳分离，电压20 V，时间3 h。然后在紫外光下检测，AGT的M235T基因扩增片段长度为165 bp，如果在第235位上存在T→C的突变，则扩增产物在限制性内切酶TthⅢ的作用下被切成两部分：141 bp和24 bp；如果第235位上没有发生突变，则扩增片段长度保持不变，由此产生两个等位基因T、M，分别形成三个基因型：TT(141 bp)、MT(141 bp和165 bp)、MM(165 bp)。
, 百拇医药
三、统计分析
所有资料均在EPI5软件中建立数据库，输入电脑，用SPSS软件分析。
结 果
一、研究对象的一般情况
本次研究对象共187例，男性95例，女性92例，病例组和对照组均为汉族人，其中原发性高血压患者90例(男47例，女43例)，正常对照97人(男48人，女49人)。病例组和对照组男女性别差异无显著性(χ2=0.770, P=0.410)，病例组平均年龄是(60.60±11.38)岁，对照组平均年龄是(56.77±16.26)岁，两组差异无显著性，说明病例和对照两组研究对象是具有可比性的。
二、研究对象的临床生化指标
病例组体质指数显著高于对照组，从各生化指标水平来看，病例组血清总胆固醇、甘油三酯显著高于对照组，而高密度脂蛋白则显著低于对照组，其他各项指标两组差异均无显著性(表1)。
, 百拇医药
表1 高血压病例组-对照组临床生化指标
三、AGT基因各基因型在原发性高血压病例组和对照组中的分布
, 百拇医药
由表2可见，AGT基因MM、MT、TT各基因型在病例组、对照组中的分布分别为9.1%、48.1%和42.8%;12.4%、54.6%和33.0%。病例组中TT基因型的频率显著高于对照组，而MM基因型频率显著低于对照组，如果以基因型MM为参考则暴露于MT基因型的OR值是1.68，而暴露于TT基因型的OR值为3.61。可见随着等位基因T的增加，患高血压的危险性显著增加，趋势检验：χ2=8.453，P<0.05。
四、AGT基因各等位基因在病例组和对照组中的分布
AGT基因的M、T两等位基因频率在病例组中分别为26.11%和73.89%；在对照组中分别为39.69% 和60.31%，可见，病例组T等位基因频率显著高于对照组，OR值为1.86，95%的可信区间是1.17～2.96(P<0.05)。
表2 血管紧张素原(AGT)各基因型在病例组-对照组中的分布
注：趋势检验：χ2=8.453，P=0.003 6；ACE各基因型频率符合Hardy-Weinberg 遗传平衡定律
, 百拇医药
五、高血压患者中不同AGT基因型各生化指标比较
由表3可见，以MM、MT、TT基因型的顺序，血清中甘油三酯水平逐渐增高，体质指数也逐渐增大，各组差异有显著性(P<0.05)。血清总胆固醇水平也在逐渐升高，但差异无统计学意义。
表3 不同AGT基因型的高血压患者各生化指标比较
讨 论
AGT是RAS系统中的唯一初始底物，血浆中AGT水平的高低，直接影响着RAS系统活性的强弱。动物实验表明，携带有鼠AGT基因的转基因鼠，如果AGT基因过度表达就会引起鼠的高血压，Jeunemaitre等报道AGT基因的M235T多态性与人类原发性高血压相关联。本次调查发现，AGT基因的MM、MT、TT基因型频率在高血压和正常人群中分别为9.1%、48.1%、42.8%;12.4%、54.6%、33.0%。病例组中TT基因型的频率显著高于对照组，如果以基因型MM为参考则暴露于MT基因型的OR值是1.68，而暴露于TT基因型的OR值为3.61。可见随着等位基因T的增加，患高血压的危险性显著增加，趋势检验P<0.05。提示AGT的等位基因T可能是上海市嘉定区望新乡原发性高血压的遗传易感标记，此结果与有关报道相符。, http://www.100md.com
关键词：高血压；血管紧张素原基因
高血压是一种严重影响人类健康的世界性常见慢性疾病,是心、脑、肾等器官损伤的主要危险因素,具有明显的家族聚集倾向,遗传因素与高血压发病密切相关,一般认为原发性高血压(EH)是在遗传易感性的基础上与许多环境因素的共同作用下发生的。肾素-血管紧张素系统(RAS)是调节血压和血容量的激素系统, 也是一个复杂的血压反馈系统，RAS由血管紧张素原(AGT),肾素(RESIN),血管紧张素Ⅰ,血管紧张素转化酶(ACE),血管紧张素Ⅱ(AⅡ),血管紧张素Ⅱ受体组成。其中AⅡ是强有力的血管平滑肌收缩剂，通过对周围小动脉和前毛细管平滑肌的直接作用，引起血管收缩，是形成高血压的重要原因。AGT是RAS系统中的唯一初始底物，血浆中AGT水平的高低，直接影响着RAS系统活性的强弱，AGT基因被认为是高血压的候选基因之一，它位于人染色体Iq42-43处编码区，由5个外显子和4个内含子构成，其中由于碱基的错义突变(T→C)导致了编码第235氨基酸由甲硫氨酸突变成为苏氨酸(M235T)。本研究是以上海市嘉定区望新乡人群为基础的病例-对照研究，应用PCR-RFLP技术，分析AGT的M235T多态性，目的在于探索AGT的M235T多态性与望新乡原发性高血压的关系。
, 百拇医药
材料与方法
一、研究对象
1.病例组：于1997年对上海市嘉定区望新乡进行全人群高血压普查，共查出高血压患者758人，分布于望新乡的11个自然村庄中。我们以每个村庄作为一个抽样点，按该村高血压患者名单，随机抽样(男∶女=1∶1)。根据高血压患者的既往病史，排除继发性高血压，11个村庄中共抽样高血压患者90例。
2.对照组：按性别、年龄相匹配的原则，在同一村庄中，选择与高血压患者性别相同、年龄相差小于5岁的血压水平正常的人(收缩压<140 mmHg,舒张压<90 mmHg＝,作为对照组。
二、方法
1.流行病学调查：对所有研究对象，均按统一调查表，由经过专门培训的调查员，以面对面的方式直接进行问卷调查。调查的内容包括：性别、民族、婚姻状况、文化程度、职业、经济收入、卫生知识水平、高血压及脑卒中家族史、各种危险因素(吸烟、饮酒、饮食)暴露水平等。在调查的同时进行测量身高、体重、血压水平并空腹静脉抽血5 ml，离心分离血清，血清用于作血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白等生化指标，血凝块用于基因组DNA的抽提。
, 百拇医药
2. AGT基因多态性分析：引物设计参照文献设计，AGT基因的扩增引物，由上海Sangon公司合成，引物序列如下： Primer1: 5′-CAGGGTGCTGTCCACACTGGACCCC-3′; Primer2: 5′-CCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCT-3′, PCR扩增反应总体积50 μl，反应终浓度MgCl2为2.5 mmol/L，dNTPs为100 μmmol/L，引物为1 μmmol/L，模板为3～100 ng ，Taq酶2 U。循环条件:94℃ 1 min，68℃ 1 min，72℃ 1 min。10个循环之后，按以下条件:90℃ 1 min，68℃ 1 min, 72℃ 1 min，再反应30个循环，72℃延伸10 min。反应产物用限制性内切酶TthⅢ进行酶切反应，12 h，于2.5%的琼脂糖凝胶进行电泳分离，电压20 V，时间3 h。然后在紫外光下检测，AGT的M235T基因扩增片段长度为165 bp，如果在第235位上存在T→C的突变，则扩增产物在限制性内切酶TthⅢ的作用下被切成两部分：141 bp和24 bp；如果第235位上没有发生突变，则扩增片段长度保持不变，由此产生两个等位基因T、M，分别形成三个基因型：TT(141 bp)、MT(141 bp和165 bp)、MM(165 bp)。
, 百拇医药
三、统计分析
所有资料均在EPI5软件中建立数据库，输入电脑，用SPSS软件分析。
结 果
一、研究对象的一般情况
本次研究对象共187例，男性95例，女性92例，病例组和对照组均为汉族人，其中原发性高血压患者90例(男47例，女43例)，正常对照97人(男48人，女49人)。病例组和对照组男女性别差异无显著性(χ2=0.770, P=0.410)，病例组平均年龄是(60.60±11.38)岁，对照组平均年龄是(56.77±16.26)岁，两组差异无显著性，说明病例和对照两组研究对象是具有可比性的。
二、研究对象的临床生化指标
病例组体质指数显著高于对照组，从各生化指标水平来看，病例组血清总胆固醇、甘油三酯显著高于对照组，而高密度脂蛋白则显著低于对照组，其他各项指标两组差异均无显著性(表1)。
, 百拇医药
表1 高血压病例组-对照组临床生化指标
| 生化指标 | 病例组(90例) | 对照组(97例) | P值 |
| 性别(男/女) | 47/43 | 48/49 | >0.05 |
| 年龄(岁) | 60.60±11.38 | 56.77±16.26 | >0.05 |
| 血清总胆固醇(mmol/L) | 4.44±0.76 | 4.22±0.75 | <0.05 |
| 甘油三酯(mmol/L) | 1.65±0.72 | 1.40±0.71 | <0.05 |
| 高密度脂蛋白(mmol/L) | 1.65±0.40 | 1.76±0.35 | <0.05 |
| 低密度脂蛋白(mmol/L) | 2.03±0.82 | 1.83±0.70 | >0.05 |
| 血糖(mmol/L) | 5.02±1.26 | 4.74±0.85 | >0.05 |
| 体质指数(kg/m2) | 24.29±3.38 | 21.86±2.79 | <0.001 |
, 百拇医药
由表2可见，AGT基因MM、MT、TT各基因型在病例组、对照组中的分布分别为9.1%、48.1%和42.8%;12.4%、54.6%和33.0%。病例组中TT基因型的频率显著高于对照组，而MM基因型频率显著低于对照组，如果以基因型MM为参考则暴露于MT基因型的OR值是1.68，而暴露于TT基因型的OR值为3.61。可见随着等位基因T的增加，患高血压的危险性显著增加，趋势检验：χ2=8.453，P<0.05。
四、AGT基因各等位基因在病例组和对照组中的分布
AGT基因的M、T两等位基因频率在病例组中分别为26.11%和73.89%；在对照组中分别为39.69% 和60.31%，可见，病例组T等位基因频率显著高于对照组，OR值为1.86，95%的可信区间是1.17～2.96(P<0.05)。
表2 血管紧张素原(AGT)各基因型在病例组-对照组中的分布
| 基因 , 百拇医药 型 | 病例组 | 对照组 | OR 值 | 95%CI | P值 | ||
| 例数 | 频率(%) | 例数 | 频率(%) | ||||
| MM | 5 | 9.1 | 12 | 12.4 | 1.00 | ||
| MT | 37 | 48.1 | 53 | 54.6 | 1.68 | 0.49～6.01 | >0.05 |
| TT | 48 | 42.8 | 32 | 33.0 | 3.60 | 1.04～13.12 | <0.05 |
| 合计 | 90 | 100.0 | 97 | 100.0 |
, 百拇医药
五、高血压患者中不同AGT基因型各生化指标比较
由表3可见，以MM、MT、TT基因型的顺序，血清中甘油三酯水平逐渐增高，体质指数也逐渐增大，各组差异有显著性(P<0.05)。血清总胆固醇水平也在逐渐升高，但差异无统计学意义。
表3 不同AGT基因型的高血压患者各生化指标比较
| 生化指标 | AGT 基 因 型 | |||
| MM | MT | TT | P值 | |
| 血清总胆固醇(mmol/L) | 3.86±0.99 | 4.32±0.66 | 4.59±0.77 | >0.05 |
| 甘油三酯(mmol/L) | 0.93±0.35 | 1.52±0.73 | 1.82±0.68 | <0.05 |
| 高密度脂蛋白(mmol/L) | 1.61±0.43 | 1.71±0.34 | 1.60±0.45 | >0.05 |
| 低密度脂蛋白(mmol/L) | 1.83±0.73 | 1.90±0.57 | 2.16±0.97 | >0.05 |
| 血糖(mmol/L) | 5.02±1.03 | 4.79±1.08 | 5.19±1.40 | >0.05 |
| 体质指数(kg/m2) | 23.18±0.01 | 23.20±3.01 | 25.23±3.47 | <0.05 |
AGT是RAS系统中的唯一初始底物，血浆中AGT水平的高低，直接影响着RAS系统活性的强弱。动物实验表明，携带有鼠AGT基因的转基因鼠，如果AGT基因过度表达就会引起鼠的高血压，Jeunemaitre等报道AGT基因的M235T多态性与人类原发性高血压相关联。本次调查发现，AGT基因的MM、MT、TT基因型频率在高血压和正常人群中分别为9.1%、48.1%、42.8%;12.4%、54.6%、33.0%。病例组中TT基因型的频率显著高于对照组，如果以基因型MM为参考则暴露于MT基因型的OR值是1.68，而暴露于TT基因型的OR值为3.61。可见随着等位基因T的增加，患高血压的危险性显著增加，趋势检验P<0.05。提示AGT的等位基因T可能是上海市嘉定区望新乡原发性高血压的遗传易感标记，此结果与有关报道相符。, http://www.100md.com