蛋白质芯片
现在DNA芯片的研究正值热火朝天之时。利用此高通量手段,研究者可以一次研究众多的mRNA在某种特定情况下的水平变化。但是这方法始终不能与编码的蛋白质联系起来。Science
9月8日Gavin MacBeath and Stuart Schreiber首先报道了利用蛋白质微型方阵研究蛋白质相互作用及与小分子作用的研究。
蛋白质方阵要解决的问题不外有三,一保持蛋白的活性,二保证蛋白质正确定位,三与现存的mRNA微型方阵研究工具要相兼容。他们是如何解决以上问题的呢?非常简单。
首先在点样的nanaliter级溶液中加入40%甘油,防止蛋白变性。在膜表面覆盖一层与氨基反应的试剂。这样,蛋白质的氨基末端或赖氨酸残基就会与此试剂反应而固定于膜上。每一中蛋白质都会以多种不同的方向进行定位,保证有正确的定位。然后用BSA进行封闭,降低膜上的背景,这样就可以与蛋白质进行杂交了。
Gavin MacBeath and Stuart Schreiber利用这些简单的手段制成了每平方厘米有1600个点的蛋白质微型方阵。
研究者用荧光基因标记蛋白,ATP标记的激酶底物,都可与膜上的蛋白进行反应。这些都是用小部分的膜进行实验的。最终他们将一个有1万个点的芯片与一个FRB(FKBP12–rapamycin
binding protein)结合蛋白和G-protein结合蛋白的探针进行杂交。发现在一大片G-protein点的中央,单独的一个FRB的点被区分了出来。
接下来,我们就要等待蛋白质芯片进一步开发,商业化,进入我们的实验室了。
相关文章:
ORIGINAL RESEARCH PAPER MacBeath, G. & Schreiber, S. L. Printing proteins as microarrays
for high-throughput function determination. Science 289, 1760–1763 (2000) PubMed, http://www.100md.com
9月8日Gavin MacBeath and Stuart Schreiber首先报道了利用蛋白质微型方阵研究蛋白质相互作用及与小分子作用的研究。
蛋白质方阵要解决的问题不外有三,一保持蛋白的活性,二保证蛋白质正确定位,三与现存的mRNA微型方阵研究工具要相兼容。他们是如何解决以上问题的呢?非常简单。
首先在点样的nanaliter级溶液中加入40%甘油,防止蛋白变性。在膜表面覆盖一层与氨基反应的试剂。这样,蛋白质的氨基末端或赖氨酸残基就会与此试剂反应而固定于膜上。每一中蛋白质都会以多种不同的方向进行定位,保证有正确的定位。然后用BSA进行封闭,降低膜上的背景,这样就可以与蛋白质进行杂交了。
Gavin MacBeath and Stuart Schreiber利用这些简单的手段制成了每平方厘米有1600个点的蛋白质微型方阵。
研究者用荧光基因标记蛋白,ATP标记的激酶底物,都可与膜上的蛋白进行反应。这些都是用小部分的膜进行实验的。最终他们将一个有1万个点的芯片与一个FRB(FKBP12–rapamycin
binding protein)结合蛋白和G-protein结合蛋白的探针进行杂交。发现在一大片G-protein点的中央,单独的一个FRB的点被区分了出来。
接下来,我们就要等待蛋白质芯片进一步开发,商业化,进入我们的实验室了。
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ORIGINAL RESEARCH PAPER MacBeath, G. & Schreiber, S. L. Printing proteins as microarrays
for high-throughput function determination. Science 289, 1760–1763 (2000) PubMed, http://www.100md.com
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