显微鉴定
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《中药鉴定学》
生药的显微鉴定是利用显微镜对生药及成方制剂中药味的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。是生药鉴别的重要手段之一。通常适用于性状鉴定不易识别的生药，性状相似不易区别的多来源生药、破碎生药、粉末生药以及用粉末生药制成的丸散锭丹等中药成方制剂的鉴定。
一、显微鉴定常用的方法
进行显微鉴定，首先要根据观察的对象和目的，选择具有代表性的生药，制作不同的显微制片。
(一)横切片或纵切片
选取生药适当部位，用徒手或滑走切片法制作切片，用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可选用石蜡切片法制片观察。对于根、根茎、茎藤、皮类等，一般制作横切片观察，必要时制纵切片；叶类生药可制作横切片或表面片观察，花类生药一般制作表面片观察，果实、种子类须作横切片及纵切片；木类需观察横切、径向纵切面和切向纵切三个面。
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(二)表面制片
鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药，可取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制表面片，加适宜试液，观察各部位的表面(皮)特征。
(三)粉末制片
粉末生药可选用甘油醋酸试液，水合氯醛试液或其他适当试液处理后观察。为了使细胞、组织能观察清楚，需用水合氯醛液装片透化。方法为取切片或粉末少许，置载玻片上，滴加水合氯醛液，在小火焰上微微加热透化，加热时须续加水合氯醛液至透化清晰为度。为避免放冷后析出水合氯醛结晶，可在透化后滴加甘油少许，再加盖玻片。
(四)解离组织片
如需观察细胞的完整形态，尤其是纤维、导管、管胞、石细胞等细胞彼此不易分离的组织，需利用化学试剂使组织中各细胞之间的细胞间质溶解，使细胞分离。如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在的，可用氢氧化钾法；如样品坚硬木化较多或集成群束的，可用硝铬酸法或氯酸钾法。
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(五)细胞内含物鉴定
观察生药组织切片或粉末中的后含物时，一般用甘油醋酸试液或蒸馏水装片观察淀粉粒，并利用偏振光显微镜观察未糊化淀粉粒的偏光现象；用甘油装片观察糊粉粒，加碘试液，显棕色或黄棕色，加硝酸汞试液显砖红色；如欲观察菊糖，可用水合氯醛液装片不加热立即观察。草酸钙结晶于装片中加入硫酸溶液逐渐溶解，并析出针状硫酸钙结晶；碳酸钙(钟乳体)加入稀盐酸溶解，同时有气泡产生；硅质加硫酸不溶解。粘液于装片中加钌红试液显红色。脂肪油、挥发油或树脂，加苏丹Ⅲ试液呈橘红色、红色或紫红色；加乙醇脂肪油不溶解，挥发油测溶解。
(六)细胞壁性质鉴定
1. 木质化细胞壁
装片中加间苯三酚试液及浓盐酸显红色或紫红色。
2. 木栓化或角质化细胞壁
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装片中加苏丹Ⅲ试液，呈橘红色至红色。
3. 纤维素细胞壁
装片中加氯化锌碘试液或先加碘试液再加硫酸溶液显蓝色或紫色。
4. 硅质化细胞壁 装片中加入硫酸无变化。
(七)细胞及细胞内含物的测量
观察细胞和后含物时，常需要测量其直径、长短(以mm计)作为鉴定依据之一。测量可用目镜测微尺进行。先将目锐测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的mm数，应用时将测得目的物的小格数，乘以每一小格的mm数，即得所欲测定物的大小。测量微细物体宜在高倍镜下进行，因在高倍镜下目镜测微尺的每一格的mm数较少，测得的结果比较准确，测量较大的物体可在低倍镜下进行。
随着现代科学仪器发展，电子显微镜和扫描电子显微镜已在生药显微鉴定中应用。
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二、各类生药显微鉴定通则
(一) 根类生药：
(二) 根茎类生药：
(三) 茎藤类生药：
(四) 木类生药：
(五) 皮类生药：
(六) 叶类生药：
(七) 花类生药：
(八) 果实类生药：
(九) 种子类生药：
(十)
全草类生药的药用部分可能包括植物的各种器官，进行显微鉴定可参照以上各类生药的鉴别特征。
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三、中成药的显微鉴定
中药丸散锭丹等成方制剂，大多直接用各种粉末生药配制而成。只要掌握了各个组成生药的粉末特征，就可应用粉末鉴定的方法加以鉴定。在制订新版药典药品标准和成品检验工作过程中，实践证明，显微鉴定是鉴定中成药丸散锭丹和制定品质量的科学方法之一，对保证中成药的质量，有一定的科学意义和应用价值。
中成药显微鉴定，一般根据处方，对各组成生药粉末特征作分析比较，排除某些类似的细胞组织或后含物等的干扰和影响，选取各药在镜检该成药中较具专属性的显微特征即根据处方和观察，足以说明是某药所专有的特征，作为鉴别依据。
中成药显微鉴定的制片，一般同单个粉末生药。制片时，如为散剂，可用刀尖或牙签挑取少量粉末；如为蜜丸，可将药丸切开，从切面中央挑取少量装片；如为水泛丸或片、锭，可刮取全切面取样，或用乳钵将整个丸、片研碎取样；如为以朱砂包衣的丸、丹，可将丸衣及丸心分别制片观察。
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现以八珍丸例，将在成药中观察到的各药材所具有的主要显微特征简述如下(图1-4-4)。
图1-4-4 八珍丸
1. 党参(a.乳汁管b.木栓石细胞) 2. 白术(草酸钙针晶) 3. 茯苓(a.多糖团块
b.菌丝) 4.甘草(a. 木栓细胞b.晶鞘纤维) 5.当归(纺锤形韧皮薄壁细胞，示斜向交错网状纹理)
6.白芍(草酸钙簇晶) 7.川芎(草酸钙圆簇状结晶) 8.
熟地(薄壁细胞，示核状物)
【处方组成】 党参 白术 茯苓 甘草 当归 白芍 川芎 熟地
, http://www.100md.com 【显微特征】
1. 党参 乳汁管直径8～20mm，联结成网状，含无色或淡黄色颗粒状或油滴状物，周围细胞界限不明显。木栓石细胞无色，单个散在或数个成群，多角形、斜方形或短梭形，一端或一边尖突，壁厚5～12mm，层纹不明显，纹孔较稀疏。
2. 白术 草酸钙针晶长约至31mm，不规则充塞于薄壁细胞中。木栓石细胞棕黄色，类多角形、类方形或长圆形，壁厚6～24mm，层纹可见，胞腔含棕色物或含小针晶；也有石细胞壁极厚，胞腔不明显，仅见多数细小圆纹孔。
3. 茯苓
多糖团块无色，呈不规则形颗粒状或末端钝圆的分枝状，遇水合氯醛液(加热)溶化。菌丝多无色，少数淡棕色，细长，稍弯曲，有的具分枝，直径3～10mm。
4. 甘草 纤维束无色或淡黄，纤维直径7～16mm，壁极厚，微木化；其周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁不均匀增厚，微木化，结晶直径7～17mm。
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5. 当归 纺锤形韧皮薄壁细胞无色或淡黄色，直径12～24mm，壁略厚，非木化，表面具微细斜向交错的网状纹理，有的具菲薄微弯的横隔。
6. 白芍 草酸钙簇晶直径4～3mm，含晶细胞小，类方形常纵向排列成行。含糊化淀粉粒细胞无色，类圆形、类长圆形、类方形或类多角形，完整者直径39～111mm，长约至136mm，淀粉粒多糊化，有的轮廓隐约可见。
7. 川芎 草酸钙结晶圆簇状或相互散离，直径5～20mm，存在于长形皱缩的薄壁细胞中。
8. 熟地
薄壁组织淡棕色或黑棕色，细胞大多皱缩，含有深棕色类圆形核状物，直径约至14mm。, 百拇医药
一、显微鉴定常用的方法
进行显微鉴定，首先要根据观察的对象和目的，选择具有代表性的生药，制作不同的显微制片。
(一)横切片或纵切片
选取生药适当部位，用徒手或滑走切片法制作切片，用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可选用石蜡切片法制片观察。对于根、根茎、茎藤、皮类等，一般制作横切片观察，必要时制纵切片；叶类生药可制作横切片或表面片观察，花类生药一般制作表面片观察，果实、种子类须作横切片及纵切片；木类需观察横切、径向纵切面和切向纵切三个面。
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(二)表面制片
鉴定叶、花、果实、种子、全草等类生药，可取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制表面片，加适宜试液，观察各部位的表面(皮)特征。
(三)粉末制片
粉末生药可选用甘油醋酸试液，水合氯醛试液或其他适当试液处理后观察。为了使细胞、组织能观察清楚，需用水合氯醛液装片透化。方法为取切片或粉末少许，置载玻片上，滴加水合氯醛液，在小火焰上微微加热透化，加热时须续加水合氯醛液至透化清晰为度。为避免放冷后析出水合氯醛结晶，可在透化后滴加甘油少许，再加盖玻片。
(四)解离组织片
如需观察细胞的完整形态，尤其是纤维、导管、管胞、石细胞等细胞彼此不易分离的组织，需利用化学试剂使组织中各细胞之间的细胞间质溶解，使细胞分离。如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在的，可用氢氧化钾法；如样品坚硬木化较多或集成群束的，可用硝铬酸法或氯酸钾法。
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(五)细胞内含物鉴定
观察生药组织切片或粉末中的后含物时，一般用甘油醋酸试液或蒸馏水装片观察淀粉粒，并利用偏振光显微镜观察未糊化淀粉粒的偏光现象；用甘油装片观察糊粉粒，加碘试液，显棕色或黄棕色，加硝酸汞试液显砖红色；如欲观察菊糖，可用水合氯醛液装片不加热立即观察。草酸钙结晶于装片中加入硫酸溶液逐渐溶解，并析出针状硫酸钙结晶；碳酸钙(钟乳体)加入稀盐酸溶解，同时有气泡产生；硅质加硫酸不溶解。粘液于装片中加钌红试液显红色。脂肪油、挥发油或树脂，加苏丹Ⅲ试液呈橘红色、红色或紫红色；加乙醇脂肪油不溶解，挥发油测溶解。
(六)细胞壁性质鉴定
1. 木质化细胞壁
装片中加间苯三酚试液及浓盐酸显红色或紫红色。
2. 木栓化或角质化细胞壁
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装片中加苏丹Ⅲ试液，呈橘红色至红色。
3. 纤维素细胞壁
装片中加氯化锌碘试液或先加碘试液再加硫酸溶液显蓝色或紫色。
4. 硅质化细胞壁 装片中加入硫酸无变化。
(七)细胞及细胞内含物的测量
观察细胞和后含物时，常需要测量其直径、长短(以mm计)作为鉴定依据之一。测量可用目镜测微尺进行。先将目锐测微尺用载台测微尺标化，计算出每一小格的mm数，应用时将测得目的物的小格数，乘以每一小格的mm数，即得所欲测定物的大小。测量微细物体宜在高倍镜下进行，因在高倍镜下目镜测微尺的每一格的mm数较少，测得的结果比较准确，测量较大的物体可在低倍镜下进行。
随着现代科学仪器发展，电子显微镜和扫描电子显微镜已在生药显微鉴定中应用。
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二、各类生药显微鉴定通则
(一) 根类生药：
(二) 根茎类生药：
(三) 茎藤类生药：
(四) 木类生药：
(五) 皮类生药：
(六) 叶类生药：
(七) 花类生药：
(八) 果实类生药：
(九) 种子类生药：
(十)
全草类生药的药用部分可能包括植物的各种器官，进行显微鉴定可参照以上各类生药的鉴别特征。
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三、中成药的显微鉴定
中药丸散锭丹等成方制剂，大多直接用各种粉末生药配制而成。只要掌握了各个组成生药的粉末特征，就可应用粉末鉴定的方法加以鉴定。在制订新版药典药品标准和成品检验工作过程中，实践证明，显微鉴定是鉴定中成药丸散锭丹和制定品质量的科学方法之一，对保证中成药的质量，有一定的科学意义和应用价值。
中成药显微鉴定，一般根据处方，对各组成生药粉末特征作分析比较，排除某些类似的细胞组织或后含物等的干扰和影响，选取各药在镜检该成药中较具专属性的显微特征即根据处方和观察，足以说明是某药所专有的特征，作为鉴别依据。
中成药显微鉴定的制片，一般同单个粉末生药。制片时，如为散剂，可用刀尖或牙签挑取少量粉末；如为蜜丸，可将药丸切开，从切面中央挑取少量装片；如为水泛丸或片、锭，可刮取全切面取样，或用乳钵将整个丸、片研碎取样；如为以朱砂包衣的丸、丹，可将丸衣及丸心分别制片观察。
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现以八珍丸例，将在成药中观察到的各药材所具有的主要显微特征简述如下(图1-4-4)。
图1-4-4 八珍丸
1. 党参(a.乳汁管b.木栓石细胞) 2. 白术(草酸钙针晶) 3. 茯苓(a.多糖团块
b.菌丝) 4.甘草(a. 木栓细胞b.晶鞘纤维) 5.当归(纺锤形韧皮薄壁细胞，示斜向交错网状纹理)
6.白芍(草酸钙簇晶) 7.川芎(草酸钙圆簇状结晶) 8.
熟地(薄壁细胞，示核状物)
【处方组成】 党参 白术 茯苓 甘草 当归 白芍 川芎 熟地
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1. 党参 乳汁管直径8～20mm，联结成网状，含无色或淡黄色颗粒状或油滴状物，周围细胞界限不明显。木栓石细胞无色，单个散在或数个成群，多角形、斜方形或短梭形，一端或一边尖突，壁厚5～12mm，层纹不明显，纹孔较稀疏。
2. 白术 草酸钙针晶长约至31mm，不规则充塞于薄壁细胞中。木栓石细胞棕黄色，类多角形、类方形或长圆形，壁厚6～24mm，层纹可见，胞腔含棕色物或含小针晶；也有石细胞壁极厚，胞腔不明显，仅见多数细小圆纹孔。
3. 茯苓
多糖团块无色，呈不规则形颗粒状或末端钝圆的分枝状，遇水合氯醛液(加热)溶化。菌丝多无色，少数淡棕色，细长，稍弯曲，有的具分枝，直径3～10mm。
4. 甘草 纤维束无色或淡黄，纤维直径7～16mm，壁极厚，微木化；其周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁不均匀增厚，微木化，结晶直径7～17mm。
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5. 当归 纺锤形韧皮薄壁细胞无色或淡黄色，直径12～24mm，壁略厚，非木化，表面具微细斜向交错的网状纹理，有的具菲薄微弯的横隔。
6. 白芍 草酸钙簇晶直径4～3mm，含晶细胞小，类方形常纵向排列成行。含糊化淀粉粒细胞无色，类圆形、类长圆形、类方形或类多角形，完整者直径39～111mm，长约至136mm，淀粉粒多糊化，有的轮廓隐约可见。
7. 川芎 草酸钙结晶圆簇状或相互散离，直径5～20mm，存在于长形皱缩的薄壁细胞中。
8. 熟地
薄壁组织淡棕色或黑棕色，细胞大多皱缩，含有深棕色类圆形核状物，直径约至14mm。, 百拇医药