诊断流腮和鉴定流腮病毒的血凝抑制试验应怎样做?
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血凝抑制试验是一种操作简单、出结果快、费用低的实验室诊断方法。它既可用于鸡胚单膜腔分离的流腮毒株鉴定；还可用于患者早期和恢复期双份血清结果的判定。
(1)取材：①血凝素、受染鸡胚的羊水或尿事囊液(适应殊)作血凝素。若血凝素滴度不高，可采用吐温—80及乙醚处理来提高血凝滴度。方法是于病毒液中加入最终浓度0.1计的吐温—80振动5分钟，再加1/2体积的乙醚，室温振动5小时，经离心沉淀将血凝素与乙醚分开。再向血凝素中吹气排尽乙醚，这样处理可提高血凝滴度2—4倍。②红细胞一般采用1%鸡红细胞，但豚鼠红细胞亦可。
(2)鉴定病毒的血抑试验：采用1：160(4个血凝单位)的受染鸡胚的羊水或尿囊液，和4单位血凝抑制抗体等体积混合。37℃结合l小时，加1%鸡红细胞，置室温l一2小时判定结果，同时设血凝素量及红细胞对照管。为排除与副流感病毒抗原之间的交叉反应，用副流感病毒抗血清进行交叉血凝抑制试验。
双份血清的试验方法，患者血清经56℃ 30分钟灭活，血清和血凝素混合后置37C结合1小时，加红细胞后放室温l一2小时后判定结果。
(3)血凝滴度的判定：如病毒液稀释到1：320时出现“++++”凝集，1：640时“++”凝集，1：1280时不出现凝集，该病毒液的血凝滴度为640，它的一个血凝单位为1：640。进行血凝抑制测定时抗原用4个血凝单位即1：160。血抑效价以完全掏血凝出现的血清最高稀释度倒数。如1：80稀释的血清孔不出现凝集(血凝全被抑制)，1：160的孔出现“++”凝集(50%血凝被抑制)，1：320的孔出现“++++”(血凝全不被抑制)，则该血清对测定病毒的血抑效价为160。一般来讲，血抑效价≥20才可以认为是特异性抑抑制，＜20，＞5者为可疑，＜5为阴性。
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(1)取材：①血凝素、受染鸡胚的羊水或尿事囊液(适应殊)作血凝素。若血凝素滴度不高，可采用吐温—80及乙醚处理来提高血凝滴度。方法是于病毒液中加入最终浓度0.1计的吐温—80振动5分钟，再加1/2体积的乙醚，室温振动5小时，经离心沉淀将血凝素与乙醚分开。再向血凝素中吹气排尽乙醚，这样处理可提高血凝滴度2—4倍。②红细胞一般采用1%鸡红细胞，但豚鼠红细胞亦可。
(2)鉴定病毒的血抑试验：采用1：160(4个血凝单位)的受染鸡胚的羊水或尿囊液，和4单位血凝抑制抗体等体积混合。37℃结合l小时，加1%鸡红细胞，置室温l一2小时判定结果，同时设血凝素量及红细胞对照管。为排除与副流感病毒抗原之间的交叉反应，用副流感病毒抗血清进行交叉血凝抑制试验。
双份血清的试验方法，患者血清经56℃ 30分钟灭活，血清和血凝素混合后置37C结合1小时，加红细胞后放室温l一2小时后判定结果。
(3)血凝滴度的判定：如病毒液稀释到1：320时出现“++++”凝集，1：640时“++”凝集，1：1280时不出现凝集，该病毒液的血凝滴度为640，它的一个血凝单位为1：640。进行血凝抑制测定时抗原用4个血凝单位即1：160。血抑效价以完全掏血凝出现的血清最高稀释度倒数。如1：80稀释的血清孔不出现凝集(血凝全被抑制)，1：160的孔出现“++”凝集(50%血凝被抑制)，1：320的孔出现“++++”(血凝全不被抑制)，则该血清对测定病毒的血抑效价为160。一般来讲，血抑效价≥20才可以认为是特异性抑抑制，＜20，＞5者为可疑，＜5为阴性。
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