第三节 抗血清的鉴定和保存
一、抗血清的鉴定
动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。
(一)双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性
按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物(如抗原来自动物血清则放相应的混合血清)和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散18～24h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若与粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明该动物已产生单价特异性抗体；不出现沉淀线，表明示免疫成功。若与纯化抗原出现一条，而与粗抗原出现多条线，且其中一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，也是成功的免疫，待取血后将杂抗体吸收去除，可以成为单价特异性抗体。
(二)双向免疫扩散法则定抗血清效价
测定抗血清效价有两种稀释方法：一是稀释抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释，分别与一个浓度的纯抗原反应；另一是稀释抗原，即把抗原作对倍稀释或按浓度(如mg/ml)进行稀释，分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验(称为棋盘滴定)，见表10-1。
表10-1抗血清效价测定
抗原 |
抗血清 | |||||||
| 不稀释 |
1/2 |
1/4 |
1/8 |
1/16 |
1/32 |
1/64 |
1/128 | |
不稀释 |
+++ |
+++ |
+++ |
++ |
++ |
+ |
- |
- |
1/2 |
+++ |
+++ |
+++ |
++ |
++ |
+ |
- |
- |
1/4 |
+++ |
+++ |
+++ |
++ |
++ |
+ |
- |
- |
1/8 |
+++ |
++ |
++ |
++ |
+ |
+ |
- |
- |
1/16 |
++ |
++ |
++ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
1/32 |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
1/64 |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
表中+～+++代表出现沉淀线的浓度，如1:8抗体出现中等浓度沉淀线，与1:16、1:32则出现较弱的沉淀线。按表10-1的互为比例稀释后确定抗血清的效价为1:32，最佳抗原浓度为1:16。效价在1:8以上即可采用于一般试验。
(三)其他鉴定方法
有时，因抗原特殊，沉淀线不易出现，特别是制备的抗血清将用于某种试验时，则考虑用其它方法(如血凝试验、抑制试验、中和试验、放射免疫技术等)测定其效价。
二、抗血清的保存
抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存，将抗血清清除菌后，液体状态保存于普通冰箱，可以存放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。保存时要加入0.1%～0.2%NaN3以防腐。如若加入半量的甘油则保存期可延长。第二种方法是低温保存，放在-20～-40，一般保存5年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。第三种方法是冰冻干燥，最后制品内水分不应高于0.2%，封装后可以长期保存，一般在冰箱中5～10年内效价不会明显降低。
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