第二节 甘油三酯测定
甘油三酯又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，相应称为甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)和甘油一酯(MG)。血清中90%～95%是TG，TG中结合的脂肪酸分别为油酸(44%)、软脂酸(26%)、亚油酸(16%)和棕榈油酸(7%)。
血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。
血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精(软脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)为标准，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。
1.化学法
化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲掌显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，本法准确性差，一般很少用。
2.酶法测定
酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量等二个阶段。目前常规检测应用的方法有甘油激酶(glycerol kinase,GK)法和甘油氧化酶(glycerol Oxidase,GOD)法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。
一、乙酰丙酮法
1.原理
血清中加入异丙醇抽提取甘油三酯，经KOH皂化使甘油三酯水解生成甘油及脂肪酸，甘油在过碘酸作用下氧化成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色的3，5二乙酰，1，4二氢甲基吡啶，其颜色的深浅与甘油三酯的含量成正比，420nm测定定量。该法可用于基本功训练及组织细胞TG的提取测定。
2.试剂组成
代号 |
种类 |
浓度 |
组成 |
贮2-8℃ |
有效时间 |
R1 |
抽提液 |
(CH3)CHOH(A.R)重蒸馏 |
|||
R2 |
吸附剂 |
氧化铝，水洗除去微细颗粒， |
闭封 |
一周 | |
R3 |
皂化剂 |
5% |
KOH 5g+H2O→100ml |
||
R4 |
醋酸溶液 |
2mol/L |
CH3COOH 11.5ml+H2O→100ml |
||
R5 |
过碘酸钠 |
0.05mol/L |
NaIO4 1.07g+H2O→100ml |
||
R6 |
氧化剂 |
R4 1体积+R5 1体积 |
一周 | ||
R7 |
醋酸铵液 |
CH3COONH2 15.4g+H2O→100ml |
|||
R8 |
显色剂 |
CH3COCH2COCH3 0.75ml+R-1 |
|||
| 40ml+R-7 100ml+R-4 80ml | |||||
| R9 |
参考液 |
2mg/dl |
三油酸甘油酯 2mg+R-1→100ml(TG100mg/dl) |
3.操作
按图15-3操作。
图15-3 血清甘油三酯(乙酯丙酮法)测定操作图
4.计算
血清TG浓度=ESA/EST×1.13(mmol/L)
二、酶法(GK-GPO-POD比色法)
血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下，生成3-磷酸甘油，尔后，在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2，H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下，生成红色亚醌化合物(quinoneimine)，比色(500nm)，其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。
(一)手工测定法
1.试剂组成
代号 |
种类 |
浓度 |
贮存2～8℃ |
R1 |
磷酸甘油氧化酶 |
≥3.0KU/L |
冷藏 |
(A液) |
抗坏血酸氧化酶 |
≥1.0KU/L |
|
甘油激酶 |
≥0.7KU/L |
||
4-氨基安替比林 |
80mg/L |
||
R2 |
脂蛋白脂酶 |
≥2.0KU/L |
冷藏 |
过氧化物酶 |
≥10KU/L |
||
ESPAS |
300mg/L |
||
R3(参考液) |
甘油酸三脂 |
200mg/dl(2.26mmol/L) |
冷藏 |
*：一般采用商品试剂盒
图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图
2.操作
按图15-4操作。
3.计算
血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)
(二)生化分析仪检测
全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。
1.试剂
A液：GK，GPO，4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。
B液：POD，Lipase,ESPAS等。
标准液：甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。
2.上机参数
名称 |
参数 |
方法 |
终点法 |
波长 |
双波长(540nm 700nm) |
试剂A反应时间 |
2～3min |
试剂B反应时间 |
5～6min |
反应温度 |
37℃ |
样本用量 |
4μl |
试剂A用量 |
200μl |
试剂B用量 |
100μl |
单位 |
mmol/L |
3.操作过程
4.计算
以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算，自动打印结果。
5.注意事项
①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。
②试剂在有效期内2～8℃避光保存。
③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。
校对时间：1999-12-16 马海茸
, 百拇医药