第三节 磷脂测定
磷脂(PL)并非单一的化合物，其分子内含有磷酸基的多种脂质，磷脂是这一类物质的总称。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%；②磷脂酰乙醇胺等，占2%；③鞘磷脂，占20%。
血清PL定量方法包括测定无机磷的化学法和酶法两大类。
1.化学测定法过程包括：①抽提分离；②灰化；③显色、比色的三个阶段。
2.酶测定法
可分别利用磷脂酶A、B、C、D等4种酶作用，加水分解，测定其产物，对PL进行定量。一般多采用磷脂酶D(PL-D)进行定量。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆碱的磷脂，这三种磷脂约占血清总磷脂的95%。本法快速准确，便于自动生化分析仪器进行批量检测。
一、化学法(消化法)
1.原理
以有机混合试剂(无水乙醇、乙醇)抽提血清中磷脂，再用浓硫酸和过氯酸消化抽提液中的脂类和其他有机化合物，用硝酸盐与磷反应生成有色化合物，比色定量。本法可用组织细胞磷脂的抽提定量。
2.试剂组成
代号 |
种类 |
浓度 |
组成 |
贮2～8℃ |
有效时间 |
R-1 |
抽提液 |
无水乙醇：乙醇=3:1 |
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R-2 |
消化液 |
用1L密器，加水约500ml，置冷水中缓缓加浓硫酸280ml到水中，冷却后加过氯酸(70%，AR)65ml，混匀，加蒸馏水至1000ml |
|||
R-3 |
显色剂 |
钼酸铵(A.R)2.5g+无水醋酸钠8.2g，加蒸馏水溶解并稀释至1L，监用时取此液体9份加新配的VitC液(10%)1份，混合即可 |
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R-4 |
参考液(贮存液)1mg/L |
称干燥KH2PO(A.R)0.4393g,溶于蒸馏水中，转移至100ml的容量中，用蒸馏水加至刻度。 |
冷藏 | ||
R-5 |
参考应用液 |
0.04mg/ml |
取贮存液2ml加至50ml容量中，加水至刻度 |
冷藏 |
3.操作
按图15-5操作。
4.计算
血清脂性磷浓度=ESA/EST×10(mg/dl)
血清磷脂(以卵磷脂计)=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)
图15-5 血清磷脂测定(消化法)操作图*采用带塞玻璃试管
二、酶 法
1.原理
磷脂酶D因特异性不高，能水解血清中卵磷脂，溶血卵磷脂和神经磷脂(三者占血清总磷脂的95%)，释放出胆碱，胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H2O2，在过氧化物酶作用下，H2O2，4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物，其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比，在500nm波长下比色计算结果为：
2.试剂
(1)酶应用液(参考配方)：每100ml Tris-His缓冲液(50mmol/L，pH7.8)中含：
磷脂酶D |
45U |
胆碱氧化酶 |
100U |
过氧化物酶 |
220U |
4-氨基安替比林 |
12mg |
酚 |
20mg |
CaCl2·2H2O |
8mg |
TritonX-100 |
0.2g |
(2)标准液：纯卵磷脂，临用前配制，5mg/2.5ml蒸馏水(含TritonX-1000.5%)
3.操作
(1)标本采集：空腹12h抽静脉血，不抗凝，分离血清或抗凝血分离血浆。
(2)在3.0ml酶应用液中加入血清(浆)20μl，标准管加标准液20μl，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后，波长500nm，比色，空白管液调零。
4.计算
血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200
血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292
校对时间：1999-12-16 马海茸
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