聚合酶链反应检测幽门螺杆菌70例
1990年Hoshina等首行应用聚合酶链反应(PCR)成功检出胃粘膜活检标本内的Hp。我院从今年1995的1月份开始，在短短3个月中对70例胃镜受检者应用PCR检测幽门螺杆菌，并采用目前广泛使用的快速尿素酶试验作了对比，收到满意效果，报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
①取材：对70例胃镜受检者(十二指肠球部溃疡31例，胃溃疡2例，胃癌2例，各类胃炎28例，十二指肠球炎7例)均在幽门前区钳取组织1～2块，供尿素酶试验和PCR检测。②药盒深圳爱利国公司提供的1min快速尿素酶试剂检测Hp，在1min～5min内观看结果。厦门长城生物工程有限公司提供的幽门螺杆菌DNA PCR诊断试剂盒，测Hp保守区的DNA片断，扩增产物为456bp，一步法提取模板，直接扩增，无需分装。③样品处理将小块胃粘膜研磨后用生理盐水洗涤。1.5万r/min离心5min，去上清，沉淀用50μl样品处理液混悬，96℃加热10min，1.5万r/min离心5min，取上清8μl加入反应管内混匀，置PCR仪，同时和阳性和阴性对照。④PCR扩增94℃加热300S后进入循环，94℃—30s，55℃—30s，72℃—60s，共循环36次，最后72℃保温300s。取后应产物10μl直接点样于含溴乙锭琼脂糖胶板孔中，电泳80V，10min～25min停止电泳，于紫外检测仪观看结果。
表1 两种方法检测结果比较
|
n |
PCR |
尿素酶试验 |
|
35 |
+ |
+ |
|
17 |
+ |
- |
|
9 |
- |
- |
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5 |
- |
弱阳 |
|
3 |
+ |
弱阳 |
|
3 |
- |
+ |
3 讨论
在众多检测Hp感染方法中，PCR具有高效、特异、敏感、简便、快速和自动化等优点，可检出少至100个细菌的水平，如取材不便还可从胃液和唾液中检测Hp，是我国进行流行病学研究的理想方法；快速尿素酶观察的时间尚需作严格规定，过快可致假阴性，过长又易产生尿素酶污染菌致假阳性，认为本组织果不能排除此类因素。
李延年 刘先贤
武汉市东西湖区人民医院消化内科(430071)
2000/06/27 姬颖 校对
, 百拇医药