<冻干黄热活疫苗制造及检定规程
<本品系用减毒的黄热病毒17D株接种鸡胚，经研磨、离心，取上清液冻干制成<。专供进入或经过黄热流行地区的人员预防黄热之用。
1 <毒种
1<.1 <毒种来源
减毒黄热病毒17D株。
1.2 毒种检定
1.2.1 无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。
1.2.2 纯毒试验
用已知黄热病毒免疫血清做中和试验，证明其为黄热病毒。
1.2.3 猴体<安全及效力试验
<取冻干黄热17D<毒种，加无菌生理盐水恢复其原液量，接种无黄热病毒中和抗体之恒河猴10<只，每只脑内注射0.25ml<(50000<个小白鼠LD50<)。注射后第2<、4<、6<日各采血1<次，分离血清，分别做10<倍系列稀释。以原血清及10-1<～10-3<各稀释度的血清分别脑内注射体重10～12g小白鼠6只，每只0.03ml，观察21天，检查病毒量，LD50均不得超过Log2(4天以内死亡的小白鼠不计算在内)。猴子经注射后2～4周，再采血1次，分离血清，做中和抗体测定。10只猴中至少要有9只血清表现阳性中和反应。在1个月的观察期中，发现脑炎症状或因而死亡者不得超过1只猴。
<1.3 毒种保存
<原毒种和生产毒种批均应冻干后真空封口，保存于-70℃以下。
<1.4 毒种传代和生产毒种的制备
<取毒种3支，启开安瓿后立即以稀释液(不应含有任何人体蛋白和外源血清或抗体)溶化。待全部溶化后接种于7日龄鸡胚卵黄囊，每胚0.2ml。分2组进行，每组不得少于10胚，置37.5～38℃培育。70～80小时按组收取活存鸡胚，每组不得少于4胚。去眼后分组混合研磨，加稀释液做成悬液，经2000r/min离心10分钟，吸取上清液，在鸡胚中传代，并抽样按《生物制品无菌试验规程》进行无菌试验。按同法连续传递2代，传代时可不等无菌试验结果，第3代毒种的鸡胚收获后，吸取容器内液体做无菌试验(方法同上)，并将鸡胚冻存于-40℃以下。将无菌试验阴性之鸡胚取出融化。按每胚加入1ml<稀释液研磨，经2000r/min<离心10<分钟，吸取上清液，加入稀释液稀释5<倍后置冰浴中待用。同时做毒力滴定。此代即为生产毒种。
2 <疫苗制造
2<.1 <接种鸡胚
<用7日龄鸡胚，每胚接种适当稀释度毒种液0.1～0.2ml于卵黄囊，接种后滴蜡封口。
<2.2 培育
<接种后37.5～38℃培育，70～80小时开始收获。
<2.3 收获
<收获时剔去死胚，分组收获活存鸡胚，去眼，装入大管中，逐管吸取管内液体做无菌试验，在操作过程中盛鸡胚之大管应置冰浴中保冷，收获完毕置-40℃冻存。
<2.4 研磨、离心
<2.4.1 研磨
<剔除洒菌鸡胚，将冰冻鸡胚大管置冷水中融化，倒入研磨桶内，按每胚1ml加入灭菌双蒸水，用电动研磨机8000r/min研磨3分钟。
<2.4.2 离心，收取上清液
<将研磨后的鸡胚悬液以减压虹吸法分装于500ml瓶中，塞以胶塞，用2000r/min离心30分钟。离心应在2～5℃进行。
<收取上清液，每批装一个球瓶，换以胶塞，保存在冰浴中。
<2.5 半成品检定
<2.5.1 无菌试验
<按《生物制品无菌试验规程》进行
<2.5.2 冻干前病毒滴定
<吸取球瓶中样品，作10倍系列稀释。取10-1～10-6之病毒液，每个稀释度用体重10～12g小白鼠6只，每只脑内注射0.03ml，接种部位忌用碘酒消毒，观察21天，计算LD50。
<2.6 分装
<疫苗保存在冰浴中进行分装，每安瓿分装量为0.5ml(10人份)。分装后将盛安瓿之金属盒放入-40～-50℃预冻2小时。
<2.7 冻干
<全部冻干过程为15～17小时，最后5小时升温20～25℃，最高不得超过25℃<。冻干后安瓿真空封口。
3 <成品检定
3<.1 <物理检查
<外观为略带粉红色的疏松体，水分不应超过3%<(g/g<)，加入稀释液应迅速溶解。
3<.2< <无菌试验
<按《生物制品无菌试验规程》进行。
<3.3 猴体安全及效力试验
<方法及要求见1.2.3项，如生产毒种做过猴体安全及效力试验则疫苗可免做。
<3.4 豚鼠安全试验
<按原分装量加入生理盐水溶解疫苗，用体重300～500g豚鼠2只，试验前2～3天每天量体温、称体重。然后每只腹腔注射0.5ml，观察7天，每天量体温，应无病症发生。如2只豚鼠均有显著反应(体温超过40℃，体重减轻)或死亡，则该批疫苗应废弃；如有1只豚鼠有症症发生，可再用3只豚鼠重试，重试中如有2只以上豚鼠发病时，判为不合格，制品应废弃；如有1只发病，则再重试，仍有发病则判为不合格，制品应废弃。
<3.5 病毒滴定
<同半成品检定。每只小白鼠脑内注射0.03ml。病毒滴度应≥3.66LogLD50。
<3.6 稳定性试验
<由每批疫苗成品取3安瓿，置37℃2周，滴度下降不应超过1Log。
<3.7 鉴别试验
<每亚批成品应按1.2.2项进行鉴别试验。
<3.8 稀释液
<氯化钠注射液，其质量应符合《中国药典》规定。
4 <保存与效期
<应保存于-20<℃，自干燥之日起效期为1<年半，如保存于2<～8<℃，效期为6<个月。
<冻干黄热活疫苗使用说明书
<本品系用减毒的黄热病毒17D株接种鸡胚，经研磨、离心，取上清液冻干制成，为略带粉红色的疏松体。用于预防黄热。
<接种对象
<进入或经过黄热流行地区的人员。
<用法
1<.按标签标明的疫苗量，加10<倍量的氯化钠注射液，混合均匀后方可进行接种。
<2.于上臂外侧三角肌附着处，皮肤经酒精消毒后皮下注射0.5ml<，一次。
<禁忌
1<.<发热及急性疾病患者。
2<.<严重心、肝、肾等慢性病患者。
<3.有过敏史，尤其对鸡蛋过敏者。
<4.孕妇。
<注意事项
1<.<启开安瓿和注射时切勿使消毒剂接触疫苗。
<2.疫苗溶解不好，安瓿有裂纹，标签不清或过期失效者均不得使用。
<3.安瓿启开后，疫苗应在1<小时内用完。
<保存
<应保存于2<～8<℃避光处或-20<℃。
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