冻干精制人白细胞干扰素制造及检定规程
本品系用特定的诱生剂诱导健康人白细胞，经提取后制成的冻干干扰素注射剂。用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗，对免疫缺陷性疾病也有一定疗效。
<1 制造
<1<.1制造要求
1.1.1 白细胞
献血员供血应符合献血员体检及化验标准。一次供血不超过400ml，供全血间隔在3个月以上。
白细胞的分离，应在采血后48小时内进行。活细胞数应达到90%以上。
1.1.2 诱生病毒
采用新城疫病毒(NDV)F株或仙台病毒，经检定血凝效价达到适宜滴度，方可投产。
<1<.1<.3 培养液
采用RPMI-1640，内含适量人血清和庆大霉素或卡那霉素。不得使用β椖邗0防嗫股亍R部捎闷渌室伺嘌骸?/P>
1.1.4 制造工作室的设置，应符合工艺流程要求。冷库及各种生产用具， 必须专用，严禁与其他异种蛋白质混用。制造工作室建筑应便于清洁、消毒、防霉。在制造过程中，应采取各种有效措施，防止细菌及热原质污染。直接接触制品的用具，用后应立即洗净，用前应除热原质及灭菌处理。
1.1.5 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定，未纳入试行标准者应不低于分析纯。
1.2 制造工艺
1.2.1 诱生病毒
采用<9～<10日龄健康鸡胚，于尿囊腔接种适量病毒，<37℃培养<48～<72小时，鸡胚发育良好，病毒达到适宜滴度后，收集尿囊液，并做无菌试验，合格后合并，抽样做滴度测定，放?/20℃待用。亦可用其他适宜方法制备诱生病毒。
1.2.2 白细胞悬液
用离心法分离血浆，吸取白细胞层，用氯化铵液裂解红细胞，或用其他适宜方法分离白细胞。然后用培养液稀释，以每ml含活细胞1.0×107为宜。
1.2.3 起动与诱生
白细胞悬液中加入少许白细胞干扰素，于37℃水浴搅拌培育2小时，加入适量诱生病毒，待干扰素效价达到最高峰时，收集上清，即为粗制干扰素，置?/20℃保存。
1.2.4 纯化
在粗制干扰素(效价应在<1.0×<104IU以上)中加入硫氰酸钾盐析，然后分别在酸性和碱性条件下用乙醇分级沉淀，去除杂蛋白，再用硫氰酸钾提纯一次。亦可采用经卫生部批准的其他适宜方法。
1.2.5 溶解、透析或超滤
检查硫氰酸钾为阴性，除菌过滤后进行半成品检定。合格后方可分装、冻干。
1.2.6 半成品检定
半成品应做理化检查和比活性测定，比活性应≥1.0×106IU/mg蛋白。加入人血白蛋白作保护剂后，应做无菌试验、安全试验和热原质试验。试验方法及判定标准同成品检定。
1.2.7 冻干
按《人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程》<1.2.5项规定进行冻干，但制品温度不得超过<35℃。
<2 成品检定
<2.1 外观
本品应为白色或淡黄色疏松体，加水溶解后，为无色或淡黄色澄清液体，不得有摇不散的颗粒。
<2.2 化学检定
按《生物制品化学检定规程》进行。
2.2.1 水分测定
水分含量应≤3%(g/g)。
2.2.2 pH值
pH值应为6.8～7.8。
2.2.3 硫氰酸钾残余量测定。
取2滴干扰素原液加<2滴<9%三氯化铁溶液，不呈现微红色为合格。
<2.3 无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。每批抽样品不少于10支。
2.4 热原质试验
按《生物制品热 原质试验规程》进行。每只家兔静脉注射0.2ml(2×105IU)。判定标准按该规程4.1项要求进行。
2.5 全试验
2.5.1 豚鼠试验
用体重300～400g豚鼠2只，每只腹侧皮下注射干扰素1ml(1.0×106IU)，观察7天，动特健存，每只体重增加者为合格。如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。
2.5.2 小白鼠试验
用体重<18～<20g小白鼠<5只，每只腹腔注射干扰素<0.5ml(<5×<105IU)，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察<7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求，用<10只小白鼠复试一次，判定标准同前。
2.6 HBsAg检测
每安瓿冻干制品(1ml装)加0.1ml灭菌注射用水溶解，用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒测定，应为阴性。
2.7 效价测定
按附录方法测定，应为标示量的80%～150%。
2.8 残余牛血清蛋白含量测定
如采用组织培养法制备诱生病毒，则成品中残余牛血清蛋白含量应≤50ng/支。
<3 规格
<1.0×106IU <
4 保存与效期
应保存于10℃以下。有效期自品效价检定合格之日起为<1.5年。
附录< 干扰素效价测定
采用 1 细胞培养 将新鲜传代<24～48小时的 2 样品稀释与细胞混合 干扰素检品做<4倍系列稀释，每份检品做<6个稀释度(如<100万单位，则测<4-12～<4-7)每个稀释度加<2孔，与培养板中的细胞等量混合，置<37℃<5%CO25%CO2孵箱培养<18～<24小时。 3 加病毒 倒掉培养板中的上清液，以<100CCID50/ml的浓度加入 4 观察结果 显微镜下观察细胞病变，若病毒对照各孔细胞出现<75%～<1000%的明显病变和死亡(变圆、死亡、脱落(，而细胞对照组中的细胞仍生长良好(病变<=0)，则表明对照系统合格，结果成立。 5 计算 通常可按Reed?/ (<1)计算保护百分比 稀释度 病变平均值 (每孔) 正常平均值 (每孔) 累积数 比例 百分比 <(%<) 病变 正常 <正常/<病变+<正常 4-1 0 4 0 13 13/13 100 4-2 0 3 0 9 9/9 100 4-3 1 2 1 5 5/6 83 4-4 2 2 3 2 2/5 40 4-5 4 0 7 0 - - 4-6 4 0 11 0 - - (2)求出干扰素单位 距离比=(·高于50%的百分数-50)/(高于50%的百分数-低分50%百分数)=(83-50)/(83-40)=33/43=0.77 即此批干扰素稀释到4-3。77(1∶186)时能保护半数细胞免受攻击病毒损害。此批干扰素效价为<186单位，经国家标准品修正，得出干扰素的国际单位(以 冻干精制人白细胞干扰素使用说明书 本品系用特定诱生剂，诱导健康人白细胞，经提取后制成的冻干干扰素注射剂，为白色或淡黄色疏松体，加水溶解后为无色或淡黄色澄清液体。用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗，对某些免疫缺陷性疾病也有一定疗效。 主要用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎、流行性出血热、尖锐湿疣、毛细胞白血病、小儿婴幼儿病毒性肺炎、子宫颈炎、疱疹性角膜炎、带状疱疹、流行性腮腺炎等疾病。如与化疗、放疗配合治疗肿瘤，可改善患者血象和全身症状。 用法 本品用<1～<2ml灭菌注射用水溶解。可肌内注射或病变局部使用。肌内注射，每日<1～<2次，每次一支，连续<5～<10天为一疗程，每疗程间隔<2～<3天，或遵医嘱。 注意事项 1.对鸡蛋过敏者忌用。 2.注射本品后，一般无反应，个别患者注射后有低热反应或不同程度不适，停药后即可消失。 3.如安瓿有裂纹或溶解后有摇不散的颗粒，不可使用。 保存 应保存于<10℃以下暗处。