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编号:99135
冻干精制人白细胞干扰素制造及检定规程
http://www.100md.com 《生物制品规范》
冻干精制人白细胞干扰素制造及检定规程

冻干精制人白细胞干扰素制造及检定规程

本品系用特定的诱生剂诱导健康人白细胞,经提取后制成的冻干干扰素注射剂。用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗,对免疫缺陷性疾病也有一定疗效。

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1 制造

<1<.1制造要求

1.1.1 白细胞

献血员供血应符合献血员体检及化验标准。一次供血不超过400ml,供全血间隔在3个月以上。

白细胞的分离,应在采血后48小时内进行。活细胞数应达到90%以上。

1.1.2 诱生病毒

采用新城疫病毒(NDV)F株或仙台病毒,经检定血凝效价达到适宜滴度,方可投产。

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1<.1<.3 培养液

采用RPMI-1640,内含适量人血清和庆大霉素或卡那霉素。不得使用β椖邗0防嗫股亍R部捎闷渌室伺嘌骸?/P>

1.1.4 制造工作室的设置,应符合工艺流程要求。冷库及各种生产用具, 必须专用,严禁与其他异种蛋白质混用。制造工作室建筑应便于清洁、消毒、防霉。在制造过程中,应采取各种有效措施,防止细菌及热原质污染。直接接触制品的用具,用后应立即洗净,用前应除热原质及灭菌处理。

1.1.5 生产用水应符合饮用水标准,直接用于制品的水应符合注射用水标准。所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》规定,未纳入试行标准者应不低于分析纯。

1.2 制造工艺

1.2.1 诱生病毒

采用<9~<10日龄健康鸡胚,于尿囊腔接种适量病毒,<37℃培养<48~<72小时,鸡胚发育良好,病毒达到适宜滴度后,收集尿囊液,并做无菌试验,合格后合并,抽样做滴度测定,放?/20℃待用。亦可用其他适宜方法制备诱生病毒。

1.2.2 白细胞悬液

用离心法分离血浆,吸取白细胞层,用氯化铵液裂解红细胞,或用其他适宜方法分离白细胞。然后用培养液稀释,以每ml含活细胞1.0×107为宜。

1.2.3 起动与诱生

白细胞悬液中加入少许白细胞干扰素,于37℃水浴搅拌培育2小时,加入适量诱生病毒,待干扰素效价达到最高峰时,收集上清,即为粗制干扰素,置?/20℃保存。

1.2.4 纯化

在粗制干扰素(效价应在<1.0×<104IU以上)中加入硫氰酸钾盐析,然后分别在酸性和碱性条件下用乙醇分级沉淀,去除杂蛋白,再用硫氰酸钾提纯一次。亦可采用经卫生部批准的其他适宜方法。

1.2.5 溶解、透析或超滤

检查硫氰酸钾为阴性,除菌过滤后进行半成品检定。合格后方可分装、冻干。

1.2.6 半成品检定

半成品应做理化检查和比活性测定,比活性应≥1.0×106IU/mg蛋白。加入人血白蛋白作保护剂后,应做无菌试验、安全试验和热原质试验。试验方法及判定标准同成品检定。

1.2.7 冻干

按《人血白蛋白(低温乙醇法)制造及检定规程》<1.2.5项规定进行冻干,但制品温度不得超过<35℃。

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2 成品检定

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2.1 外观

本品应为白色或淡黄色疏松体,加水溶解后,为无色或淡黄色澄清液体,不得有摇不散的颗粒。

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2.2 化学检定

按《生物制品化学检定规程》进行。

2.2.1 水分测定

水分含量应≤3%(g/g)。

2.2.2 pH值

pH值应为6.8~7.8。

2.2.3 硫氰酸钾残余量测定。

取2滴干扰素原液加<2滴<9%三氯化铁溶液,不呈现微红色为合格。

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2.3 无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。每批抽样品不少于10支。

2.4 热原质试验

按《生物制品热 原质试验规程》进行。每只家兔静脉注射0.2ml(2×105IU)。判定标准按该规程4.1项要求进行。

2.5 全试验

2.5.1 豚鼠试验

用体重300~400g豚鼠2只,每只腹侧皮下注射干扰素1ml(1.0×106IU),观察7天,动特健存,每只体重增加者为合格。如不符合上述要求,用4只豚鼠复试一次,判定标准同前。

2.5.2 小白鼠试验

用体重<18~<20g小白鼠<5只,每只腹腔注射干扰素<0.5ml(<5×<105IU),半小时内动物不应有明显的异常反应,继续观察<7天,动物均健存,每只体重增加者判为合格。如不符合上述要求,用<10只小白鼠复试一次,判定标准同前。

2.6 HBsAg检测

每安瓿冻干制品(1ml装)加0.1ml灭菌注射用水溶解,用敏感性为1ng/ml以下的试剂盒测定,应为阴性。

2.7 效价测定

按附录方法测定,应为标示量的80%~150%。

2.8 残余牛血清蛋白含量测定

如采用组织培养法制备诱生病毒,则成品中残余牛血清蛋白含量应≤50ng/支。

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3 规格

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1.0×106IU <

4 保存与效期

应保存于10℃以下。有效期自品效价检定合格之日起为<1.5年。

附录< 干扰素效价测定

采用 <

1 细胞培养

将新鲜传代<24~48小时的2孵箱中培养<4~<6小时。

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2 样品稀释与细胞混合

干扰素检品做<4倍系列稀释,每份检品做<6个稀释度(如<100万单位,则测<4-12~<4-7)每个稀释度加<2孔,与培养板中的细胞等量混合,置<37℃<5%CO25%CO2孵箱培养<18~<24小时。

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3 加病毒

倒掉培养板中的上清液,以<100CCID50/ml的浓度加入2孵箱培养<24小时左右。

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4 观察结果

显微镜下观察细胞病变,若病毒对照各孔细胞出现<75%~<1000%的明显病变和死亡(变圆、死亡、脱落(,而细胞对照组中的细胞仍生长良好(病变<=0),则表明对照系统合格,结果成立。

<

5 计算

通常可按Reed?/

(<1)计算保护百分比

稀释度

病变平均值

(每孔)

正常平均值

(每孔)

累积数

比例

百分比

<(%<)

病变

正常

<正常/<病变+<正常

4-1

0

4

0

13

13/13

100

4-2

0

3

0

9

9/9

100

4-3

1

2

1

5

5/6

83

4-4

2

2

3

2

2/5

40

4-5

4

0

7

0

-

-

4-6

4

0

11

0

-

-

(2)求出干扰素单位

距离比=(·高于50%的百分数-50)/(高于50%的百分数-低分50%百分数)=(83-50)/(83-40)=33/43=0.77

即此批干扰素稀释到4-3。77(1∶186)时能保护半数细胞免受攻击病毒损害。此批干扰素效价为<186单位,经国家标准品修正,得出干扰素的国际单位(以 <

冻干精制人白细胞干扰素使用说明书

本品系用特定诱生剂,诱导健康人白细胞,经提取后制成的冻干干扰素注射剂,为白色或淡黄色疏松体,加水溶解后为无色或淡黄色澄清液体。用于某些病毒性疾病和肿瘤的辅助治疗,对某些免疫缺陷性疾病也有一定疗效。

主要用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎、流行性出血热、尖锐湿疣、毛细胞白血病、小儿婴幼儿病毒性肺炎、子宫颈炎、疱疹性角膜炎、带状疱疹、流行性腮腺炎等疾病。如与化疗、放疗配合治疗肿瘤,可改善患者血象和全身症状。

用法

本品用<1~<2ml灭菌注射用水溶解。可肌内注射或病变局部使用。肌内注射,每日<1~<2次,每次一支,连续<5~<10天为一疗程,每疗程间隔<2~<3天,或遵医嘱。

注意事项

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1.对鸡蛋过敏者忌用。

2.注射本品后,一般无反应,个别患者注射后有低热反应或不同程度不适,停药后即可消失。

3.如安瓿有裂纹或溶解后有摇不散的颗粒,不可使用。

保存

应保存于<10℃以下暗处。

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