新生物制品审批办法4-2
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2单克隆抗体的检定2.1免疫球蛋白类及亚类 用免疫双扩散法或其他适宜的方法测定。
2.2亲和力 用适宜的方法测定单抗的亲和常数或相对亲和力。
2.3特异性 测定单抗对靶抗原的特异性；分析单抗识别的抗原决定簇。
2.4交叉反应 按附录2要求。 免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的成年人及胎儿各脏器组织测定。来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。
2.5效价测定 用ELISA法或其他特异性方法测定。
3其他原材料3.1细胞培养用小牛血清 支原体检测应为阴性。经小量试验适于杂交瘤细胞生长。
3.2培养液 应有培养液来源，质量指标。
3.3化学试剂 规格应达到分析纯以上。
4细胞库的建立和单克隆抗体的生产 为了保证长期、稳定的生产出符合要求的高质量单抗，首先要建立高标准的细胞库。同时单抗生产场所必须符合GMP要求，洁净无污染，生产人员无传染病，不得从事其他可导致 传染原污染单抗制剂的工作；无关人员不得进入生产区内。在同一车间内，不得同时生产其他无关单抗。
4.1细胞库 建立原始细胞库和生产细胞库，几种细胞株用于同一目的生产时，应分别建立细胞库及种子批。
4.1.1原始细胞库 为杂交瘤细胞建立时较原始的细胞管，即融合细胞管、一次克隆及多次克隆的细胞管。
4.1.2种子细胞库 由原始细胞库中建株细胞扩大培养冻存的细胞种子。每一批细胞管数不应少于20支，贴上标签放入液氮中保存。种子批应进行外源因子检查，包括细菌、真菌、支原体及病毒污 染的检查。
4.1.3生产细胞库 经检定合格后的杂交瘤细胞按生产条件大量培养、冻存的细胞管为生产细胞库。每一生产细胞批细胞管数不少于10支，每次生产腹水时取生产细胞管一支复苏、扩增及生产，不 再回冻。细胞库应详细纪录存放细胞管位置、代数、管数、冻存、复苏的情况，并有专人负责。同时要进行各种外源因子检测，保证没有污染。
4.2单克隆抗体制备4.2.1小鼠腹水法4.2.1.1小鼠 制备腹水必需使用SPF级小鼠，生产用鼠必需经过检查，应无鼠源病毒污染，并有合格证明。在腹水生产过程中如发现动物不健康、咬伤、感染者均应废弃。
4.2.1.2动物实验设施 动物实验设施应有相关部门颁发的二级以上的合格证。
4.2.1.3细胞扩大培养 取生产批细胞管一支复苏，加营养液进行扩大培养，一支生产细胞只用一次，不再冻存。
4.2.1.4细胞接种 制备腹水均须在无菌条件下完成。注射杂交瘤细胞之前，每只小鼠腹腔注射液体石蜡或降植烷0.5ml。一般在1周后每只小鼠注射杂交瘤细胞1～3×106。
4.2.1.5腹水的采集 注射细胞后一般7～10天，或在小鼠濒死前一次性采集腹水，亦可多次收集。离心分离出上清即为粗提抗体，注明批号、采集日期，置-20℃保存。, 百拇医药
2.2亲和力 用适宜的方法测定单抗的亲和常数或相对亲和力。
2.3特异性 测定单抗对靶抗原的特异性；分析单抗识别的抗原决定簇。
2.4交叉反应 按附录2要求。 免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的成年人及胎儿各脏器组织测定。来源于肿瘤相关抗原的单抗应进行与各种肿瘤组织的交叉反应试验。
2.5效价测定 用ELISA法或其他特异性方法测定。
3其他原材料3.1细胞培养用小牛血清 支原体检测应为阴性。经小量试验适于杂交瘤细胞生长。
3.2培养液 应有培养液来源，质量指标。
3.3化学试剂 规格应达到分析纯以上。
4细胞库的建立和单克隆抗体的生产 为了保证长期、稳定的生产出符合要求的高质量单抗，首先要建立高标准的细胞库。同时单抗生产场所必须符合GMP要求，洁净无污染，生产人员无传染病，不得从事其他可导致 传染原污染单抗制剂的工作；无关人员不得进入生产区内。在同一车间内，不得同时生产其他无关单抗。
4.1细胞库 建立原始细胞库和生产细胞库，几种细胞株用于同一目的生产时，应分别建立细胞库及种子批。
4.1.1原始细胞库 为杂交瘤细胞建立时较原始的细胞管，即融合细胞管、一次克隆及多次克隆的细胞管。
4.1.2种子细胞库 由原始细胞库中建株细胞扩大培养冻存的细胞种子。每一批细胞管数不应少于20支，贴上标签放入液氮中保存。种子批应进行外源因子检查，包括细菌、真菌、支原体及病毒污 染的检查。
4.1.3生产细胞库 经检定合格后的杂交瘤细胞按生产条件大量培养、冻存的细胞管为生产细胞库。每一生产细胞批细胞管数不少于10支，每次生产腹水时取生产细胞管一支复苏、扩增及生产，不 再回冻。细胞库应详细纪录存放细胞管位置、代数、管数、冻存、复苏的情况，并有专人负责。同时要进行各种外源因子检测，保证没有污染。
4.2单克隆抗体制备4.2.1小鼠腹水法4.2.1.1小鼠 制备腹水必需使用SPF级小鼠，生产用鼠必需经过检查，应无鼠源病毒污染，并有合格证明。在腹水生产过程中如发现动物不健康、咬伤、感染者均应废弃。
4.2.1.2动物实验设施 动物实验设施应有相关部门颁发的二级以上的合格证。
4.2.1.3细胞扩大培养 取生产批细胞管一支复苏，加营养液进行扩大培养，一支生产细胞只用一次，不再冻存。
4.2.1.4细胞接种 制备腹水均须在无菌条件下完成。注射杂交瘤细胞之前，每只小鼠腹腔注射液体石蜡或降植烷0.5ml。一般在1周后每只小鼠注射杂交瘤细胞1～3×106。
4.2.1.5腹水的采集 注射细胞后一般7～10天，或在小鼠濒死前一次性采集腹水，亦可多次收集。离心分离出上清即为粗提抗体，注明批号、采集日期，置-20℃保存。, 百拇医药
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