新生物制品审批办法9-3
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2.非病毒型基因导入系统 非病毒型基因导入系统，均需一个能在人体细胞表达目的基因的质粒。除裸露DNA外，还须附加其它的组分进行加工，如脂质体、多肽系统、金属颗粒等。
申报的文献须包括：(1)目的基因的表达载体： 提供表达载体的来源、专利查询文献。说明载体组建的方法、步骤、限制性内切酶图谱、质粒的元件构成(包括启动子、增强子、polyA位点等)。耐药基因若属耐氨苄青霉素基因， 必须说明使用该基因的原因及以后采取确保安全性的措施。
(2)目的基因表达载体工程菌的种子细胞库、工作细胞库的建立，包括上述重组载体 转化所用菌种的来源、基因型及表型。种子细胞库的传代次数、质粒拷贝数及基因表达量等。
工作细胞库的组建包括扩增条件、传代过程中质粒的稳定性(拷贝数及表达量)、允许的传 代次数、细菌的同一性、外源因子(如杂菌、真菌、噬菌体等)的检测等。
(3)DNA制备与纯化的工艺。
(4)DNA纯度(超螺旋型的含量)，细菌基因组DNA、RNA、蛋白残留量及热原质检测结果。
(5)若用物理方法导入，须提供其详细方法、步骤，基因导入效率及其表达活性以及 导入细胞后基因的稳定性，无重排或突变的证据。
(三)治疗用制剂的制备工艺及质控： 基因治疗制剂包括直接把病毒或非病毒型基因导入系统作为制剂和通过病毒或非病毒型导入系统，把目的基因导入细胞(同体或异体)，而以细胞为最终制剂。对制备工艺及质控 必须提供标准操作流程，并按其步骤严格实施。
1.病毒型导入系统作为最终制剂： 这包括应用逆转录病毒、腺病毒或其它病毒作为目的基因的导入系统，直接用于人体的方案，须提供以下文献：(1)产病毒细胞扩增的步骤，病毒的分离、富集及纯化为制品的全部流程。
(2)最终制剂的质控应包括：a.病毒滴度及最终制剂所含病毒量b.病毒介导基因的活性c.复制型病毒的检测d.内毒素检测e.无菌试验f.过敏试验g.异常毒性试验(3)属逆转录病毒的导入系统，应特别注意复制型病毒的检测。检测的范围，包括前 述种子细胞库、工作细胞库及最后病毒制品。细胞上清液的取样应相当于培养上清液的5%。
细胞须用共培养法，产病毒细胞取样量须达每批中1%。检测方法，须用S+/L-法、标记挽 救法或RT/PCR中的两种方法。必须用阳性对照(COS4070A上清液)及阴性对照作严格定 量标化，证明其敏感性及可靠性。PCR应利用放射性同位素杂交或同样敏感的系统。, 百拇医药
申报的文献须包括：(1)目的基因的表达载体： 提供表达载体的来源、专利查询文献。说明载体组建的方法、步骤、限制性内切酶图谱、质粒的元件构成(包括启动子、增强子、polyA位点等)。耐药基因若属耐氨苄青霉素基因， 必须说明使用该基因的原因及以后采取确保安全性的措施。
(2)目的基因表达载体工程菌的种子细胞库、工作细胞库的建立，包括上述重组载体 转化所用菌种的来源、基因型及表型。种子细胞库的传代次数、质粒拷贝数及基因表达量等。
工作细胞库的组建包括扩增条件、传代过程中质粒的稳定性(拷贝数及表达量)、允许的传 代次数、细菌的同一性、外源因子(如杂菌、真菌、噬菌体等)的检测等。
(3)DNA制备与纯化的工艺。
(4)DNA纯度(超螺旋型的含量)，细菌基因组DNA、RNA、蛋白残留量及热原质检测结果。
(5)若用物理方法导入，须提供其详细方法、步骤，基因导入效率及其表达活性以及 导入细胞后基因的稳定性，无重排或突变的证据。
(三)治疗用制剂的制备工艺及质控： 基因治疗制剂包括直接把病毒或非病毒型基因导入系统作为制剂和通过病毒或非病毒型导入系统，把目的基因导入细胞(同体或异体)，而以细胞为最终制剂。对制备工艺及质控 必须提供标准操作流程，并按其步骤严格实施。
1.病毒型导入系统作为最终制剂： 这包括应用逆转录病毒、腺病毒或其它病毒作为目的基因的导入系统，直接用于人体的方案，须提供以下文献：(1)产病毒细胞扩增的步骤，病毒的分离、富集及纯化为制品的全部流程。
(2)最终制剂的质控应包括：a.病毒滴度及最终制剂所含病毒量b.病毒介导基因的活性c.复制型病毒的检测d.内毒素检测e.无菌试验f.过敏试验g.异常毒性试验(3)属逆转录病毒的导入系统，应特别注意复制型病毒的检测。检测的范围，包括前 述种子细胞库、工作细胞库及最后病毒制品。细胞上清液的取样应相当于培养上清液的5%。
细胞须用共培养法，产病毒细胞取样量须达每批中1%。检测方法，须用S+/L-法、标记挽 救法或RT/PCR中的两种方法。必须用阳性对照(COS4070A上清液)及阴性对照作严格定 量标化，证明其敏感性及可靠性。PCR应利用放射性同位素杂交或同样敏感的系统。, 百拇医药
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