中药芩矾汤洗剂外用皮肤刺激及毒性的实验研究
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2007年9月18日
王玉林 保定市第一中医院(河北 保定 071000)
摘要：目的为探讨中药芩矾汤洗剂对皮肤及肌体的毒副作用。方法：观察家兔、小鼠的正常及人造破损皮肤用药后体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现及药物涂抹部位有无红斑水肿。结果：中药芩矾汤洗剂对皮肤无刺激及任何急性毒性反应。
关键词： 芩矾汤； 外用 ； 刺激 ； 毒性反应； 实验研究
中药芩矾汤洗剂为我院中医外科在长期临床实践中创造的经验方，对下肢感染性筋膜炎有很好的疗效。文章从小鼠和家兔的正常及人造破损皮肤用药后体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现及药物涂抹部位有无红斑水肿进行实验研究。
1.实验材料
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1.1药物及制剂[1]
中药芩矾汤洗剂由枯矾、黄芩、黄柏、乳香、没药、三棱、莪术、当归、红花、蒲公英、地丁、牛膝等药物组成，常规水煎30分钟，留汁500毫升，药液过滤、灭菌作为临床用药浓度。
1.2药物浓度设定
为了满足实验的要求，把中药煎制成高浓度、中浓度、低浓度三种浓度药液。高浓度为临床用药浓度的28倍，中浓度为临床用药浓度的7倍，低浓度为临床用药浓度。
2.实验方法
2.1中药芩矾汤洗剂对家兔的皮肤刺激试验
2.1.1动物：24只新西兰家兔，体重1500-2000g,月龄3-4个月，普通级、健康无伤、白色，雌雄各半，雌者为未产和未孕。
, 百拇医药
2.1.2制剂及用品
制剂：中药芩矾汤高、中、低浓度、蒸馏水、10%硫化钠、10%水合氯醛溶液。
用品：体重计、纱布、无刺激性纱布、注射器、棉签、温水。
2.1.3实验内容：
2.1.3.1动物标记，称重
2.1.3.2随机分为高浓度组(A)中浓度组(B)低浓度组(C)阳性对照组(D)每组6只，雌雄各半。
2.1.3.3按《中药新药研究指南》[2]的要求，采用同体左右侧自身对比的方法进行实验。
先进行完整皮肤的刺激实验：将动物背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积每侧各约50cm2(约占体表面积10%)，左侧用中药，右侧用蒸馏水。脱毛24 h后用75%的乙醇消毒去毛区,A、B、C组动物左侧用对应浓度的中药煎剂1ml,浸泡纱布，再将纱布覆盖在对应的动物左侧背部，用保鲜膜覆盖，无刺激胶布固定，右侧用相同方法，24 h后用湿纱布洗去药物。D组动物左右两侧均用蒸馏水，方法同上，涂药后分笼饲养。涂药后记录1、24、48、72h、第7天每只动物体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现和涂抹部位有无红斑或水肿，计算各组动物的平均分值。
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评分标准[3]
红斑积分 水肿积分
无0 无0
勉强可见1 勉强可见1
中度2可见(边缘高出周围皮肤)2
严重3皮肤隆起约1mm，轮廓清楚3
紫红色斑并有焦痂形成4水肿隆起1mm以上，并范围扩大4
破损皮肤实验：(对完整皮肤无刺激性进行)
破损皮肤制作方法：给药前将去毛皮肤消毒，以一次性无菌注射器针头呈井字形划破整个去毛皮肤，伤口长4-5cm,间隔10cm，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度基本一致。给药方法、观察指标均同完整皮肤。
, 百拇医药
皮肤刺激强度评价标准
平均分值评价
0～0.49无刺激性
0.5-2.99轻度刺激性
3.0～5.99中度刺激性
6.0～8.0强刺激性
2.1.4结果
中药对兔皮肤刺激的平均反应值和积分总和
组别 动物数 量(只) 积分总和 平均反应值
1h24h48h72h7d1h24h48h72h7d
, 百拇医药
正常皮肤
阳性对照组6100000.170000
中药低浓度组6100000.170000
中药中浓度组6100000.170000
中药高浓度组6100000.170000
破损皮肤
阳性对照组6100000.170000
中药低浓度组61 0 0 0 00.17 0 0 0 0
中药中浓度6 1 0 0 0 00.17 0 0 0 0
, http://www.100md.com 中药高浓度组6 2 0 0 0 00.33 0 0 0 0
家兔的血常规(完整皮肤)(X(——)±S)
指标 阳性对照组 中药高浓度组 中药中浓度组 中药低浓度组
RBC(×1012/L) 5.51±0.37 5.29±0.56 5.33±0.56 5.41±0.37
WBC(×109/L) 8.73±1.61 7.86±1.70 8.02±1.43 8.46±1.07
PLT(×109/L) 41±10.38 41±9.77 43±10.08 42±9.53
, 百拇医药
家兔的血常规(破损皮肤)(X(——)±S)
指标 阳性对照组 中药高浓度组 中药中浓度组 中药低浓度组
RBC(×1012/L) 5.63±0.48 5.27±0.74 5.50±0.34 5.53±0.40
WBC(×109/L) 8.60±1.58 7.74±1.68 8.07±1.50 8.63±1.30
PLT(×109/L) 41±9.57 42±10.26 42±10.13 41±10.18
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
2.2中药芩矾汤洗剂对小鼠经皮急性毒性实验
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2.2.1方法：用健康的昆明系小鼠56只，体重20-25g，月龄2个月，雌雄各半，雌者未产或未孕。将56只小鼠随机分为4组，每组14只(雌雄各半)A中药高浓度组 B中药中浓度组 C中药低浓度组D阳性对照组
先进行完整皮肤毒性实验，给药前24小时将小鼠背部脊柱两侧去毛而不损伤皮肤，去毛面积共约为7cm2(约为体表面积10%)，给药方法同皮肤刺激试验，所不同者为脱毛区全部给药，每只1ml。对照组给予蒸馏水1ml,每只动物分笼饲养。给药24小时后用温水纱布洗去药物，并于1、24、48、72小时至第七日，每日观察并记录小鼠的体重、皮肤、毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、行为等其他中毒表现和死亡情况。
如对完整皮肤无毒性反应，再行破损皮肤的实验。去毛、给药方法，观察指标均同上，破损皮肤的制作方法同皮肤刺激实验。
2.2.2结果：
, 百拇医药 实验过程中，各组小鼠皮肤毛发、眼和粘膜、呼吸、行为动作等均无影响、无小鼠死亡，未出现任何急性毒性反应。
小鼠的体重(M±SD,单位g)
组别给药前完整皮肤给药7天后破损皮肤给药7天后
阳性对照组23.00±1.7525±1.6728±1.88
中药高浓度组23.00±1.6325±1.7027±1.79
中药中浓度组22.00±1.8024±1.9627±1.67
中药低浓度组23.00±1.6625±1.8327±1.83
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
, 百拇医药
小鼠的血常规(完整皮肤)(X(——)±S)
指标阳性对照组中药高浓度组中药中浓度组中药低浓度组
RBC(×1012/L)9.86±1.7010.73±2.6110.02±1.4310.46±1.07
WBC(×109/L) PLT(×109/L)6.51±0.376.29±0.636.45±0.586.50±0.49
80.38±16.3179.76±20.0082.26±10.1783.00±13.45
小鼠的血常规(破损皮肤)(X(——)±S)
指标阳性对照组中药高浓度组中药中浓度组中药低浓度组
RBC(×1012/L)10.01±1.5310.65±2.6010.10±1.3810.48±1.26
, 百拇医药
WBC(×109/L)6.30±0.426.27±0.506.38±0.536.51±0.44
PLT(×109/L)80.26±15.6180.17±20.3383.15±10.6183.24±12.47
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
3.结论：按《中药新药研究指南》提供的方法进行实验。家兔：完整和破损的皮肤刺激性实验，结果显示对皮肤无刺激性，连续给药1周后也得出相同的结果。小鼠：完整和破损的皮肤的急性毒性实验，结果显示未出现任何急性毒性反应。
参考文献
[1]王玉林、石焕芝.中药芩矾汤洗剂治疗下肢感染性筋膜炎16例.中国医药学刊. 2005，3(11)；98-99
[2]中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学).中华人民共和国卫生部药政管理局1994：209-212，准印证号94-0198
[3]徐叔云、如谦、陈修.药理实验方法. 第3版.北京人民卫生出版社2002..234
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摘要：目的为探讨中药芩矾汤洗剂对皮肤及肌体的毒副作用。方法：观察家兔、小鼠的正常及人造破损皮肤用药后体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现及药物涂抹部位有无红斑水肿。结果：中药芩矾汤洗剂对皮肤无刺激及任何急性毒性反应。
关键词： 芩矾汤； 外用 ； 刺激 ； 毒性反应； 实验研究
中药芩矾汤洗剂为我院中医外科在长期临床实践中创造的经验方，对下肢感染性筋膜炎有很好的疗效。文章从小鼠和家兔的正常及人造破损皮肤用药后体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现及药物涂抹部位有无红斑水肿进行实验研究。
1.实验材料
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1.1药物及制剂[1]
中药芩矾汤洗剂由枯矾、黄芩、黄柏、乳香、没药、三棱、莪术、当归、红花、蒲公英、地丁、牛膝等药物组成，常规水煎30分钟，留汁500毫升，药液过滤、灭菌作为临床用药浓度。
1.2药物浓度设定
为了满足实验的要求，把中药煎制成高浓度、中浓度、低浓度三种浓度药液。高浓度为临床用药浓度的28倍，中浓度为临床用药浓度的7倍，低浓度为临床用药浓度。
2.实验方法
2.1中药芩矾汤洗剂对家兔的皮肤刺激试验
2.1.1动物：24只新西兰家兔，体重1500-2000g,月龄3-4个月，普通级、健康无伤、白色，雌雄各半，雌者为未产和未孕。
, 百拇医药
2.1.2制剂及用品
制剂：中药芩矾汤高、中、低浓度、蒸馏水、10%硫化钠、10%水合氯醛溶液。
用品：体重计、纱布、无刺激性纱布、注射器、棉签、温水。
2.1.3实验内容：
2.1.3.1动物标记，称重
2.1.3.2随机分为高浓度组(A)中浓度组(B)低浓度组(C)阳性对照组(D)每组6只，雌雄各半。
2.1.3.3按《中药新药研究指南》[2]的要求，采用同体左右侧自身对比的方法进行实验。
先进行完整皮肤的刺激实验：将动物背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积每侧各约50cm2(约占体表面积10%)，左侧用中药，右侧用蒸馏水。脱毛24 h后用75%的乙醇消毒去毛区,A、B、C组动物左侧用对应浓度的中药煎剂1ml,浸泡纱布，再将纱布覆盖在对应的动物左侧背部，用保鲜膜覆盖，无刺激胶布固定，右侧用相同方法，24 h后用湿纱布洗去药物。D组动物左右两侧均用蒸馏水，方法同上，涂药后分笼饲养。涂药后记录1、24、48、72h、第7天每只动物体重、大小便、呼吸、饮食、全身中毒表现和涂抹部位有无红斑或水肿，计算各组动物的平均分值。
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评分标准[3]
红斑积分 水肿积分
无0 无0
勉强可见1 勉强可见1
中度2可见(边缘高出周围皮肤)2
严重3皮肤隆起约1mm，轮廓清楚3
紫红色斑并有焦痂形成4水肿隆起1mm以上，并范围扩大4
破损皮肤实验：(对完整皮肤无刺激性进行)
破损皮肤制作方法：给药前将去毛皮肤消毒，以一次性无菌注射器针头呈井字形划破整个去毛皮肤，伤口长4-5cm,间隔10cm，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度基本一致。给药方法、观察指标均同完整皮肤。
, 百拇医药
皮肤刺激强度评价标准
平均分值评价
0～0.49无刺激性
0.5-2.99轻度刺激性
3.0～5.99中度刺激性
6.0～8.0强刺激性
2.1.4结果
中药对兔皮肤刺激的平均反应值和积分总和
组别 动物数 量(只) 积分总和 平均反应值
1h24h48h72h7d1h24h48h72h7d
, 百拇医药
正常皮肤
阳性对照组6100000.170000
中药低浓度组6100000.170000
中药中浓度组6100000.170000
中药高浓度组6100000.170000
破损皮肤
阳性对照组6100000.170000
中药低浓度组61 0 0 0 00.17 0 0 0 0
中药中浓度6 1 0 0 0 00.17 0 0 0 0
, http://www.100md.com 中药高浓度组6 2 0 0 0 00.33 0 0 0 0
家兔的血常规(完整皮肤)(X(——)±S)
指标 阳性对照组 中药高浓度组 中药中浓度组 中药低浓度组
RBC(×1012/L) 5.51±0.37 5.29±0.56 5.33±0.56 5.41±0.37
WBC(×109/L) 8.73±1.61 7.86±1.70 8.02±1.43 8.46±1.07
PLT(×109/L) 41±10.38 41±9.77 43±10.08 42±9.53
, 百拇医药
家兔的血常规(破损皮肤)(X(——)±S)
指标 阳性对照组 中药高浓度组 中药中浓度组 中药低浓度组
RBC(×1012/L) 5.63±0.48 5.27±0.74 5.50±0.34 5.53±0.40
WBC(×109/L) 8.60±1.58 7.74±1.68 8.07±1.50 8.63±1.30
PLT(×109/L) 41±9.57 42±10.26 42±10.13 41±10.18
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
2.2中药芩矾汤洗剂对小鼠经皮急性毒性实验
, http://www.100md.com
2.2.1方法：用健康的昆明系小鼠56只，体重20-25g，月龄2个月，雌雄各半，雌者未产或未孕。将56只小鼠随机分为4组，每组14只(雌雄各半)A中药高浓度组 B中药中浓度组 C中药低浓度组D阳性对照组
先进行完整皮肤毒性实验，给药前24小时将小鼠背部脊柱两侧去毛而不损伤皮肤，去毛面积共约为7cm2(约为体表面积10%)，给药方法同皮肤刺激试验，所不同者为脱毛区全部给药，每只1ml。对照组给予蒸馏水1ml,每只动物分笼饲养。给药24小时后用温水纱布洗去药物，并于1、24、48、72小时至第七日，每日观察并记录小鼠的体重、皮肤、毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、行为等其他中毒表现和死亡情况。
如对完整皮肤无毒性反应，再行破损皮肤的实验。去毛、给药方法，观察指标均同上，破损皮肤的制作方法同皮肤刺激实验。
2.2.2结果：
, 百拇医药 实验过程中，各组小鼠皮肤毛发、眼和粘膜、呼吸、行为动作等均无影响、无小鼠死亡，未出现任何急性毒性反应。
小鼠的体重(M±SD,单位g)
组别给药前完整皮肤给药7天后破损皮肤给药7天后
阳性对照组23.00±1.7525±1.6728±1.88
中药高浓度组23.00±1.6325±1.7027±1.79
中药中浓度组22.00±1.8024±1.9627±1.67
中药低浓度组23.00±1.6625±1.8327±1.83
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
, 百拇医药
小鼠的血常规(完整皮肤)(X(——)±S)
指标阳性对照组中药高浓度组中药中浓度组中药低浓度组
RBC(×1012/L)9.86±1.7010.73±2.6110.02±1.4310.46±1.07
WBC(×109/L) PLT(×109/L)6.51±0.376.29±0.636.45±0.586.50±0.49
80.38±16.3179.76±20.0082.26±10.1783.00±13.45
小鼠的血常规(破损皮肤)(X(——)±S)
指标阳性对照组中药高浓度组中药中浓度组中药低浓度组
RBC(×1012/L)10.01±1.5310.65±2.6010.10±1.3810.48±1.26
, 百拇医药
WBC(×109/L)6.30±0.426.27±0.506.38±0.536.51±0.44
PLT(×109/L)80.26±15.6180.17±20.3383.15±10.6183.24±12.47
经t检验，各组与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。
3.结论：按《中药新药研究指南》提供的方法进行实验。家兔：完整和破损的皮肤刺激性实验，结果显示对皮肤无刺激性，连续给药1周后也得出相同的结果。小鼠：完整和破损的皮肤的急性毒性实验，结果显示未出现任何急性毒性反应。
参考文献
[1]王玉林、石焕芝.中药芩矾汤洗剂治疗下肢感染性筋膜炎16例.中国医药学刊. 2005，3(11)；98-99
[2]中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学).中华人民共和国卫生部药政管理局1994：209-212，准印证号94-0198
[3]徐叔云、如谦、陈修.药理实验方法. 第3版.北京人民卫生出版社2002..234
, http://www.100md.com