J i a n g x i J . Me dL a bS c i . O c t o b e r2 0 0 7 , V o l 2 5 , N o 5

    ·综 述·

    1前言

    尿液颗粒计数自动化要求标准化的参考程序提供校准

    物, 并保证其结果精确性和有效性。国际血液实验室特别工

    作组提议一份参考程序, 范围涉及尿液的红细胞、 白细胞、 管

    型成分、 鳞状上皮细胞。它以 I S O / D I S ( 国际标准化委员会) 草

    案国际标准 7 8 - 2为基础, 同时参考了 I S O / C D 1 5 1 9 5 , 考虑了

    检测物与检测要求, 在现有模式的结构基础上发展起来。

    2参考检测程序

    参考程序用来评估实验室常规测量结果, 可用于检测系

    统性能的评价; 确认不同的常规检测程序检测同一标本的可

    比性, 可为参考物和校准物定值, 也能检测病人标本中的干

    扰物,通过参考程序可大大提高检测的精确性和有效性, 要

    特别注意消除各种误差的来源[ 1 ] 。

    尿液显微镜检查被广泛应用于尿液有形成分的鉴别和

    报告, 帮助诊断和鉴别肾脏、 尿道疾病。尿沉渣浓缩后显微镜

    检查报告容易造成误差来源,并不适合尿液参考测量程序。

    报告尿液最准确的操作是采用非浓缩尿以计数池计数的方

    法直接计数, 并以颗粒数/ 升报告。 而检测技术、 计数池内小格

    不均匀、观察者的识别错误当尿液中的细胞没有聚集时, 近

    似泊松分布。当尿液中的细胞很多, 细胞与细胞、 细胞与粘

    液、 细胞与计数池壁相互粘附在一起, 造成了非随机分布等

    因素都可使仪器计数错误。

    2 . 1检测程序的要求

    检测尿液显微镜检查的参考方法必须正确鉴别颗粒成

    份和准确计数。尿液细胞计数最准确的方法是用血球仪计

    数, 可以避免细胞在低渗或碱性尿液中溶解, 测量过程中的

    误差与血球计数室的精度相关, 也与观察者正确鉴定细胞相

    关[ 2 ] , 所以要用相差显微镜来确认活体染色颗粒的成份。

    2 . 2计数变异

    计数变异是实际计数过程中存在固有误差, 主要因为假

    设颗粒随机分布, 服从泊松分布( P o i s s o nd i s t r i b u t i o n ) , 而未考

    虑凝集。根据方差等于平均数特性, 下列方程式适用:

    平均标准差 s ( x ) = x 1 / 2

    总体标准差 s ( n ) = n 1 / 2( n为总体均数)

    平均变异系数 C V ( x ) = x - 1 / 2 × 1 0 0 %

    总变异系数 C V ( n ) = n - 1 / 2 × 1 0 0 %

    如果分成 p组作为一个单元计数, x ( 平均) = n / pn =p x 则

    C V ( n ) =n - 1 / 2=( p x ) - 1 / 2=p - 1 / 2× C V ( x )

    当小颗粒集中计数, 一份标本不同单元间也要评估, 因为

    与单组相比不同组间的变异也有变异。下列表中列出 9 5 %可

    信区间的相关计数以证明颗粒计数的布精密性。

    3标本收集

    参考测量程序适合于普通标本收集, 所有生物标本均按

    传染物对待并根据相应的标准进行预防, 尿液标本在测量前

    应该保存在 4 ℃冰箱内, 如果标本是新鲜尿, 必须要文件证明

    尿液标本在 2小时内测量完毕。稀释尿( 比重< 1 . 0 1 0 ) 、 低渗尿

    ( < 3 0 0 m O s m / k g ) 、 碱性尿( p H> 7 . 5 ) 要进行对比研究, 因为这些

    尿液的红细胞和白细胞易于溶解。

    4染色

    染色并不作为尿液中颗粒计数的首选, 因为有些颗粒特

    别是红细胞在彩色背景下很模糊, 另一方面染色可以帮助区

    分其它有核细胞核以及管型。推荐适用派若宁 B或平衡染色

    法, 染后呈红蓝对比色, 染色时要注意, 用 B u r k e r 计数池和

    F u c h s - R o s e n t h a l 计数池计数, 染色前后同细胞数量可以少计

    数 2 5 %～ 5 0 %, 未染色的小上皮细胞易和白细胞混淆。

    4 . 1试剂

    2 %亚甲篮溶于 5 0 m l 实验室级水中。1 . 5 %派若宁 B溶于

    5 0 m l 水中。两试剂分别磁搅拌溶解 2 ～ 4小时。2 0 ℃隔夜过滤

    ( 1号滤纸)最后吸光度可以通过光度计来检测。波长 6 2 2 n m

    亚甲篮吸收最强, 派若宁 5 3 3 n m处吸收最强; 鉴别颗粒成份

    要用不同的波长, 使用前保存液 1 、 2按 1 : 1混匀, 原液 2 0 ℃

    条件至少下稳定 3个月;混合液 2 0 ℃可以稳定期 2 ～ 4个星

    期。常规尿液标本中可以轻松的检测到细菌和酵母等杂物。

    4 . 2染色程序

    1 : 9与尿液混匀中 ( 4 . 5 m l 尿液加入 1 0 m l 试管中,加入

    5 0 0 μ l 染液) , 染 5分钟镜下观察。

    5仪器设备

    5 . 1标本容器

    容器通常用塑料管或硅化玻璃管, 以避免颗粒成份吸附

    在管壁上, 容量通常 5 ～ 1 2 m l 。

    5 . 2移液器

    向计数池内加尿液时移液器比毛吸管更准确。校准移液

    器的误差小于 5 %方可使用, 防止颗粒附壁, 要用塑料管或硅

    化玻璃管, 需反复练习加样, 移液器的变异系数可达到 9 %,相比之下, 毛吸管则达到 1 8 %。

    5 . 3计数池

    尿液中颗粒物检测标准化的参考程序

    李胜远 姜青龙综述 万本愿审校

    中图分类号 R 4 4 6 . 1 2 + 1 文献标识码 C 文章编号 1 0 0 8 - 0 0 2 3 ( 2 0 0 7 ) 0 5 - 0 4 9 6 - 0 3

    作者单位: 3 3 0 0 0 6 南昌, 江西省临床检验中心

    附表 颗粒计数泊松统计

    总数 标准差 变异系数( %) 9 5 %可信区间

    5 0

    1 0 0

    2 0 0

    7

    1 0

    1 4

    1 4

    1 0

    7

    3 7 ～ 6 6

    8 1 ～ 1 2 2

    1 7 3 ～ 2 3 0

    4 9 6 · ·江西医学检验 2 0 0 7年 1 0月 第 2 5卷 第 5期

    计数池有盖玻片和带小池的玻璃板组成,盖玻片符合

    B S 7 4 8 ( 1 9 8 2 ) 要求, 带小池的玻璃板符合 D I N 1 2 8 4 7要求。 盖玻

    片覆盖在玻璃板上, 构成一定容量的计数池。

    因为颗粒物小, F u c h s - R o s e n t h a l 计数池要求高 0 . 2 m m,其容量 1 6个中格为 2 × 3 . 2 μ l , 9个大格为 2 × 1 . 8 μ l ,而 B u r k e r

    计数池高 0 . 1 m m, 总容量 2 × 0 . 9 μ l , 用 0 . 2 m m深的计数池内未

    染色标本更容易, 推荐使用相差显微镜替代平面反光镜 ......