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编号:37894
实验诊断学10.doc
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    常用免疫学检测与临床应用

    一. 简述免疫应答

    天然免疫(natural immunity):有生理屏障结构、血液及组织液中吞噬细胞和嗜酸粒细胞及自然杀伤细胞(NK)、天然存在的抗微生物分子。特点是天然存在,对外源微生物无特异区分,也不因外源微生物侵入而加强。

    获得性免疫或特异性免疫(acquired /specific immunity):由接触外源性物质而诱生,并特异性针对不同大分子。特点是须有外源物质诱生,能对外源物质进行区分并有记忆,且随再次接触某一大分子物质而增强。特异性免疫由抗原(antigen)、淋巴细胞(lymphocyte)、及抗体(antibody)和淋巴因子(cytokine)组成。免疫应答为特异性免疫所特有。

    免疫应答过程

    记忆T淋巴细胞

    T淋巴细胞致敏T淋巴细胞 淋巴因子

    抗原 吞噬细胞非特异物质

    B淋巴细胞 桨细胞抗体

    记忆B淋巴细胞

    抗原(antigen Ag):能刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产物特异性结合的物质。异物性、分子大小、分子结构决定物质是否有抗原性及抗原性大小。

    抗体(antibody Ab):机体受抗原刺激后,血清和组织液中出现的一类与该抗原发生特异结合的物质。

    二. 免疫学检测常用方法

    1. 凝集反应

    2. 沉淀反应

    3. 溶血实验

    4.放射免疫

    4. 荧光免疫

    5. 酶免疫

    6. 发光免疫

    7. 流式细胞仪

    三. 常用免疫学检查与临床意义

    一)蛋白检测

    免疫球蛋白(Immunoglobulin IG):IgG、IgA、IgM、IgE、IgD

    补体(complement C):CH50、C3、C4、BF

    丙反应蛋白(C-reactive protein CRP)

    二)微生物感染的免疫学检查

    肥达氏反应(Widal reaction)

    抗链球菌溶血素"O"试验(ASLO)

    梅毒血清学检查(rapid plasma RPR)

    三)自身抗体检测

    类风湿因子检测(RF)

    抗DNA抗体检测(ss-DNA)

    免疫印迹法抗核抗体检测

    四)肝炎病毒免疫学检测

    甲肝(HAV-IGM)检测

    乙肝(HbsAg HbsAb ...)

    丙肝抗体检测

    戊肝抗体检测

    五)肿瘤标志物检测

    甲胎蛋白检测(AFP)

    癌胚抗原检测(CEA)

    六)免疫细胞检测

    T淋巴细胞检测 :Erythrocyte-Rosette-formation Test试验. T细胞转化试验

    B淋巴细胞检测:EA-RFT

    一)蛋白检测

    (一)免疫球蛋白检测

    免疫球蛋白是一种具有抗体活性的蛋白,由浆细胞分泌,存在于机体的血液、体液、外分泌液及某些细胞膜上。可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。免疫

    球蛋白二条重链和二条轻链经二硫键结合而成,重链可分为?、?、?、?、?五种,轻链分为?、?二种。

    1.常用检测方法:沉淀法、浊度法、放射免疫、酶免疫

    2.临床意义

    1)免疫球蛋白降低

    (1)先天性Ig减低

    有全部Ig缺乏或降低和部分缺乏,最常见为IgA缺乏。分泌型IgA是机体肠道粘膜抵抗感染的重要因素,患者常见呼吸道、肠道反复感染。

    (2)继发Ig减低

    引起原因很多,最常见于大量蛋白流失,如剥脱性皮炎、肾病综合症。另一主要原因为合成障碍,如淋巴网状系统肿瘤及骨髓病变。

    * Ig缺乏主要临床症状为反复感染。主要有败血症、化浓性脑膜炎、肺炎、气管炎、中耳炎等。

    2) 增高

    依Ig增高种类可分为单克隆和多克隆增高,临床以单克隆增高多见。依疾病性质可分良性与恶性增高二类。依发病机理可分原发和继发。

    3)其它引起Ig增高疾病

    非淋巴网状系统肿瘤

    单核细胞白血病

    慢性肝胆疾病

    自身免疫性疾病

    良性Ig增高(主要见于老年人) ?

    * 介绍脑脊液和尿液免疫球蛋白检测

    * M蛋白:是由单克隆B细胞分化而来的浆细胞异常增生,导致血液或尿液中现的大量结构一致的免疫球蛋白或轻链或重链。临床症状依增殖情况不同而不同。

    * 多发性骨髓瘤(MM multiple myeloma):

    是 B淋巴系恶性肿瘤,肿瘤细胞合成无免疫

    活性的单克隆免疫球蛋白或轻链或重链。

    临床表现主要为:溶骨性破坏、贫血、反复感染、肾功能损害及高钙血症。

    检测方法常用电泳法

    IgGIgA(血清)IgMIgDIgE参考值7.6-16.6g/L0.71-3.35g/L0.48-2.12g/L0.6-2.0mg/L0.1-0.9mg/L占血液Ig的%70-8010-155-100.02-10.002常见增高原因多发性骨髓瘤。

    SLE.RF等自身免疫性疾病。

    慢性肝病。

    慢性感染。

    淋巴瘤。

    肺结核。

    慢粒。多发性骨髓瘤。

    SLE.RF。

    肝硬化。

    IgA型肾病。巨球蛋白血症。

    SLE.RF。

    肝硬化。

    病毒性肝炎早期。多发性骨髓瘤。

    单核细胞白血病。

    甲状腺炎。多发性骨髓瘤。

    过敏性疾病。

    慢性肝病。常见降低原因先天缺陷。

    应用免疫抑制剂。

    肾病综合症。

    蛋白流失。先天缺陷。

    反复呼吸道感染。

    非IGA型MM

    轻/重链病。先天缺陷。

    应用免疫抑制剂。

    IGG型重链病。IGA型MM。淋巴系统肿瘤。先天缺陷先天缺陷。

    应用免疫抑制剂。

    恶性肿瘤。

    免疫失调性毛细血管扩张症

    (二)补体检测(complement)

    补体是主要有巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白,补体不耐热易降解,故补体检测须用新鲜血清。补体有C1、C2。。。C9及AF、BF、DF、PF组成。临床常作总补体活性(CH50)和单一因子C3、C4、BF及C1q检测

    1.检测方法

    CH50溶血法

    单因子检测同免疫球蛋白

    2.参考正常值

    CH50:50 - 100 u/ml

    C3:0.87 - 1.41 g/l

    C4:0.44 -0.66 g/l

    BF:0.5 -0.75 g/l

    3.临床意义

    1) 降低

    补体消耗引起如自身免疫性疾病的SLE、肾病。

    合成障碍引起如严重肝病变

    先天性缺乏

    2) 增高

    急性感染、恶性肿瘤和凤湿病早期,补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。

    (三)丙反应蛋白检测(CRP)

    CRP是一种急性时相蛋白,由肝脏合成,能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。近年来CRP检测被广泛应用。

    1. 检测方法

    同免疫球蛋白

    2. 参考正常值

    CRP:< 10 mg/l

    3. 临床意义

    CRP增高特点为:急性期增高明显,预后降低迅速,且受其它因素影响很小,非特异性

    急性细菌性感染时急剧增高

    病毒感染CRP增高不如细菌感染明显恶性肿瘤

    恶性肿瘤CRP增高而良性肿瘤一般正常

    风湿病活动期较稳定期增高明显,烧伤、肝炎、心肌梗塞、移植反应可增高

    二)微生物感染免疫检测

    (一)肥达氏试验

    伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有二种抗原,即菌体抗原"O"抗原和鞭毛抗原"H"。肥达氏反应就是检测由上述二种抗原刺激机体产生的抗体。

    副伤寒分甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,它们也有各自的菌体和鞭毛抗原,产生相应抗体。鞭毛抗原产生相应抗体多为IGG型。菌体产生抗体多为IGM型。

    菌体

    鞭毛

    1. 检测方法

    凝集试验(混合抗体)

    酶免疫(IGM型)

    2. 参考正常值

    TO :<1:80 TH : <1:160副伤寒TH:〈1:80

    肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和付伤寒感染,由于抗体产生需要一定时间,故第一周阳性率10%,第二周达60%-70%,第四周达90%。临床常以二次标本(早期和中期或恢复期)的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的"O"抗体较"H"出现早,存在时间短,"H"相反。预防接种可引起"H"增高,"O"正常。

    (二) 抗链球菌溶血素"O"检测(anti-streptolysin O ASLO)

    风湿热是一种变态结缔组织疾病,常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿热常由A 组溶血性链球菌引起,此菌可产生一种"O"溶血素,ASLO就是检测机体产生的抗溶血素"O"抗体。

    1. 检测方法

    胶乳凝集试验(定性)

    比浊法(定量)

    2. 参考正常值

    定性:阴性

    定量:<200IU/ml

    3. 临床意义

    链球菌感染后抗"O"的产生一般在一周左右,4-6周达高峰。可见于风湿性心脏病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO动态检测对病程及疗效观察意义较大,结合CRP和ESR、WBC检测临床意义更大。

    (三)梅毒血请学

    当机体感染梅毒螺旋体后,会产生二种抗体,一种为抗类脂抗体,另一种为抗螺旋体抗原抗体,后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难,故血清学检测是目前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应(RPR)和梅毒螺旋体血凝试验(TPPA),后者特异性高一般用于确定试验,RPR一般作过筛试验。

    (四)艾滋病血清血检查

    艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome ADIS)机体感染艾滋病病毒后血清中产生抗体,实验室一般首先用过筛试验进行检测,发现阳性再作确诊试验。过筛试验常用酶免疫法,要求敏感性高,不能有假阴性,允许少量假阳性。确定试验一般用蛋白印迹法,要求敏感性高、特异性高。遇到可疑标本,一般病人三月后复查。

    三)自身免疫病血清学检测检测

    人类具有完善的免疫系统,正常情况下,免疫系统具有识别自我与异己的功能,因而能够防御异物入侵,而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应,称自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变时,可使免疫耐受受到影响,导致免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性,一般影响不大,高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测方法很多,特异性较差,动态检测可帮助临床对预后及疗效观察。常用方法及临床意义见表:

    名称临床意义抗ds-DND抗体SLE的较特异性抗体抗ss-DNA抗体特异性差,见于多种免疫性疾病抗Smith抗体SLE特异性抗体抗Scl-70抗体系统性硬化症抗PM-1抗体多发性皮肌炎及肌炎抗SS-A和SS-B抗体干燥综合症、SLE、RA等免疫性疾病抗组蛋白抗体药物性狼疮及其它免疫性疾病抗核糖核蛋白抗体(RNP)混合结缔组织病、SLE等类风湿因子(RF)类风湿性关节炎及其它免疫性疾病

    四)肝炎标志物检测

    乙肝病毒球型颗粒

    HBsAg

    HBcAg

    HBcAg

    肝炎分型检测项目临床意义甲肝HAVHAV-IgG流行病调查(既往感染)、恢复期、预防接种HAV-IgM急性感染期或恢复期乙肝HBVHbsAg急性或慢性期、单独不具传染性HbsAb恢复后出现,保护性抗体HbcAbHBV感染标志、保护性抗体HBc-IgM乙肝急性期或活动期,传染性强HbeAg急性或慢性期,传染性较强HbeAb恢复期后多数阳性,传染性低HBV-DNA病毒复制、传染性强丙肝HCVHCVAb急性或慢性期,具传染性、可终生携带HCV-RNA病毒复制、传染性强丁肝HDVHDVAb与乙肝重叠感染病情较戊肝HEVHEV-IgG恢复期后HEV-IgM急性期或恢复期、具传染性

    五)肿瘤标志物检测

    肿瘤标志物检测目前项目很多,临床应用也相当普遍,但由于灵敏度和特异性所限,一般不可作为确定试验。一般可用于肿瘤辅助诊断、疗效及预后判断和肿瘤普查。

    项目临床意义甲胎蛋白AFP肝癌、睾丸肿瘤和卵巢内胚窦瘤,肝炎也可增高癌胚抗原CEA结、直肠、乳腺癌肺癌等CA-125卵巢癌、子宫癌CA-199胰腺癌CA-50结、直肠、肝癌、胰腺癌

    六)T、B淋巴细胞检测

    免疫细胞指一群参与免疫应答的细胞。第一类指在免疫应答过程中起核心作用的淋巴样细胞,如T、B淋巴细胞。第二类为抗原提呈促进淋巴细胞作用的单核-巨噬细胞系统。第三类为以其它方式参与免疫应答的有关细胞。

    族分化抗原(Cluster of differentiation): 细胞在发育分化过程中,表面抗原发生变化,CD抗原即指细胞变化过程中产生的抗原。目前临床CD4(TH)与CD8(TS)检测应用广泛。

    1. T细胞检测(Thymus dependent lymphcyte 胸腺依赖临巴细胞)

    1)E玫瑰花试验(Erythrocyte rosette formation test)

    E玫瑰花试验只反映TC的数量,而不能体现其功能,又由于检测要求高,目前临床很少应用。

    3) T淋巴细胞转化试验......(后略) ......

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