病毒性肝炎病人血中性粒细胞肿瘤坏死因子的观察
作者：范学工 张铮
单位：410008长沙，湖南医科大学第一附属医院传染科
关键词：
中华医学杂志930519 为探讨血中性粒细胞(PMN)合成和分泌的肿瘤坏死因子(TNF)与病毒性肝炎的关系，我们进行了一些临床观察，现将结果报告如下。
一、对象和方法
1.对象：病毒性肝炎57例，男44例，女13例，年龄20～64岁。除急性肝炎中9例为甲型肝炎外，余均为乙型肝炎。诊断根据1990年第六次全国病毒性肝炎会议标准，二分之一的慢性活动性肝炎病例经肝组织学检查证实。20名健康献血员作为正常对照，男9人，女11人，年龄22～41岁。
2.PMN TNF 诱导与测定：常规分离PMN，以内毒素(LPS)为诱导剂，L929细胞为靶细胞，按Dubravec及Flick的方法进行，最佳诱导时间为5小时。
, 百拇医药
3.TNF活性计算：TNF细胞毒=(1-(试验OD)/(对照OD))×100%。以能使L929细胞50%死亡的最大稀释倍数的倒数为TNF活性单位。4个单位以下，为未能测出TNF。
4.除外巨噬细胞TNF的影响：由于我们分离的PMN纯度为97%，而巨噬细胞也能产生TNF，为排除所测PMN TNF可能为巨噬细胞所产生，我们对此进行了比较。用淋巴细胞分离液取单个核细胞，置培养瓶中，5%CO2、37℃培养2小时后，倾去非粘附细胞，洗下粘附细胞，调整浓度为2×105/ml，与PMN(1×106/ml)同时同样条件诱导和测定TNF。结果显示，巨噬细胞为PMN五分之一量时，TNF为PMN TNF的三分之一。从而说明PMN确能产生TNF。
二、结果
1.TNF活性：正常人血清TNF和PMN TNF在男女之间，不同年龄组之间均无显著差异(P>0.05)。未经LPS刺激的20名正常人PMN培养上清液均未能测出TNF。与正常人比较，慢性活动性肝炎和重型肝炎病人血清和PMN TNF均明显升高(表1)。未经LPS诱导的PMN，急性肝炎病例增未测出；慢性活动性肝炎有3例测出TNF，分别为4、8、4U/ml；重型肝炎5例测出TNF，分别为6、8、8、8、4U/ml。
, 百拇医药
表1 肝炎病人TNF活性 组别
例数
平均年龄(岁)
血清TNF
PMN TNF
正常人
20
32
9±3
6±2
急性肝炎
15
33
, http://www.100md.com
8±4
6±2
慢活肝
20
38
17±7*
12±7*
重型肝炎
22
39
28±18*
17±10*
, 百拇医药
*与正常人比较,P<0.01
2.血清TNF与PMN TNF的相关性：不论是正常人，抑或病人，其血清TNF与PMN TNF都有显著相关性。
3.病人TNF动态观察(表2)
表2 肝炎病人TNF动态观察(±s,U/ml) 组别
例数
血清TNF
P值
PMNTNF
P值
慢性活动性肝炎
入院时
, 百拇医药
6
20±9
<0.01
17±10
<0.05
恢复期
6
9±5
6±3
重型肝炎
入院时
8
23±12
, http://www.100md.com
<0.05
18±13
<0.05
恢复期
8
14±8*
7±3
*与正常人比较<0.05
4.TNF与病情的关系：存在继发感染，并发症及病情恶化的重型肝炎患者，其血清TNF明显升高；而PMN TNF仅在继发感染者有明显升高(表3)。
表3 肝炎病人TNF与病情的关系(±s,U/ml) 病情
, http://www.100md.com
例数
血清TNF
P值
PMNTNF
P值
继发感染
有
11
39±19
<0.01
22±12
<0.05
无
, http://www.100md.com
11
17±6
12±3
并发症△
有
8
43±20
<0.01
21±9
<0.05
无
14
19±10
, http://www.100md.com
15±10
预后
死亡
8
43±20
<0.01
21±9
<0.05
存活
14
19±10
15±10
△指上消化道出血、肝肾综合征、肝昏迷
, 百拇医药
三、讨论
病毒性肝炎的肝细胞损害机理是十分复杂的，TNF在肝细胞破坏中的作用，越来越引起人们的重视。本文结果证实了TNF与病毒性肝炎肝细胞损害有密切关系，同时也说明PMN TNF亦在其中起重要作用。
内毒素是较强的TNF诱生剂。肝炎病人存在内毒素血症，所以我们认为病人血清及PMN TNF增高，与病人存在内毒系血症和继发感染有关。本组病例中继发感染者，血清和PMN TNF均高于无感染者，亦支持此点。在慢性活动性为和重型肝炎中，分别有3例和5例病人PMN未经诱导也测出了TNF，3例慢性活动性肝炎没有明显的感染证据，但有可能存在潜在感染。5例重型肝炎均有原发性腹膜炎，故PMN可能在体内已预激活，从而在体外测出了TNF。同时测定的正常人和急性肝炎病人未经LPS诱导和PMN上清液，均未测出TNF，可以除外实验污染所致的可能。有并发症及病情恶化者，血清TNF与PMN TNF升高不一致，可能是血清TNF还受巨噬细胞TNF的影响。
(收稿：1992-07-20 修回：1993-02-15), http://www.100md.com
单位：410008长沙，湖南医科大学第一附属医院传染科
关键词：
中华医学杂志930519 为探讨血中性粒细胞(PMN)合成和分泌的肿瘤坏死因子(TNF)与病毒性肝炎的关系，我们进行了一些临床观察，现将结果报告如下。
一、对象和方法
1.对象：病毒性肝炎57例，男44例，女13例，年龄20～64岁。除急性肝炎中9例为甲型肝炎外，余均为乙型肝炎。诊断根据1990年第六次全国病毒性肝炎会议标准，二分之一的慢性活动性肝炎病例经肝组织学检查证实。20名健康献血员作为正常对照，男9人，女11人，年龄22～41岁。
2.PMN TNF 诱导与测定：常规分离PMN，以内毒素(LPS)为诱导剂，L929细胞为靶细胞，按Dubravec及Flick的方法进行，最佳诱导时间为5小时。
, 百拇医药
3.TNF活性计算：TNF细胞毒=(1-(试验OD)/(对照OD))×100%。以能使L929细胞50%死亡的最大稀释倍数的倒数为TNF活性单位。4个单位以下，为未能测出TNF。
4.除外巨噬细胞TNF的影响：由于我们分离的PMN纯度为97%，而巨噬细胞也能产生TNF，为排除所测PMN TNF可能为巨噬细胞所产生，我们对此进行了比较。用淋巴细胞分离液取单个核细胞，置培养瓶中，5%CO2、37℃培养2小时后，倾去非粘附细胞，洗下粘附细胞，调整浓度为2×105/ml，与PMN(1×106/ml)同时同样条件诱导和测定TNF。结果显示，巨噬细胞为PMN五分之一量时，TNF为PMN TNF的三分之一。从而说明PMN确能产生TNF。
二、结果
1.TNF活性：正常人血清TNF和PMN TNF在男女之间，不同年龄组之间均无显著差异(P>0.05)。未经LPS刺激的20名正常人PMN培养上清液均未能测出TNF。与正常人比较，慢性活动性肝炎和重型肝炎病人血清和PMN TNF均明显升高(表1)。未经LPS诱导的PMN，急性肝炎病例增未测出；慢性活动性肝炎有3例测出TNF，分别为4、8、4U/ml；重型肝炎5例测出TNF，分别为6、8、8、8、4U/ml。
, 百拇医药
表1 肝炎病人TNF活性 组别
例数
平均年龄(岁)
血清TNF
PMN TNF
正常人
20
32
9±3
6±2
急性肝炎
15
33
, http://www.100md.com
8±4
6±2
慢活肝
20
38
17±7*
12±7*
重型肝炎
22
39
28±18*
17±10*
, 百拇医药
*与正常人比较,P<0.01
2.血清TNF与PMN TNF的相关性：不论是正常人，抑或病人，其血清TNF与PMN TNF都有显著相关性。
3.病人TNF动态观察(表2)
表2 肝炎病人TNF动态观察(±s,U/ml) 组别
例数
血清TNF
P值
PMNTNF
P值
慢性活动性肝炎
入院时
, 百拇医药
6
20±9
<0.01
17±10
<0.05
恢复期
6
9±5
6±3
重型肝炎
入院时
8
23±12
, http://www.100md.com
<0.05
18±13
<0.05
恢复期
8
14±8*
7±3
*与正常人比较<0.05
4.TNF与病情的关系：存在继发感染，并发症及病情恶化的重型肝炎患者，其血清TNF明显升高；而PMN TNF仅在继发感染者有明显升高(表3)。
表3 肝炎病人TNF与病情的关系(±s,U/ml) 病情
, http://www.100md.com
例数
血清TNF
P值
PMNTNF
P值
继发感染
有
11
39±19
<0.01
22±12
<0.05
无
, http://www.100md.com
11
17±6
12±3
并发症△
有
8
43±20
<0.01
21±9
<0.05
无
14
19±10
, http://www.100md.com
15±10
预后
死亡
8
43±20
<0.01
21±9
<0.05
存活
14
19±10
15±10
△指上消化道出血、肝肾综合征、肝昏迷
, 百拇医药
三、讨论
病毒性肝炎的肝细胞损害机理是十分复杂的，TNF在肝细胞破坏中的作用，越来越引起人们的重视。本文结果证实了TNF与病毒性肝炎肝细胞损害有密切关系，同时也说明PMN TNF亦在其中起重要作用。
内毒素是较强的TNF诱生剂。肝炎病人存在内毒素血症，所以我们认为病人血清及PMN TNF增高，与病人存在内毒系血症和继发感染有关。本组病例中继发感染者，血清和PMN TNF均高于无感染者，亦支持此点。在慢性活动性为和重型肝炎中，分别有3例和5例病人PMN未经诱导也测出了TNF，3例慢性活动性肝炎没有明显的感染证据，但有可能存在潜在感染。5例重型肝炎均有原发性腹膜炎，故PMN可能在体内已预激活，从而在体外测出了TNF。同时测定的正常人和急性肝炎病人未经LPS诱导和PMN上清液，均未测出TNF，可以除外实验污染所致的可能。有并发症及病情恶化者，血清TNF与PMN TNF升高不一致，可能是血清TNF还受巨噬细胞TNF的影响。
(收稿：1992-07-20 修回：1993-02-15), http://www.100md.com