氨哮素对失神经骨 肌内胶原代谢的影响△
作者：姜广良* 顾玉东* 张丽银*
单位：* 上海医科大学附属华山医院手外科(上海，200040)
关键词：氨哮素；骨骨；各肌；胶原；失神经
中国修复重建外科杂志980116 摘 要 为探讨氨哮素对人体失神经骨骨 各肌内胶原代谢的影响，采用安慰剂对照的随机双盲研究法，对71例因臂丛神经损伤而致肌皮神经功能完全丧失的患者，给予氨哮素或安慰剂60 μg，每天2次，治疗3个月。实验前、后均行肱二头肌活检，活检肌肉作Ⅰ型、Ⅳ型胶原的免疫组织化学染色和图像分析。结果表明，氨哮素治疗组肌内膜中Ⅰ型胶原明显低于安慰剂组，Ⅳ型胶原纤维的增生明显少于安慰剂组(P<0.05)。证明，氨哮素能抑制失神经骨骨 各肌内胶原的增生。
THE EFFECTS OF CLENBUTEROL ON INTRAMUSCULAR COLLAGEN METABOLISM IN DENERVATED MUSCLE/Jiang Guangliang, Gu Yudong, Zhang Liyin. Department of Hand Surgery, Huashan Hospital, Shanghai Medical University, Shanghai , P.R.China 200040
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Abstract In order to explore the effects of clenbuterol on intramuscular collagen metabolism in denervated skeletal muscles, a randomized, double-masked and placebo-controlled group were studied. Seventy-one patients with complete function loss in muscularcutaneous nerve resulted from brachial plexus injury were administered clenbuterol or placebo 60 μg Bid for more than 3 months. Biopsies of the biceps brachia muscle were performed at the beginning and end of this study. The biopsied muscles were processed with anti-collagen I and Ⅳ immunohistochemical stains and image analysis as well. The result showed that the collagen proliferation of both type Ⅰand Ⅳ was much reducible in the clenbuterol-treated group than that of the placebo-treated group (P<0.05). It was concluded that clenbuterol could inhibit partially the proliferation of intramuscular collagens in denervated skeletal muscle.
, 百拇医药
Key words Clenbuterol Skeletal muscle Collagen Denervation
骨骨 各肌失去神经支配后，发生肌纤维萎缩及继发性纤维化，使肌肉的弹性降低。肌肉获得神经再支配后，其功能不能完全恢复[1，2]。因此，防止失神经骨骨 各肌内胶原的增生非常必要。大量的研究发现，β2-肾上腺素能受体激动剂——氨哮素，具有较强的抑制多种动物失神经骨骨 各肌纤维化的作用[3]，且能抵消植物血凝素、地塞米松及内毒素所致的骨骨 各肌萎缩[4]。为探讨氨哮素对人体失神经骨骨 各肌内胶原代谢的作用设计了研究。
1 材料与方法
1.1 实验设计及过程
采用安慰剂对照的随机双盲研究方法。患者为因臂丛神经损伤而致肌皮神经功能完全丧失，且无其它器官严重疾患者。有肱二头肌部位严重挤压等外伤史者或孕妇及哺乳期妇女，不作为研究对象。患者按入选日期及顺序编号后，随机分为治疗组或安慰剂组。氨哮素及安慰剂均由华山医院药剂科制成10 ml/支的密封口服液(氨哮素药粉由上海第十七制药厂提供)。每支氨哮素口服液含有氨哮素60 μg。安慰剂除不含氨哮素外，在外形、剂型、剂量及其他配方上均与氨哮素相同。药物治疗由术后第2天开始，每次1支，每天2次，连续服用3个月。研究受试者共71例，随访到25例，一般情况见附表。由附表可见，两组的年龄、用药前失神经时间及取材间隔时间，均无显著性差异(P>0.05)。
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1.2 检测指标及方法
手术时，在患侧上臂中点正前方，切取新鲜肱二头肌一块，用丝线系住肌肉一端，迅速将肌肉投入液氮中速冻。随访时再次在同样部位取材。肌肉速冻后，行连续冰冻切片，切片厚度为5 μm，待切片自然凉干后，丙酮固定10分钟，蒸馏水冲洗干净、凉干，密封存入-70℃深低温冰箱。随访结束后，使全部标本在同等条件下进行Ⅰ型、Ⅳ型胶原的免疫组织化学染色[5]：深低温保藏冰冻切片凉干后，用pH7.4、0.01 mol/L PBS冲洗。0.3% H2O2-甲醇溶液孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。分别用1∶66的正常马及羊血清37℃孵育20分钟；1∶100抗Ⅰ型、Ⅳ型胶原抗体37℃孵育1小时，然后置4℃冰箱过夜。PBS冲洗干净后，用1∶200生物素化的二抗分别孵育30分钟，PBS内冲洗。然后用1∶100 ABC试剂孵育45分钟，PBS内冲洗3次。滴加DAB显色液，孵育5分钟。蒸馏水冲洗干净后，依次脱水、透明、封固。每次染色时均设置阴性对照，一抗换成PBS。试剂均购自Sigma公司。用TJTY-300图像分析系统，在同等条件下测量肌内膜及肌束膜中Ⅰ型胶原阳性染色区的灰度及厚度， 同时测量邻近部位阴性区的灰度作为背景灰度，用两者的差值表示检测部位的实际灰度， 反映Ⅰ型胶原蛋白的含量。测量基底膜中Ⅳ型
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附表 25例患者的一般资料(月，
±s) 组 别
n
年龄(岁)
用药前失神经时间
随访间隔时间
氨哮素组
12
28.31±10.89
4.84±3.50
4.69±3.09
安慰剂组
, 百拇医药
13
27.33± 5.85
4.08±2.25
5.00±3.02
胶原阳性区的灰度、厚度及邻近部位的背景灰度，用背景灰度与阳性区灰度的差值，反映Ⅳ型胶原的含量[6，7]。灰度增长率为用药后胶原的灰度减去用药前相应的灰度，再除以用药前的灰度。用药后胶原的厚度减去用药前相应的厚度，反映药物对胶原代谢的影响。原始数据输入电脑，由SPSS软件统计处理。
2 结果
2.1 氨哮素对失神经肱二头肌内Ⅰ型胶原代谢的影响
所有切片的Ⅰ型胶原免疫组织化学染色均呈强阳性反应，阳性区位于肌内膜及肌束膜上，反映出肌细胞的轮廓及肌肉的结缔组织支架。阴性对照片无阳性染色。氨哮素治疗组，肌内膜中Ⅰ型胶原的灰度增长率和肌束膜中Ⅰ型胶原的增厚程度均明显低于安慰剂对照组(P<0.05)，见图1，2。
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2.2 氨哮素对失神经肱二头肌内Ⅳ型胶原含量的影响
除阴性对照片外，Ⅳ型胶原免疫组织化学染色后，肌纤维基底膜均呈强阳性反应，基底膜呈线型，勾划出肌纤维轮廓。肌束膜等结缔组织无阳性反应。随着失神经时间的延长，基底膜丧失其光滑形状，呈现毛糙及增厚。经氨哮素治疗后，失神经肌细胞基底膜内Ⅳ型胶原的增长受到明显抑制(P<0.05)，见图3，4。
图1 用药前、后骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原厚度的
增加量(±s，*P<0.01)
图2 用药前、后骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原灰度增长率
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(±s，*P<0.05)
图3 重物砸伤肩部致右臂丛上、中干完全损伤5个月后
肌肉Ⅳ型胶原免疫组织化学染色( ×200)
a 用药前 b 服用氨哮素3个月
图4 车祸致左臂丛上干完全损伤5个月后肌肉
Ⅳ型胶原免疫组织化学染色( ×200)
a 用药前 b 服用安慰剂3个月
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3 讨论
结缔组织具有转运肌纤维的代谢物质，传输肌纤维的收缩力，为肌肉组织的修复和再生提供支架等作用。若过量增生将导致肌肉纤维化，阻碍再生神经纤维与肌细胞间的连接。而胶原是肌肉结缔组织中最主要的蛋白，因此控制失神经骨骨 各肌内胶原等结缔组织增生是维护失神经肌肉功能的重要方面。胶原中的一半位于肌内膜和肌束膜中。肌内膜和肌束膜中主要含有Ⅰ型、Ⅲ型胶原；肌肉中Ⅳ型、Ⅴ型胶原主要见于肌纤维基底膜及血管基底膜上。其中Ⅰ型胶原为一种硬胶原，它的显著增生可导致骨骨 各肌的顺应性和弹性降低，影响神经再支配后的功能[1，2，8]。
骨骨 各肌失神经后，胶原合成酶脯氨酸-4-羟化酶(prolyl-4-hydroxyloase，PH)、半乳糖-羟赖氨酸-葡萄糖转移酶(galctosyl-hydroxylysyl glucosyl transferase, GGT)的活性成倍上升，而且羟脯氨酸的含量也成倍升高，并见肌内膜、肌束膜及基底膜增厚，染色反应增强[1，2，8]。我们也观察到Ⅰ型、Ⅳ型胶原随失神经时间的延长而增加。
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Maltin等[9]研究发现，氨哮素对大鼠失神经骨骨 各肌萎缩的最低有效剂量为每天1 μg/kg～10 μg/kg，在这个剂量内无副作用。根据代谢体积进行物种间转换，每天10 μg/kg的大鼠有效剂量，相当于每天1 μg/kg、70 kg的成人安全剂量。目前，氨哮素用于防治支气管哮喘的每天总剂量为30 μg～120 μg。故我们用60 μg，每天2次治疗。结果显示，氨哮素能显著抑制人失神经骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原增生(P<0.05)，尤其对Ⅰ型胶原的增生控制较为明显。氨哮素对失神经骨骨 各肌内胶原代谢的影响，尚无临床研究报道。动物研究观察到氨哮素在减轻失神经骨骨 各肌萎缩的同时，非收缩成份无明显增生，细胞间隙明显减少[3]。
氨哮素影响失神经骨骨 各肌内胶原代谢的机制尚不清楚。研究表明：神经再支配能使失神经骨骨 各肌内升高的胶原合成酶PH和GGT的活性恢复正常，使升高的羟脯氨酸含量下降，提示神经支配能强有力的抑制性调节胶原的生物合成[10]。Maltin等[11]认为氨哮素是一种内源性神经肽，能模仿神经支配样作用，可以解释我们的研究中氨哮素对胶原合成的抑制。有人认为氨哮素通过β2-受体对失神经肌肉发生作用，骨骨 各肌内小动脉上富含β2-受体，在氨哮素的作用下，使小血管扩张，增加肌肉的氧和营养，从而抑制胶原增生。
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4 参考文献
1 Savolainen J, Myllyla V, Myllyla R et al. Effects of denervation and immobilization on collagen synthesis in rat skeletal muscle and tendon. J Physiol(Am), 1988;254(23):897
2 Salonen V, Lehto M, Kalimo H et al. Changes in intramuscular collagen and fibronectin in denervation atrophy. Muscle Nerve, 1985;8(2):125
3 Zeman RJ, Ludemann R, Etlinger JD. Clenbuterol, a β2-agonist, retards atrophy in denervated muscle. J Physiol(Am), 1987;252(1):152
, 百拇医药
4 Bardocz S, Brown DS, Grant G et al. Effect of the β-adrenoceptor agonist clenbuterol and phytohaemagglutinin on growth, protein synthesis and polyamine metabolism of tissues of the rat. J Pharmacol(Br), 1992;106(2):476
5 Odermatt BF, Lang AB, Ruttner JR et al. Monoclonal antibodies to human type Ⅳ collagen useful reagents to demonstrate the heterotrimeric nature of the molecule. Proc Natl Acad Sci (USA), 1984;81(23):7343
6 汤耀法.光密度测定的稳定性以及有关参数的综合测定.上海医科大学学报，1997；24(1)：75
, 百拇医药
7 Miller GR, Stauber WT. Use of computer-assisted analysis for myofiber size measurements of rat soleus muscles from photographed images, J hostochem. Cytochem, 1994;42(3):377
8 Peltonen L, Myllyla R, Tolonen U et al. Changes in collagen metabolism in diseased muscle. Ⅱ. Immunohistochemical studies. Arch Neurol, 1982;39(12):756
9 Maltin CA, Delday MI, Hay SM et al. Denervation increases clenbuterol sensitivity in muscle from young rats. Muscle Nerve, 1992;15(2):188
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10 Virtanen P, Tolonen U, Savolainen J et al. Effect of reinnervation on colllagen synthesis in rat skeletal muscle, J Appl Physiol, 1992;72(6):2069
11 Maltin CA, Delday MI, Campbell GP et al. Clenbuterol mimics effects of innervation on myogenic regulatory factor expression. J Physiol(Am), 1993;265(28):176
△ 卫生部科研基金资助项目
(收稿：1997-08-18), 百拇医药
单位：* 上海医科大学附属华山医院手外科(上海，200040)
关键词：氨哮素；骨骨；各肌；胶原；失神经
中国修复重建外科杂志980116 摘 要 为探讨氨哮素对人体失神经骨骨 各肌内胶原代谢的影响，采用安慰剂对照的随机双盲研究法，对71例因臂丛神经损伤而致肌皮神经功能完全丧失的患者，给予氨哮素或安慰剂60 μg，每天2次，治疗3个月。实验前、后均行肱二头肌活检，活检肌肉作Ⅰ型、Ⅳ型胶原的免疫组织化学染色和图像分析。结果表明，氨哮素治疗组肌内膜中Ⅰ型胶原明显低于安慰剂组，Ⅳ型胶原纤维的增生明显少于安慰剂组(P<0.05)。证明，氨哮素能抑制失神经骨骨 各肌内胶原的增生。
THE EFFECTS OF CLENBUTEROL ON INTRAMUSCULAR COLLAGEN METABOLISM IN DENERVATED MUSCLE/Jiang Guangliang, Gu Yudong, Zhang Liyin. Department of Hand Surgery, Huashan Hospital, Shanghai Medical University, Shanghai , P.R.China 200040
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Abstract In order to explore the effects of clenbuterol on intramuscular collagen metabolism in denervated skeletal muscles, a randomized, double-masked and placebo-controlled group were studied. Seventy-one patients with complete function loss in muscularcutaneous nerve resulted from brachial plexus injury were administered clenbuterol or placebo 60 μg Bid for more than 3 months. Biopsies of the biceps brachia muscle were performed at the beginning and end of this study. The biopsied muscles were processed with anti-collagen I and Ⅳ immunohistochemical stains and image analysis as well. The result showed that the collagen proliferation of both type Ⅰand Ⅳ was much reducible in the clenbuterol-treated group than that of the placebo-treated group (P<0.05). It was concluded that clenbuterol could inhibit partially the proliferation of intramuscular collagens in denervated skeletal muscle.
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Key words Clenbuterol Skeletal muscle Collagen Denervation
骨骨 各肌失去神经支配后，发生肌纤维萎缩及继发性纤维化，使肌肉的弹性降低。肌肉获得神经再支配后，其功能不能完全恢复[1，2]。因此，防止失神经骨骨 各肌内胶原的增生非常必要。大量的研究发现，β2-肾上腺素能受体激动剂——氨哮素，具有较强的抑制多种动物失神经骨骨 各肌纤维化的作用[3]，且能抵消植物血凝素、地塞米松及内毒素所致的骨骨 各肌萎缩[4]。为探讨氨哮素对人体失神经骨骨 各肌内胶原代谢的作用设计了研究。
1 材料与方法
1.1 实验设计及过程
采用安慰剂对照的随机双盲研究方法。患者为因臂丛神经损伤而致肌皮神经功能完全丧失，且无其它器官严重疾患者。有肱二头肌部位严重挤压等外伤史者或孕妇及哺乳期妇女，不作为研究对象。患者按入选日期及顺序编号后，随机分为治疗组或安慰剂组。氨哮素及安慰剂均由华山医院药剂科制成10 ml/支的密封口服液(氨哮素药粉由上海第十七制药厂提供)。每支氨哮素口服液含有氨哮素60 μg。安慰剂除不含氨哮素外，在外形、剂型、剂量及其他配方上均与氨哮素相同。药物治疗由术后第2天开始，每次1支，每天2次，连续服用3个月。研究受试者共71例，随访到25例，一般情况见附表。由附表可见，两组的年龄、用药前失神经时间及取材间隔时间，均无显著性差异(P>0.05)。
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1.2 检测指标及方法
手术时，在患侧上臂中点正前方，切取新鲜肱二头肌一块，用丝线系住肌肉一端，迅速将肌肉投入液氮中速冻。随访时再次在同样部位取材。肌肉速冻后，行连续冰冻切片，切片厚度为5 μm，待切片自然凉干后，丙酮固定10分钟，蒸馏水冲洗干净、凉干，密封存入-70℃深低温冰箱。随访结束后，使全部标本在同等条件下进行Ⅰ型、Ⅳ型胶原的免疫组织化学染色[5]：深低温保藏冰冻切片凉干后，用pH7.4、0.01 mol/L PBS冲洗。0.3% H2O2-甲醇溶液孵育30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。分别用1∶66的正常马及羊血清37℃孵育20分钟；1∶100抗Ⅰ型、Ⅳ型胶原抗体37℃孵育1小时，然后置4℃冰箱过夜。PBS冲洗干净后，用1∶200生物素化的二抗分别孵育30分钟，PBS内冲洗。然后用1∶100 ABC试剂孵育45分钟，PBS内冲洗3次。滴加DAB显色液，孵育5分钟。蒸馏水冲洗干净后，依次脱水、透明、封固。每次染色时均设置阴性对照，一抗换成PBS。试剂均购自Sigma公司。用TJTY-300图像分析系统，在同等条件下测量肌内膜及肌束膜中Ⅰ型胶原阳性染色区的灰度及厚度， 同时测量邻近部位阴性区的灰度作为背景灰度，用两者的差值表示检测部位的实际灰度， 反映Ⅰ型胶原蛋白的含量。测量基底膜中Ⅳ型
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附表 25例患者的一般资料(月，
±s) 组 别n
年龄(岁)
用药前失神经时间
随访间隔时间
氨哮素组
12
28.31±10.89
4.84±3.50
4.69±3.09
安慰剂组
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13
27.33± 5.85
4.08±2.25
5.00±3.02
胶原阳性区的灰度、厚度及邻近部位的背景灰度，用背景灰度与阳性区灰度的差值，反映Ⅳ型胶原的含量[6，7]。灰度增长率为用药后胶原的灰度减去用药前相应的灰度，再除以用药前的灰度。用药后胶原的厚度减去用药前相应的厚度，反映药物对胶原代谢的影响。原始数据输入电脑，由SPSS软件统计处理。
2 结果
2.1 氨哮素对失神经肱二头肌内Ⅰ型胶原代谢的影响
所有切片的Ⅰ型胶原免疫组织化学染色均呈强阳性反应，阳性区位于肌内膜及肌束膜上，反映出肌细胞的轮廓及肌肉的结缔组织支架。阴性对照片无阳性染色。氨哮素治疗组，肌内膜中Ⅰ型胶原的灰度增长率和肌束膜中Ⅰ型胶原的增厚程度均明显低于安慰剂对照组(P<0.05)，见图1，2。
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2.2 氨哮素对失神经肱二头肌内Ⅳ型胶原含量的影响
除阴性对照片外，Ⅳ型胶原免疫组织化学染色后，肌纤维基底膜均呈强阳性反应，基底膜呈线型，勾划出肌纤维轮廓。肌束膜等结缔组织无阳性反应。随着失神经时间的延长，基底膜丧失其光滑形状，呈现毛糙及增厚。经氨哮素治疗后，失神经肌细胞基底膜内Ⅳ型胶原的增长受到明显抑制(P<0.05)，见图3，4。
图1 用药前、后骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原厚度的
增加量(
±s，*P<0.01)图2 用药前、后骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原灰度增长率
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(
±s，*P<0.05)图3 重物砸伤肩部致右臂丛上、中干完全损伤5个月后
肌肉Ⅳ型胶原免疫组织化学染色( ×200)
a 用药前 b 服用氨哮素3个月
图4 车祸致左臂丛上干完全损伤5个月后肌肉
Ⅳ型胶原免疫组织化学染色( ×200)
a 用药前 b 服用安慰剂3个月
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3 讨论
结缔组织具有转运肌纤维的代谢物质，传输肌纤维的收缩力，为肌肉组织的修复和再生提供支架等作用。若过量增生将导致肌肉纤维化，阻碍再生神经纤维与肌细胞间的连接。而胶原是肌肉结缔组织中最主要的蛋白，因此控制失神经骨骨 各肌内胶原等结缔组织增生是维护失神经肌肉功能的重要方面。胶原中的一半位于肌内膜和肌束膜中。肌内膜和肌束膜中主要含有Ⅰ型、Ⅲ型胶原；肌肉中Ⅳ型、Ⅴ型胶原主要见于肌纤维基底膜及血管基底膜上。其中Ⅰ型胶原为一种硬胶原，它的显著增生可导致骨骨 各肌的顺应性和弹性降低，影响神经再支配后的功能[1，2，8]。
骨骨 各肌失神经后，胶原合成酶脯氨酸-4-羟化酶(prolyl-4-hydroxyloase，PH)、半乳糖-羟赖氨酸-葡萄糖转移酶(galctosyl-hydroxylysyl glucosyl transferase, GGT)的活性成倍上升，而且羟脯氨酸的含量也成倍升高，并见肌内膜、肌束膜及基底膜增厚，染色反应增强[1，2，8]。我们也观察到Ⅰ型、Ⅳ型胶原随失神经时间的延长而增加。
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Maltin等[9]研究发现，氨哮素对大鼠失神经骨骨 各肌萎缩的最低有效剂量为每天1 μg/kg～10 μg/kg，在这个剂量内无副作用。根据代谢体积进行物种间转换，每天10 μg/kg的大鼠有效剂量，相当于每天1 μg/kg、70 kg的成人安全剂量。目前，氨哮素用于防治支气管哮喘的每天总剂量为30 μg～120 μg。故我们用60 μg，每天2次治疗。结果显示，氨哮素能显著抑制人失神经骨骨 各肌内Ⅰ型、Ⅳ型胶原增生(P<0.05)，尤其对Ⅰ型胶原的增生控制较为明显。氨哮素对失神经骨骨 各肌内胶原代谢的影响，尚无临床研究报道。动物研究观察到氨哮素在减轻失神经骨骨 各肌萎缩的同时，非收缩成份无明显增生，细胞间隙明显减少[3]。
氨哮素影响失神经骨骨 各肌内胶原代谢的机制尚不清楚。研究表明：神经再支配能使失神经骨骨 各肌内升高的胶原合成酶PH和GGT的活性恢复正常，使升高的羟脯氨酸含量下降，提示神经支配能强有力的抑制性调节胶原的生物合成[10]。Maltin等[11]认为氨哮素是一种内源性神经肽，能模仿神经支配样作用，可以解释我们的研究中氨哮素对胶原合成的抑制。有人认为氨哮素通过β2-受体对失神经肌肉发生作用，骨骨 各肌内小动脉上富含β2-受体，在氨哮素的作用下，使小血管扩张，增加肌肉的氧和营养，从而抑制胶原增生。
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4 参考文献
1 Savolainen J, Myllyla V, Myllyla R et al. Effects of denervation and immobilization on collagen synthesis in rat skeletal muscle and tendon. J Physiol(Am), 1988;254(23):897
2 Salonen V, Lehto M, Kalimo H et al. Changes in intramuscular collagen and fibronectin in denervation atrophy. Muscle Nerve, 1985;8(2):125
3 Zeman RJ, Ludemann R, Etlinger JD. Clenbuterol, a β2-agonist, retards atrophy in denervated muscle. J Physiol(Am), 1987;252(1):152
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4 Bardocz S, Brown DS, Grant G et al. Effect of the β-adrenoceptor agonist clenbuterol and phytohaemagglutinin on growth, protein synthesis and polyamine metabolism of tissues of the rat. J Pharmacol(Br), 1992;106(2):476
5 Odermatt BF, Lang AB, Ruttner JR et al. Monoclonal antibodies to human type Ⅳ collagen useful reagents to demonstrate the heterotrimeric nature of the molecule. Proc Natl Acad Sci (USA), 1984;81(23):7343
6 汤耀法.光密度测定的稳定性以及有关参数的综合测定.上海医科大学学报，1997；24(1)：75
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7 Miller GR, Stauber WT. Use of computer-assisted analysis for myofiber size measurements of rat soleus muscles from photographed images, J hostochem. Cytochem, 1994;42(3):377
8 Peltonen L, Myllyla R, Tolonen U et al. Changes in collagen metabolism in diseased muscle. Ⅱ. Immunohistochemical studies. Arch Neurol, 1982;39(12):756
9 Maltin CA, Delday MI, Hay SM et al. Denervation increases clenbuterol sensitivity in muscle from young rats. Muscle Nerve, 1992;15(2):188
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10 Virtanen P, Tolonen U, Savolainen J et al. Effect of reinnervation on colllagen synthesis in rat skeletal muscle, J Appl Physiol, 1992;72(6):2069
11 Maltin CA, Delday MI, Campbell GP et al. Clenbuterol mimics effects of innervation on myogenic regulatory factor expression. J Physiol(Am), 1993;265(28):176
△ 卫生部科研基金资助项目
(收稿：1997-08-18), 百拇医药