HPLC测定微量小鼠血浆中对乙酰氨基酚的浓度
作者：缪海均 周 哲 邵元福 马玉杰
单位：缪海均 周 哲 邵元福 马玉杰(上海 200003 上海长征医院药材科)
关键词：对乙酰氨基酚；高效液相色谱法；药代动力学
980311摘要 建立了一种高效液相色谱法测定微量小鼠血浆中对乙酰氨基酚的浓度,采用非那西丁为内标,该法在5.00～150.0μg/ml范围内线性相关(r=0.9999,n=6),方法回收率在95%以上,日间日内相对标准偏差小于3%,与对乙酰氨基酚相关的6种药物对测定无干扰。应用该法测定小鼠经尾静脉给药后的血药浓度,得出有关药动学参数。Vc=0.7522(L/kg),T1/2=14.05min,CLS=0.3719 L/(kg.min)。
Determination of acetaminophen in mice by HPLC
, http://www.100md.com
Miao Haijun(Miao HJ),ZHou Zhe(Zhou Z),Sao Yuanfu(Sao YF),et al
(Changzheng Hopsital,Second Military Medical University,Shanghai 200003)
ABSTRACT A HPLC method for determination of Acetaminophen(PA) in mice plasma was reported.Pharmacetin was used as internal standard,the calibration curve was linear in the range from 5.00～150.0μg/ml(r=0.9999,n=6).The average recoveries of Acetaminophen was over 95%,the intraday and interday RSD were less than 3%.The pharmacokinetic characteristics of Acetaminophen in mice after a single intravenously was investigated by the method.
, 百拇医药
KEY WORDS acetaminophen,HPLC,pharmacokinetic
对乙酰氨基酚是一种临床上广泛应用的解热镇痛药,大剂量的对乙酰氨基酚具有肝毒性,因而被药理学和毒理学工作者作为研究肝损害的模型药物[1～2]。国内外对其人体的药代动力学报道不少[3～5],而小鼠的药代动力学报道不多。本文建立一种分析微量小鼠血浆中对乙酰氨基酚浓度的方法,简便、快速,具有一定的应用价值。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料
Waters高效液相色谱仪(包括510泵,486紫外检测器),NEC Powermate433计算机。
对乙酰氨基酚标准品(西北第二合成制药厂，含量≥99.5%),对乙酰氨基酚原料药(上海黄河制药厂)。所用试剂甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水。
, http://www.100md.com
昆明种小白鼠,雄性,体重18～22g(中国科学院实验动物中心0-05号)。
1.2 色谱条件
色谱柱:μBondapak C18柱(3.9×300mm,Waters);流动相:甲醇-水(45∶55);流速:1.0ml/min;柱温:室温;检测波长:254nm。
1.3 样品的分析
取小鼠血浆100μl于离心管中,加入25μg/ml内标溶液100μl,摇匀,加入甲醇600μl,旋涡震荡30s,5000r/min离心15min。取上清液10μl进样,记录色谱峰高,由对乙酰氨基酚峰高与内标峰高之比代入标准曲线方程,求得对乙酰氨基酚血药浓度。
1.4 标准曲线的绘制
, 百拇医药 取空白血浆100μl,分别加入浓度为5.00,10.0,25.0,50.0,100和150μg/ml标准液100μl,再加入内标溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,以对乙酰氨基酚峰高与内标峰高比(Y)对相应浓度(X)进行回归,求得回归方程为:Y=5.485×10-3+2.281×10-2X,r=0.9999。
1.5 精密度测定
取空白血浆100μl,分别加入浓度为10.0,100μg/ml溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,求得天内和天间精密度,结果:天内RSD=0.86%(n=3),天间RSD=1.47%,(n=3)。
1.6 回收率测定
取空白血浆100μl,分别加入浓度为10.0,100和150μg/ml溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,计算回收率,结果方法总回收率=101.0%,RSD=0.70%。
, 百拇医药
1.7 干扰实验
取甘利欣、葡萄糖醛酸内酯、维生素C、复方氨基比林、氢化可的松、维生素B2、维生素B6及阿司匹林加入血样进样,结果对测定无干扰。
1.8 应用
取小鼠18只,经尾静脉注射对乙酰氨基酚,剂量为100mg/Kg,于5,10,15,25,40和55min取血,每个时间点取3只小鼠,测定血药浓度,结果见附表,经药动学软件处理得有关药动学参数。Vc=0.7522(L/kg),T1/2=14.05min,CLS=0.3719L/(kg.min)。
附表 小鼠的血药浓度值(±s,n=3) 取血时间
(min)
, http://www.100md.com
血药浓度
(μg/ml)
取血时间
(min)
血药浓度
(μg/ml)
5
97.2±2.85
25
52.7±4.20
10
72.6±7.40
40
, http://www.100md.com
22.4±2.00
15
66.3±2.63
55
7.65±1.60
图1 样品色谱图
1-对乙酰氨基酚；2-非那西丁
图2 空白血浆色谱图
2 讨 论
血浆样品直接加入甲醇提取,提取完全,稳定,杂质对分离无干扰,且有机相不需挥干可直接进样,此法简便、选择性较强。
参考文献
, http://www.100md.com
1 Alhava E,Hassenen K,Nieminen E.Toxicity of paracetamol in relation to age in mice.Acta Pharmacol Toxicol，1978，42∶317.
2 Neil RP.Covalent binding of acetaminophen to N-10-formyl-tetrahydrofolate dehydrogenase in mice.J Pharma Exp Ther，1997，280∶501.
3 Sahajiwalla CG,Ayres JW. Multiple-dose acetaminophen pharmacokinetics.J Pharm Sci，1991，80∶855.
4 Brin,Ayres JW.Single dose bioavailability of acetaminophen following oral administrration.Int J Pharm,1989，54∶199
5 赵奕,阮邹荣,袁虹.对乙酰氨基酚PVP片的药代动力学及生物利用度研究.中国临床药理学杂志,1995，11(4)∶229.
收稿日期：1997-8-08, http://www.100md.com
单位：缪海均 周 哲 邵元福 马玉杰(上海 200003 上海长征医院药材科)
关键词：对乙酰氨基酚；高效液相色谱法；药代动力学
980311摘要 建立了一种高效液相色谱法测定微量小鼠血浆中对乙酰氨基酚的浓度,采用非那西丁为内标,该法在5.00～150.0μg/ml范围内线性相关(r=0.9999,n=6),方法回收率在95%以上,日间日内相对标准偏差小于3%,与对乙酰氨基酚相关的6种药物对测定无干扰。应用该法测定小鼠经尾静脉给药后的血药浓度,得出有关药动学参数。Vc=0.7522(L/kg),T1/2=14.05min,CLS=0.3719 L/(kg.min)。
Determination of acetaminophen in mice by HPLC
, http://www.100md.com
Miao Haijun(Miao HJ),ZHou Zhe(Zhou Z),Sao Yuanfu(Sao YF),et al
(Changzheng Hopsital,Second Military Medical University,Shanghai 200003)
ABSTRACT A HPLC method for determination of Acetaminophen(PA) in mice plasma was reported.Pharmacetin was used as internal standard,the calibration curve was linear in the range from 5.00～150.0μg/ml(r=0.9999,n=6).The average recoveries of Acetaminophen was over 95%,the intraday and interday RSD were less than 3%.The pharmacokinetic characteristics of Acetaminophen in mice after a single intravenously was investigated by the method.
, 百拇医药
KEY WORDS acetaminophen,HPLC,pharmacokinetic
对乙酰氨基酚是一种临床上广泛应用的解热镇痛药,大剂量的对乙酰氨基酚具有肝毒性,因而被药理学和毒理学工作者作为研究肝损害的模型药物[1～2]。国内外对其人体的药代动力学报道不少[3～5],而小鼠的药代动力学报道不多。本文建立一种分析微量小鼠血浆中对乙酰氨基酚浓度的方法,简便、快速,具有一定的应用价值。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料
Waters高效液相色谱仪(包括510泵,486紫外检测器),NEC Powermate433计算机。
对乙酰氨基酚标准品(西北第二合成制药厂，含量≥99.5%),对乙酰氨基酚原料药(上海黄河制药厂)。所用试剂甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水。
, http://www.100md.com
昆明种小白鼠,雄性,体重18～22g(中国科学院实验动物中心0-05号)。
1.2 色谱条件
色谱柱:μBondapak C18柱(3.9×300mm,Waters);流动相:甲醇-水(45∶55);流速:1.0ml/min;柱温:室温;检测波长:254nm。
1.3 样品的分析
取小鼠血浆100μl于离心管中,加入25μg/ml内标溶液100μl,摇匀,加入甲醇600μl,旋涡震荡30s,5000r/min离心15min。取上清液10μl进样,记录色谱峰高,由对乙酰氨基酚峰高与内标峰高之比代入标准曲线方程,求得对乙酰氨基酚血药浓度。
1.4 标准曲线的绘制
, 百拇医药 取空白血浆100μl,分别加入浓度为5.00,10.0,25.0,50.0,100和150μg/ml标准液100μl,再加入内标溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,以对乙酰氨基酚峰高与内标峰高比(Y)对相应浓度(X)进行回归,求得回归方程为:Y=5.485×10-3+2.281×10-2X,r=0.9999。
1.5 精密度测定
取空白血浆100μl,分别加入浓度为10.0,100μg/ml溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,求得天内和天间精密度,结果:天内RSD=0.86%(n=3),天间RSD=1.47%,(n=3)。
1.6 回收率测定
取空白血浆100μl,分别加入浓度为10.0,100和150μg/ml溶液100μl,按样品分析方法处理后进样,计算回收率,结果方法总回收率=101.0%,RSD=0.70%。
, 百拇医药
1.7 干扰实验
取甘利欣、葡萄糖醛酸内酯、维生素C、复方氨基比林、氢化可的松、维生素B2、维生素B6及阿司匹林加入血样进样,结果对测定无干扰。
1.8 应用
取小鼠18只,经尾静脉注射对乙酰氨基酚,剂量为100mg/Kg,于5,10,15,25,40和55min取血,每个时间点取3只小鼠,测定血药浓度,结果见附表,经药动学软件处理得有关药动学参数。Vc=0.7522(L/kg),T1/2=14.05min,CLS=0.3719L/(kg.min)。
附表 小鼠的血药浓度值(±s,n=3) 取血时间
(min)
, http://www.100md.com
血药浓度
(μg/ml)
取血时间
(min)
血药浓度
(μg/ml)
5
97.2±2.85
25
52.7±4.20
10
72.6±7.40
40
, http://www.100md.com
22.4±2.00
15
66.3±2.63
55
7.65±1.60
图1 样品色谱图
1-对乙酰氨基酚；2-非那西丁
图2 空白血浆色谱图
2 讨 论
血浆样品直接加入甲醇提取,提取完全,稳定,杂质对分离无干扰,且有机相不需挥干可直接进样,此法简便、选择性较强。
参考文献
, http://www.100md.com
1 Alhava E,Hassenen K,Nieminen E.Toxicity of paracetamol in relation to age in mice.Acta Pharmacol Toxicol，1978，42∶317.
2 Neil RP.Covalent binding of acetaminophen to N-10-formyl-tetrahydrofolate dehydrogenase in mice.J Pharma Exp Ther，1997，280∶501.
3 Sahajiwalla CG,Ayres JW. Multiple-dose acetaminophen pharmacokinetics.J Pharm Sci，1991，80∶855.
4 Brin,Ayres JW.Single dose bioavailability of acetaminophen following oral administrration.Int J Pharm,1989，54∶199
5 赵奕,阮邹荣,袁虹.对乙酰氨基酚PVP片的药代动力学及生物利用度研究.中国临床药理学杂志,1995，11(4)∶229.
收稿日期：1997-8-08, http://www.100md.com