米非司酮对人早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响
作者：杨业洲 曹泽毅 韩字研 刘卫平 李尚为 王和
单位：610072 成都，四川省人民医院妇产科(杨业洲)；华西医科大学附属第二医院妇产科(曹泽毅，韩字研，李尚为，王和)，病理教研室(刘卫平)
关键词：米非司酮；绒毛膜绒毛；脱噬作用
中华妇产科杂志980503 【编者按】 随着米非司酮终止早期妊娠的广泛开展，米非司酮的临床应用也不断扩大。已有大量用于中期妊娠终止、吸宫术前扩张宫颈的报道。也有用于子宫肌瘤、子宫内膜异位症及晚期妊娠促宫颈成熟与引产的报道。目前，国际上正集中于米非司酮用于紧急避孕的临床研究，并已开始探讨其用于避孕的可能性。对其作用机理的研究，亦日渐深入，从组织学观察进至组织化学、分子生物学等角度，并且还涉及到与着床、早期胚胎发育有关的各种因子，有的研究已深入至基因水平。我们希望能有更多的研究报道，不断充实对抗孕激素——米非司酮的认识。
, http://www.100md.com
【摘要】 目的 探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞增殖和凋亡的影响。方法 对15例正常早孕吸宫流产和15例米非司酮流产病例的绒毛组织，应用免疫组织化学ABC法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在细胞中的染色(细胞增殖)情况，DNA缺口原位末端标记法检测细胞凋亡。结果 正常早孕绒毛细胞滋养细胞增殖指数为53.74%±1.34%，且见细胞浆阳性染色，合体滋养细胞未见PCNA阳性染色；合体滋养细胞和细胞滋养细胞的凋亡指数分别为2.52%±0.86%和0.52%±0.26%；米非司酮流产绒毛细胞滋养细胞增殖指数降为50.86%±1.44%，细胞浆阳性现象消失；细胞凋亡指数显著增加，合体滋养细胞和细胞滋养细胞分别达到22.16%±2.26%和20.12%±1.74%。结论 米非司酮终止早孕可能是通过抑制滋养细胞增殖和促进滋养细胞凋亡来实现的。
Effects of Mifepristone on Proliferation and Apoptosis in Early Chorionic Villi Yang Yezhou, Cao Zeyi, Han Ziyan, et al. Si Chuan Provincial &127;Hospital, ChengDu 610072
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the effects of mifepristone on proliferation and apoptosis in early pregnant chorionic villi. Methods Proliferation and apoptosis in early pregnant choionic villi from surgical aspiration and mifepristone induced abortion were studied. Marker for proliferation is proliferating cell nuclear antigen (PCNA)immunohistochemical staining, apoptotic cell death was detected using DNA in situ terminal deoxynucleotidyl transferas-mediated dUTP-biotin nick ending labeling(TUNEL). Results In early pregnant chorionic villi, proliferating index of cytotrophoblasts was 53.74%±1.34%, not only nuclear but also cytoplasma were PCNA positive staining,syncytiotrophoblasts were negative. There existed apoptotic cell death in trophoblasts,the apoptotic index were 2.52%±0.86% in syncytiotrophoblasts and 0.52%±0.26% in cytotrophblasts, respectively. After 2 days mifepristone treatment, the proliferating index of cytotrophoblasts decreased slightly and PCNA positive cytoplasmic expression disappeared; while apoptotic cell increased significantly, the apoptotic indices were 22.16%±2.26% in syncytiotrophoblasts and 20.12%±1.74% in cytotrophoblasts, respectively. Conclusion Mifepristone may inhibit proliferation and promote apoptosis of trophoblasts in early pregnant chorionic villi.
, 百拇医药
【Key words】 Mifepristone Chorionic villi Apoptosis
米非司酮在受体水平拮抗孕激素生物学效应，对胚胎及其支持组织的代谢和形态结构产生多方面的影响[1]，其作用的细胞学机理仍在探索中，是否影响绒毛滋养细胞增殖与凋亡，国内外尚未见报道。本研究应用免疫组织化学(免疫组化)和DNA缺口原位末端标记技术，检测米非司酮流产绒毛细胞增殖和凋亡情况，从细胞水平探讨其终止早孕的作用机理。
资料与方法
一、资料来源
对1995年9月至12月在华西医科大学附属第二医院妇产科接受米非司酮药物流产的早孕妇女15例(米非司酮组)进行研究，同时选择在该院行吸宫流产的早孕妇女15例为对照组。两组均无急、慢性器质性病变，3个月内未用过甾体激素类药物，一周内未用过抗生素，对照组停经44.6±5.1天(±s, 下同；33天～49天)，孕囊直径为1.9±0.3 cm(0.6 cm～2.9 cm)，米非司酮组停经43.2±4.6天(34天～48天)，孕囊直径为1.9±0.3 cm(0.7 cm～2.9 cm)。对照组按常规进行吸宫流产。米非司酮组服米非司酮连续2日，早晨为25 mg，晚上为50 mg，第3日早晨顿服米索前列醇600 μg后来院观察6小时或至孕囊排出，服药前、后2小时内禁食。
, 百拇医药
二、方法
1.早孕流产绒毛的处理：孕囊排出后分离绒毛，立即用10%中性福马林固定，石蜡包埋，5 μm连续切片3张，60℃烘烤3小时后置37℃恒温箱中过夜备用。
2.细胞增殖状态检测：以增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表达情况作为细胞增殖状态指标，采用免疫组化ABC法，PCNA单克隆抗体购自DaKo公司，使用稀释度为1∶40。
3.细胞凋亡状态检测：采用Gavrieli等[2]的DNA缺口原位末端标记法(TDT-mediated dUTP biotin nick ending labeling，TUNEL)，略加修改。石蜡切片脱蜡后，依次用蛋白酶K(20 μg/ml)，TDT缓冲液(30 mmol Tris base, 200 mmol二甲胂酸钠,5 mmol氯化钴, pH为7.2)、DNA缺口标记混合液(0.25 U/μl TDT,10 μmol biotin-16-dUTP)、2%人血清白蛋白、1/300链亲合素标记碱性磷酸酶、碱性磷酸酶作用底物缓冲液(100mmol Tris base, 100mmol NaCl,50 mmol MgC2, pH为8.5)处理后，1/50 NBT/BCIP显色，核固红复染，甘油明胶封片。以中线恶网阳性标本为阳性对照，以TDT缓冲液代替DNA标记混合液为空白对照。
, 百拇医药
4、结果判定：免疫组化染色判定：细胞成分中出现棕黄色颗粒为PCNA阳性细胞，PCNA阳性细胞为增殖中细胞。TUNEL法判定：细胞染成深蓝色或紫黑色为阳性细胞，即凋亡细胞。每例计数500个细胞进行统计分析，PCNA染色阳性细胞百分率为增殖指数，TUNEL染色阳性细胞百分率为凋亡指数。
三、统计学方法
采用t检验。
结果
一、早孕绒毛增殖和凋亡情况
吸宫流产所获正常孕5～7周绒毛中，细胞滋养细胞和间质细胞免疫组化染色PCNA阳性，细胞滋养细胞中增殖指数为53.74%±1.34%，合体滋养细胞免疫组化染色PCNA阴性。PCNA着色的细胞成分以细胞核为主，部分细胞胞浆着色(图1)。TUNEL法染色阳性滋养细胞数很少，合体滋养细胞中凋亡指数为2.52%±0.86%，细胞滋养细胞的凋亡指数为0.52%±0.26%(图2)。
, 百拇医药
二、米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响
米非司酮作用2天后的早孕绒毛组织中，细胞滋养细胞的增殖指数与对照组相似，但未见细胞浆PCNA阳性着色，部分合体滋养细胞核PCNA弱阳性着色(图3，附表)。滋养细胞凋亡指数较对照组显著增加，合体滋养细胞达到22.16%±2.26%，细胞滋养细胞达到20.12%±1.74%(图4，附表)。
讨论
一、人早孕绒毛滋养细胞增殖与凋亡
PCNA是DNA聚合酶δ的一种附属蛋白，在细胞增殖中周期性表达，能良好地反映细胞增殖状态[3]。本研究观察到，人孕5～7周妊娠绒毛细胞中，53.74%的细胞滋养细胞表达PCNA阳性，而合
附表 米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响(x±s) 组别
, 百拇医药
总例数
增殖指数(%)
凋亡指数(%)
细胞滋养细胞
合体滋养细胞
合计
细胞滋养细胞
合体滋养细胞
合计
对照组
15
53.74±1.34
0
, 百拇医药
28.34±0.84
0.52±0.26
2.52±0.86
1.36±0.68
米非司酮组
15
50.86±1.44
22.12±2.18
36.68±1.82*
20.12±1.74*
22.16±2.26*
, http://www.100md.com
20.68±1.46*
* P<0.01 体滋养细胞阴性，类似于梅圭吾等[4]的结果，。同时我们发现，细胞滋养细胞胞浆存在PCNA阳性着色现象，而该抗原的理论定位在细胞核，Brankenship等[5]认为，这是PCNA合成和降解的影响所致，细胞浆PCNA阳性提示细胞增殖活跃。因此，我们的结果再次证实，在早孕妊娠绒毛中细胞滋养细胞增殖旺盛，合体滋养细胞为分化终末细胞，无增殖能力。细胞凋亡是细胞生活周期的最后阶段，存在于各种类型细胞中。我们发现，在人孕5～7周妊娠绒毛滋养细胞中存在细胞凋亡，合体滋养细胞较多，与樱木范明等[6]的研究结果一致。合体滋养细胞是分化终末细胞，凋亡是其必然结局。细胞滋养细胞凋亡可能与绒毛发育、DNA修复障碍以及对邻近细胞凋亡DNA片段的吞噬有关。已经发现，随妊娠进展，绒毛结构逐渐变薄，利于母胎间物质转运，以同步于胎儿生长发育，其结构变化的本质是细胞数量的减少，其中细胞滋养细胞减少最多[7]，这种减少，一方面是通过减少增殖[5]，另一方面可能是通过凋亡来实现的。
, 百拇医药
二、米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响及意义
本研究发现，米非司酮作用后的绒毛组成细胞中，细胞滋养细胞胞浆PCNA着色消失，提示米非司酮能抑制细胞滋养细胞增殖。合体滋养细胞中出现PCNA弱阳性着色，可能由于该药作用于细胞滋养细胞后对增殖的抑制是在G1期前，已跨越G1期第一检查点的细胞继续完成其增殖过程并移行成合体滋养细胞，这种细胞丧失了对PCNA的降解能力，但这点需要进一步研究证实。
应用米非司酮2天后，在体早孕绒毛滋养细胞凋亡指数增加12.3倍，细胞滋养细胞和合体滋养细胞同步增加，提示米非司酮能诱导和促进滋养细胞凋亡，在孕囊排出后继续应用该药一段时间，促进残留的活性滋养细胞凋亡，可能会减少流血时间。米非司酮能否直接作用于妊娠绒毛，观点不一。Shi等[8]从妊娠蜕膜和绒毛组织孕酮受体含量及米非司酮作用后的变化推测，米非司酮不能直接作用于绒毛组织。刘伯宁等[9]发现，米非司酮流产失败行人工流产者，绒毛退变明显重于蜕膜，这种改变提示米非司酮能直接作用于妊娠绒毛。本研究发现，米非司酮能抑制滋养细胞增殖，诱导和促进其凋亡发生，增殖和凋亡都是细胞的主动活动方式，因此米非司酮对早孕绒毛的这种作用应是直接的。
, 百拇医药
图1 孕6周绒毛组织部分细胞滋养细胞PCNA阳性着色，合体滋养细胞阴性。免疫化ABC×400
图2 孕6周+3口服米非司酮2天后绒毛组织细胞滋养细胞核PCNA阳性着色，胞浆着色现象消失，部分合体滋养细肛包核阳性着色。免疫组化×400 图3 孕周+4绒毛组织细胞各组成细胞均见凋亡细胞，合体滋养细胞中稍多。TUNEL×400 图4 孕6周+1口服米司酮后绒毛细胞各组成细胞中凋亡细胞明显增多。TUNEL×400
参考文献
1 Spitz IM， Bardin CW. Clinical pharmacology of RU486: an antiprogestin and antiglucocorticoid.Contraception, 1993, 48:403-444.
2 Gavrieli Y,&127;Sherman Y, Ben-Sasson SA. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation.J Cell Biol,1992，119:493-501.
, http://www.100md.com
3 Kurki P, Vanderlan M, Dolbeare F, et al. Expression of proliferating cell nuclear antigen(PCNA)/cyclin during the cell cycle.Exp Cell Res,1986，166:209-219.
4 梅圭吾,大井ヒロ子,中岛德郎,他.正常绒毛组织におけるLey抗原.に关する免疫组织化学的研究.日产妇志，1994，46:1063-1064.
5 Blankenship TN， King BF.Developmental expression of ki-67 antigen and proliferating cell nuclear antigen in macaque placentas. Dev Dyn,1994，201:324-333.
6 樱木范明, 石仓 浩,晴山 仁志, 他. DNA nick end labelingを用いたヒト绒毛细胞におけるアポト-シスの检讨. 日产妇志,1994，46:533-544.
, http://www.100md.com
7 唐敏一,刘彤华主编.胎盘病理学.北京：人民卫生出版社,1987.5.
8 Shi WL,Wang TD, Fu Y, et al. Estrogen and progesterone receptor in human decidua after RU486 treatment. Fertil Steril,1993，60:68-73.
9 刘伯宁,孙剑英,陶雯琪,等.米非司酮终止早孕流产物的病理观察.&127;中华妇产科杂志,1995，30:7-9.
(收稿：1997-05-21 修回：1998-02-11), 百拇医药
单位：610072 成都，四川省人民医院妇产科(杨业洲)；华西医科大学附属第二医院妇产科(曹泽毅，韩字研，李尚为，王和)，病理教研室(刘卫平)
关键词：米非司酮；绒毛膜绒毛；脱噬作用
中华妇产科杂志980503 【编者按】 随着米非司酮终止早期妊娠的广泛开展，米非司酮的临床应用也不断扩大。已有大量用于中期妊娠终止、吸宫术前扩张宫颈的报道。也有用于子宫肌瘤、子宫内膜异位症及晚期妊娠促宫颈成熟与引产的报道。目前，国际上正集中于米非司酮用于紧急避孕的临床研究，并已开始探讨其用于避孕的可能性。对其作用机理的研究，亦日渐深入，从组织学观察进至组织化学、分子生物学等角度，并且还涉及到与着床、早期胚胎发育有关的各种因子，有的研究已深入至基因水平。我们希望能有更多的研究报道，不断充实对抗孕激素——米非司酮的认识。
, http://www.100md.com
【摘要】 目的 探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞增殖和凋亡的影响。方法 对15例正常早孕吸宫流产和15例米非司酮流产病例的绒毛组织，应用免疫组织化学ABC法检测增殖细胞核抗原(PCNA)在细胞中的染色(细胞增殖)情况，DNA缺口原位末端标记法检测细胞凋亡。结果 正常早孕绒毛细胞滋养细胞增殖指数为53.74%±1.34%，且见细胞浆阳性染色，合体滋养细胞未见PCNA阳性染色；合体滋养细胞和细胞滋养细胞的凋亡指数分别为2.52%±0.86%和0.52%±0.26%；米非司酮流产绒毛细胞滋养细胞增殖指数降为50.86%±1.44%，细胞浆阳性现象消失；细胞凋亡指数显著增加，合体滋养细胞和细胞滋养细胞分别达到22.16%±2.26%和20.12%±1.74%。结论 米非司酮终止早孕可能是通过抑制滋养细胞增殖和促进滋养细胞凋亡来实现的。
Effects of Mifepristone on Proliferation and Apoptosis in Early Chorionic Villi Yang Yezhou, Cao Zeyi, Han Ziyan, et al. Si Chuan Provincial &127;Hospital, ChengDu 610072
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the effects of mifepristone on proliferation and apoptosis in early pregnant chorionic villi. Methods Proliferation and apoptosis in early pregnant choionic villi from surgical aspiration and mifepristone induced abortion were studied. Marker for proliferation is proliferating cell nuclear antigen (PCNA)immunohistochemical staining, apoptotic cell death was detected using DNA in situ terminal deoxynucleotidyl transferas-mediated dUTP-biotin nick ending labeling(TUNEL). Results In early pregnant chorionic villi, proliferating index of cytotrophoblasts was 53.74%±1.34%, not only nuclear but also cytoplasma were PCNA positive staining,syncytiotrophoblasts were negative. There existed apoptotic cell death in trophoblasts,the apoptotic index were 2.52%±0.86% in syncytiotrophoblasts and 0.52%±0.26% in cytotrophblasts, respectively. After 2 days mifepristone treatment, the proliferating index of cytotrophoblasts decreased slightly and PCNA positive cytoplasmic expression disappeared; while apoptotic cell increased significantly, the apoptotic indices were 22.16%±2.26% in syncytiotrophoblasts and 20.12%±1.74% in cytotrophoblasts, respectively. Conclusion Mifepristone may inhibit proliferation and promote apoptosis of trophoblasts in early pregnant chorionic villi.
, 百拇医药
【Key words】 Mifepristone Chorionic villi Apoptosis
米非司酮在受体水平拮抗孕激素生物学效应，对胚胎及其支持组织的代谢和形态结构产生多方面的影响[1]，其作用的细胞学机理仍在探索中，是否影响绒毛滋养细胞增殖与凋亡，国内外尚未见报道。本研究应用免疫组织化学(免疫组化)和DNA缺口原位末端标记技术，检测米非司酮流产绒毛细胞增殖和凋亡情况，从细胞水平探讨其终止早孕的作用机理。
资料与方法
一、资料来源
对1995年9月至12月在华西医科大学附属第二医院妇产科接受米非司酮药物流产的早孕妇女15例(米非司酮组)进行研究，同时选择在该院行吸宫流产的早孕妇女15例为对照组。两组均无急、慢性器质性病变，3个月内未用过甾体激素类药物，一周内未用过抗生素，对照组停经44.6±5.1天(±s, 下同；33天～49天)，孕囊直径为1.9±0.3 cm(0.6 cm～2.9 cm)，米非司酮组停经43.2±4.6天(34天～48天)，孕囊直径为1.9±0.3 cm(0.7 cm～2.9 cm)。对照组按常规进行吸宫流产。米非司酮组服米非司酮连续2日，早晨为25 mg，晚上为50 mg，第3日早晨顿服米索前列醇600 μg后来院观察6小时或至孕囊排出，服药前、后2小时内禁食。
, 百拇医药
二、方法
1.早孕流产绒毛的处理：孕囊排出后分离绒毛，立即用10%中性福马林固定，石蜡包埋，5 μm连续切片3张，60℃烘烤3小时后置37℃恒温箱中过夜备用。
2.细胞增殖状态检测：以增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表达情况作为细胞增殖状态指标，采用免疫组化ABC法，PCNA单克隆抗体购自DaKo公司，使用稀释度为1∶40。
3.细胞凋亡状态检测：采用Gavrieli等[2]的DNA缺口原位末端标记法(TDT-mediated dUTP biotin nick ending labeling，TUNEL)，略加修改。石蜡切片脱蜡后，依次用蛋白酶K(20 μg/ml)，TDT缓冲液(30 mmol Tris base, 200 mmol二甲胂酸钠,5 mmol氯化钴, pH为7.2)、DNA缺口标记混合液(0.25 U/μl TDT,10 μmol biotin-16-dUTP)、2%人血清白蛋白、1/300链亲合素标记碱性磷酸酶、碱性磷酸酶作用底物缓冲液(100mmol Tris base, 100mmol NaCl,50 mmol MgC2, pH为8.5)处理后，1/50 NBT/BCIP显色，核固红复染，甘油明胶封片。以中线恶网阳性标本为阳性对照，以TDT缓冲液代替DNA标记混合液为空白对照。
, 百拇医药
4、结果判定：免疫组化染色判定：细胞成分中出现棕黄色颗粒为PCNA阳性细胞，PCNA阳性细胞为增殖中细胞。TUNEL法判定：细胞染成深蓝色或紫黑色为阳性细胞，即凋亡细胞。每例计数500个细胞进行统计分析，PCNA染色阳性细胞百分率为增殖指数，TUNEL染色阳性细胞百分率为凋亡指数。
三、统计学方法
采用t检验。
结果
一、早孕绒毛增殖和凋亡情况
吸宫流产所获正常孕5～7周绒毛中，细胞滋养细胞和间质细胞免疫组化染色PCNA阳性，细胞滋养细胞中增殖指数为53.74%±1.34%，合体滋养细胞免疫组化染色PCNA阴性。PCNA着色的细胞成分以细胞核为主，部分细胞胞浆着色(图1)。TUNEL法染色阳性滋养细胞数很少，合体滋养细胞中凋亡指数为2.52%±0.86%，细胞滋养细胞的凋亡指数为0.52%±0.26%(图2)。
, 百拇医药
二、米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响
米非司酮作用2天后的早孕绒毛组织中，细胞滋养细胞的增殖指数与对照组相似，但未见细胞浆PCNA阳性着色，部分合体滋养细胞核PCNA弱阳性着色(图3，附表)。滋养细胞凋亡指数较对照组显著增加，合体滋养细胞达到22.16%±2.26%，细胞滋养细胞达到20.12%±1.74%(图4，附表)。
讨论
一、人早孕绒毛滋养细胞增殖与凋亡
PCNA是DNA聚合酶δ的一种附属蛋白，在细胞增殖中周期性表达，能良好地反映细胞增殖状态[3]。本研究观察到，人孕5～7周妊娠绒毛细胞中，53.74%的细胞滋养细胞表达PCNA阳性，而合
附表 米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响(x±s) 组别
, 百拇医药
总例数
增殖指数(%)
凋亡指数(%)
细胞滋养细胞
合体滋养细胞
合计
细胞滋养细胞
合体滋养细胞
合计
对照组
15
53.74±1.34
0
, 百拇医药
28.34±0.84
0.52±0.26
2.52±0.86
1.36±0.68
米非司酮组
15
50.86±1.44
22.12±2.18
36.68±1.82*
20.12±1.74*
22.16±2.26*
, http://www.100md.com
20.68±1.46*
* P<0.01 体滋养细胞阴性，类似于梅圭吾等[4]的结果，。同时我们发现，细胞滋养细胞胞浆存在PCNA阳性着色现象，而该抗原的理论定位在细胞核，Brankenship等[5]认为，这是PCNA合成和降解的影响所致，细胞浆PCNA阳性提示细胞增殖活跃。因此，我们的结果再次证实，在早孕妊娠绒毛中细胞滋养细胞增殖旺盛，合体滋养细胞为分化终末细胞，无增殖能力。细胞凋亡是细胞生活周期的最后阶段，存在于各种类型细胞中。我们发现，在人孕5～7周妊娠绒毛滋养细胞中存在细胞凋亡，合体滋养细胞较多，与樱木范明等[6]的研究结果一致。合体滋养细胞是分化终末细胞，凋亡是其必然结局。细胞滋养细胞凋亡可能与绒毛发育、DNA修复障碍以及对邻近细胞凋亡DNA片段的吞噬有关。已经发现，随妊娠进展，绒毛结构逐渐变薄，利于母胎间物质转运，以同步于胎儿生长发育，其结构变化的本质是细胞数量的减少，其中细胞滋养细胞减少最多[7]，这种减少，一方面是通过减少增殖[5]，另一方面可能是通过凋亡来实现的。
, 百拇医药
二、米非司酮对早孕绒毛细胞增殖和凋亡的影响及意义
本研究发现，米非司酮作用后的绒毛组成细胞中，细胞滋养细胞胞浆PCNA着色消失，提示米非司酮能抑制细胞滋养细胞增殖。合体滋养细胞中出现PCNA弱阳性着色，可能由于该药作用于细胞滋养细胞后对增殖的抑制是在G1期前，已跨越G1期第一检查点的细胞继续完成其增殖过程并移行成合体滋养细胞，这种细胞丧失了对PCNA的降解能力，但这点需要进一步研究证实。
应用米非司酮2天后，在体早孕绒毛滋养细胞凋亡指数增加12.3倍，细胞滋养细胞和合体滋养细胞同步增加，提示米非司酮能诱导和促进滋养细胞凋亡，在孕囊排出后继续应用该药一段时间，促进残留的活性滋养细胞凋亡，可能会减少流血时间。米非司酮能否直接作用于妊娠绒毛，观点不一。Shi等[8]从妊娠蜕膜和绒毛组织孕酮受体含量及米非司酮作用后的变化推测，米非司酮不能直接作用于绒毛组织。刘伯宁等[9]发现，米非司酮流产失败行人工流产者，绒毛退变明显重于蜕膜，这种改变提示米非司酮能直接作用于妊娠绒毛。本研究发现，米非司酮能抑制滋养细胞增殖，诱导和促进其凋亡发生，增殖和凋亡都是细胞的主动活动方式，因此米非司酮对早孕绒毛的这种作用应是直接的。
, 百拇医药
图1 孕6周绒毛组织部分细胞滋养细胞PCNA阳性着色，合体滋养细胞阴性。免疫化ABC×400
图2 孕6周+3口服米非司酮2天后绒毛组织细胞滋养细胞核PCNA阳性着色，胞浆着色现象消失，部分合体滋养细肛包核阳性着色。免疫组化×400 图3 孕周+4绒毛组织细胞各组成细胞均见凋亡细胞，合体滋养细胞中稍多。TUNEL×400 图4 孕6周+1口服米司酮后绒毛细胞各组成细胞中凋亡细胞明显增多。TUNEL×400
参考文献
1 Spitz IM， Bardin CW. Clinical pharmacology of RU486: an antiprogestin and antiglucocorticoid.Contraception, 1993, 48:403-444.
2 Gavrieli Y,&127;Sherman Y, Ben-Sasson SA. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation.J Cell Biol,1992，119:493-501.
, http://www.100md.com
3 Kurki P, Vanderlan M, Dolbeare F, et al. Expression of proliferating cell nuclear antigen(PCNA)/cyclin during the cell cycle.Exp Cell Res,1986，166:209-219.
4 梅圭吾,大井ヒロ子,中岛德郎,他.正常绒毛组织におけるLey抗原.に关する免疫组织化学的研究.日产妇志，1994，46:1063-1064.
5 Blankenship TN， King BF.Developmental expression of ki-67 antigen and proliferating cell nuclear antigen in macaque placentas. Dev Dyn,1994，201:324-333.
6 樱木范明, 石仓 浩,晴山 仁志, 他. DNA nick end labelingを用いたヒト绒毛细胞におけるアポト-シスの检讨. 日产妇志,1994，46:533-544.
, http://www.100md.com
7 唐敏一,刘彤华主编.胎盘病理学.北京：人民卫生出版社,1987.5.
8 Shi WL,Wang TD, Fu Y, et al. Estrogen and progesterone receptor in human decidua after RU486 treatment. Fertil Steril,1993，60:68-73.
9 刘伯宁,孙剑英,陶雯琪,等.米非司酮终止早孕流产物的病理观察.&127;中华妇产科杂志,1995，30:7-9.
(收稿：1997-05-21 修回：1998-02-11), 百拇医药