银屑病患者皮损与非皮损中热休克蛋白的表达
作者：庞晓文 杨雪琴 孟如松 李世荫
单位：100083 北京医科大学第三医院皮肤科(庞晓文 李世荫)；空军总医院皮肤科(杨雪琴 孟如松)
关键词：
中华皮肤科杂志980620 热休克蛋白(HSPs)自发现至今，人们已作了大量的基础研究，但它与银屑病的关系，则报道不多。我们主要就HSP27和HSP70在正常人皮肤及银屑病皮损与非皮损中的表达情况作一初步探讨。
一、材料和方法
(一)病例和取材：24例临床和病理确诊为寻常型银屑病的患者，男16例，女8例；年龄14～72岁，平均39岁；病程10个月至26年不等，其中静止期5例，进行期19例。患者自愿合作后取材。取材前1个月内未服用过皮质类固醇、免疫抑制剂及维A酸类药物，不伴肿瘤及其它严重疾患。每例均用3mm环钻取患者背部丘疹鳞屑(5例)或斑块状(19例)皮损及相距5cm之非皮损各1块；正常人对照6例取自外科非皮肤病手术的正常皮肤。组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，室温下保存。
, 百拇医药
(二)方法：HSP27单克隆抗体为美国Neomarker公司产品，购自北京岳泰科技有限责任公司，HSP70单克隆抗体为美国Santa Cruz生物技术公司产品，它和SP免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。采用常规LSAB免疫组化方法，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水；0.05%胰酶消化，37℃ 30分；三蒸水洗时间2分共3次；3%过氧化氢孵育，室温，10分；三蒸水洗2分，共3次；0.05mol/L pH7.6的Tris·HCl缓冲液平衡，5分；10%正常山羊血清封闭，室温，60分钟；倾去血清，加入1∶100 Tris·HCl稀释的一抗，4℃，过夜；Tris·HCl洗5分3次；滴加生物素标记的二抗，1∶300稀释，37℃，35分钟；Tris·HCl洗5分，共3次；滴加辣根酶标记的链霉亲合素，1∶300稀释，37℃，35分；Tris·HCl洗5分，共3次；DAB显色；自来水充分冲洗，苏木素复染，中性树脂封片。阴性对照以Tris·HCl缓冲液代替一抗；以已知结肠癌组织细胞核表达结果为阳性对照。
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二、结果
HSP27在正常人表皮呈基础表达，从基底层至颗粒层表达逐渐增强，为胞浆棕色颗粒状着色，角质层和真皮组织无表达；在银屑病非皮损中表达情况与其在正常人皮肤中相同；在银屑病皮损中其表达为阴性。
HSP70在正常人皮肤呈均匀的表皮全层表达，为胞浆棕色颗粒状着色，角质层和真皮无表达；在银屑病非皮损中的表达与其在正常人皮肤中相同；在银屑病皮损中表皮细胞及真皮组织均无表达。
HSP27和HSP70在银屑病进行期和静止期患者中的表达情况无明显差异。
三、讨论
热休克蛋白广泛存在于自然界原核、真核细胞中，是一族进化上高度保守的蛋白质。在正常细胞中即呈基础表达，执行一系列基本的生理功能，在不利的应激条件下表达增高，参与细胞的损伤修复，发挥应激保护作用[1]。HSPs还具有协同免疫功能[2]，在感染免疫、肿瘤免疫及自身免疫中均有重要作用[3]。本实验中，HSP27和HSP70在正常人皮肤中的表达说明其对维持表皮的正常生理功能起着重要作用。在应激状态下，银屑病非皮损表皮具有一定的抗应激能力，HSP27和HSP70的表达发挥了重要的应激保护作用，从而阻止了银屑病表皮过度增生和分化不全皮损的出现；同时，HSP27从基底层至颗粒层表达逐渐增强，说明其在表皮正常的终末分化中亦有重要意义；在银屑病皮损中，表皮抗应激能力低下，HSP27和HSP70表达消失，失去其应激保护能力，而出现银屑病皮损。
, 百拇医药
我们为进一步了解正常人及银屑病皮损、非皮损中HSP的表达情况，采用经典的LSAB免疫组化法，对24例临床及病理均确诊为寻常型银屑病的患者所作的研究，得出了非常一致的结果：即银屑病皮损中HSP27和HSP70的表达均为阴性。我们认为，从病例的选取到检测的方法及结果分析，我们的结论应该是可信的。
本文为中国人民解放军总后卫生部科研基金资助课题
参考文献
1 Schlesiger MJ. Heat shock proteins. J Biol Chem, 1990,265∶12111-12114.
2 Kaufmann SHE. Heat shock proteins and the immune response. Immunol Today, 1990,11∶129-136.
3 Jindal S. Heat shock proteins: applications in health and disease. Trends Biotechnol, 1996,14∶17-20.
(收稿：1997-10-05 修回：1998-03-13), 百拇医药
单位：100083 北京医科大学第三医院皮肤科(庞晓文 李世荫)；空军总医院皮肤科(杨雪琴 孟如松)
关键词：
中华皮肤科杂志980620 热休克蛋白(HSPs)自发现至今，人们已作了大量的基础研究，但它与银屑病的关系，则报道不多。我们主要就HSP27和HSP70在正常人皮肤及银屑病皮损与非皮损中的表达情况作一初步探讨。
一、材料和方法
(一)病例和取材：24例临床和病理确诊为寻常型银屑病的患者，男16例，女8例；年龄14～72岁，平均39岁；病程10个月至26年不等，其中静止期5例，进行期19例。患者自愿合作后取材。取材前1个月内未服用过皮质类固醇、免疫抑制剂及维A酸类药物，不伴肿瘤及其它严重疾患。每例均用3mm环钻取患者背部丘疹鳞屑(5例)或斑块状(19例)皮损及相距5cm之非皮损各1块；正常人对照6例取自外科非皮肤病手术的正常皮肤。组织经10%福尔马林固定，石蜡包埋，室温下保存。
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(二)方法：HSP27单克隆抗体为美国Neomarker公司产品，购自北京岳泰科技有限责任公司，HSP70单克隆抗体为美国Santa Cruz生物技术公司产品，它和SP免疫组化试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。采用常规LSAB免疫组化方法，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水；0.05%胰酶消化，37℃ 30分；三蒸水洗时间2分共3次；3%过氧化氢孵育，室温，10分；三蒸水洗2分，共3次；0.05mol/L pH7.6的Tris·HCl缓冲液平衡，5分；10%正常山羊血清封闭，室温，60分钟；倾去血清，加入1∶100 Tris·HCl稀释的一抗，4℃，过夜；Tris·HCl洗5分3次；滴加生物素标记的二抗，1∶300稀释，37℃，35分钟；Tris·HCl洗5分，共3次；滴加辣根酶标记的链霉亲合素，1∶300稀释，37℃，35分；Tris·HCl洗5分，共3次；DAB显色；自来水充分冲洗，苏木素复染，中性树脂封片。阴性对照以Tris·HCl缓冲液代替一抗；以已知结肠癌组织细胞核表达结果为阳性对照。
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二、结果
HSP27在正常人表皮呈基础表达，从基底层至颗粒层表达逐渐增强，为胞浆棕色颗粒状着色，角质层和真皮组织无表达；在银屑病非皮损中表达情况与其在正常人皮肤中相同；在银屑病皮损中其表达为阴性。
HSP70在正常人皮肤呈均匀的表皮全层表达，为胞浆棕色颗粒状着色，角质层和真皮无表达；在银屑病非皮损中的表达与其在正常人皮肤中相同；在银屑病皮损中表皮细胞及真皮组织均无表达。
HSP27和HSP70在银屑病进行期和静止期患者中的表达情况无明显差异。
三、讨论
热休克蛋白广泛存在于自然界原核、真核细胞中，是一族进化上高度保守的蛋白质。在正常细胞中即呈基础表达，执行一系列基本的生理功能，在不利的应激条件下表达增高，参与细胞的损伤修复，发挥应激保护作用[1]。HSPs还具有协同免疫功能[2]，在感染免疫、肿瘤免疫及自身免疫中均有重要作用[3]。本实验中，HSP27和HSP70在正常人皮肤中的表达说明其对维持表皮的正常生理功能起着重要作用。在应激状态下，银屑病非皮损表皮具有一定的抗应激能力，HSP27和HSP70的表达发挥了重要的应激保护作用，从而阻止了银屑病表皮过度增生和分化不全皮损的出现；同时，HSP27从基底层至颗粒层表达逐渐增强，说明其在表皮正常的终末分化中亦有重要意义；在银屑病皮损中，表皮抗应激能力低下，HSP27和HSP70表达消失，失去其应激保护能力，而出现银屑病皮损。
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我们为进一步了解正常人及银屑病皮损、非皮损中HSP的表达情况，采用经典的LSAB免疫组化法，对24例临床及病理均确诊为寻常型银屑病的患者所作的研究，得出了非常一致的结果：即银屑病皮损中HSP27和HSP70的表达均为阴性。我们认为，从病例的选取到检测的方法及结果分析，我们的结论应该是可信的。
本文为中国人民解放军总后卫生部科研基金资助课题
参考文献
1 Schlesiger MJ. Heat shock proteins. J Biol Chem, 1990,265∶12111-12114.
2 Kaufmann SHE. Heat shock proteins and the immune response. Immunol Today, 1990,11∶129-136.
3 Jindal S. Heat shock proteins: applications in health and disease. Trends Biotechnol, 1996,14∶17-20.
(收稿：1997-10-05 修回：1998-03-13), 百拇医药