土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量测定
作者：魏有良 陈志兴 党创世
单位：魏有良 宝鸡 721001 宝鸡市药品检验所；陈志兴 党创世 宝鸡市华西制药厂
关键词：土贝母皂苷；土贝母总皂苷；土贝母皂苷注射液；分光光度法；含量测定
中国现代应用药学990117摘要 目的：建立土贝母总皂苷含量测定法。方法：用5%香草醛冰醋酸溶液-脱水硫酸为显色剂，在90℃加热显色，用分光光度法测定土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量。结果：平均回收率为101.39%，RSD=1.91%(n=5)。结论：该法可作为土贝母皂苷原料及其注射液的定量控制方法之一。
Determination of all tubeimosides in bolbostemma panicultun franquet and its injection
, 百拇医药
Wei Youliang(Wei YL),Chen Zhixing(Chen ZX),Dang Chuangshi(Dang CS)(Baoji City Institute of Drug Control,Baoji 721001)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an accurate method for the determination of all tabeimosides.METHODS:The spectrophotometry method was used for the determination of all tubeimosides in bolbostemma panicultun franquet and its injection.The solution of 5g vanillin in 100ml mixture of glacial acetie acid and anhydrous sulfuric acid was used to locate.RESULTS:The average recovery and relative standard deviation were 101.39%,1.91%(n=5) respectively.CONCLUSION:The method can be used for quality control for the bolbostemma panicultun franquet and its injection.
, 百拇医药
KEY WORDS glucosides tobeimosides,all tobeimosides,bolbostemma panicultum franqnet injection,spectrophotometry,assay
土贝母皂苷是从葫芦科植物土贝母Bolbostemma panisulatum(Maxim.) Franquet.干燥块茎中提取的皂苷类成分，其主要组分为三种巨环三萜皂苷土贝母苷甲、乙、丙(tubeimoside Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。这三种皂苷结构相似，具有抗病毒和抗肿瘤的作用。土贝母皂苷注射液为土贝母皂苷加水配制而成，主要用于治疗病毒性尖锐湿疣，寻常疣和流行性感冒。本文采用分光光度法测定土贝母皂苷原料及其注射液中总皂苷的含量，结果满意。
1 仪器与试药
WFZ-800D2型分光光度仪(北京第二光学仪器厂)。
, http://www.100md.com
土贝母苷甲(陕西省药品检验所)；土贝母皂苷原料(陕西省麟游制药厂)；土贝母皂苷注射液(陕西省麒麟制药有限公司)。脱水硫酸：取分析纯硫酸50ml,加入5g无水硫酸钠，振摇即可。
2 测定条件选择
配制土贝母苷甲每毫升中含0.3mg的甲醇溶液，取该液数份，每份0.3ml,置10ml具塞刻度试管中，置90℃水浴上蒸干，105℃烘烤20min,冷却，取该含样试管作如下试验。
2.1 显色剂用量及测定波长选择
取上述含样试管5支，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,振摇溶解，再分别精密加入脱水硫酸0.4,0.5,0.6,0.7,0.8ml，振摇均匀，置90℃水浴上加热20min,取出，立即置冰水中冷却1min，精密加入冰醋酸4ml,摇匀，于冰水中放置10min后，在波长400～800nm范围测最大吸收，并在最大吸收波长处测定每支试管中溶液的吸收度，结果λmax=540nm,当硫酸用量为0.5～0.7ml时，吸收度变化不大。故选择5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,脱水硫酸0.6ml,90℃加热显色，在540nm波长处测定。另取土贝母原料及其注射液，在此条件下作吸收光谱，同时作空白对照，结果见图1。
, 百拇医药
图1 吸收光谱图
2.2 香草醛溶液浓度选择
取上述含样试管5支，分别精密加入2%,3%,4%,5%和6%的香草醛冰醋溶液0.2ml,振摇溶解，脱水硫酸0.6ml,照2.1中，从“置90℃水浴上加热20min”开始，至“在冰水中放置10min后”操作，在540nm波长处测定每支试管中溶液的吸收度，结果香草醛冰醋酸溶液浓度在3%～6%时，吸收度为0.298，0.302和0.300。故选择5%香草醛溶液为宜。
2.3 加热温度和加热时间选择
取上述含样试管5支为一份，共3份，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,摇匀，再精密加入脱水硫酸0.6ml,摇匀，三份分别置70,80和90℃水浴上加热5,10,15,20和25min,立即置冰水中冷却1min,精密加入冰醋酸4ml,摇匀，在冰水中放置10min,在选定波长处测吸收度；结果90℃加热15～25min时，吸收度无明显变化。故选择90℃加热20min为宜。
, 百拇医药
2.4 稳定性试验
取2.3中90℃加热20min的溶液，每隔10min测定吸收度，结果吸收度在30min内无明显下降。
3 标准曲线制备
精密称取105℃减压干燥至恒重的土贝母苷甲15mg,置50ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取该液0.1,0.2,0.3,0.4和0.5ml,置10ml具塞刻度试管中，置水浴上蒸干,105℃烘20min,取出，稍冷、精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,振摇溶解，自然冷却至室温，精密加入脱水硫酸0.6ml,摇匀，置90℃水浴上加热20min,取出，立即置冰水中冷却1min,精密加入冰醋酸4ml,摇匀，置冰水中放置10min，在波长540nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，作标准曲线，得回归方程为:Y=3.4038X-0.0139，相关系数r=0.9993。
, http://www.100md.com
4 样品测定
4.1 供试液制备
4.1.1 土贝母皂苷原料：取本品0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加入乙醇80ml,置水浴上加热至溶液澄明，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml,蒸干，加甲醇溶解转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀即可。
4.1.2 土贝母皂苷注射液：精密量取该注射液5ml,置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。
4.2 测定法
精密量取供试液1ml,照标准曲线制备中，从“置10ml具塞刻度试管中”开始操作，查阅标准曲线计算出总皂苷的含量。土贝母皂苷原料按干燥品计算含量；注射液按标示量计算含量，结果见表1。
, 百拇医药
5 重复试验与精密度
取同一批样品，照“样品测定法”试验，测定5次，结果RSD=1.28%。再取同一批样品供试液，照：测定法”测定5次，结果RSD=0.73%。表1 样品测定结果(n=3) 名 称
批 号
总皂苷含量(%)
RSD(%)
土贝母皂苷
940907
92.37
0.75
950413
, 百拇医药 93.20
0.62
950728
87.95
0.35
960120
89.86
0.97
960418
94.71
1.02
土贝母皂苷注射液
960909
, http://www.100md.com
78.85
1.20
960121
72.99
0.47
960122
79.49
0.82
960911
70.82
0.78
960124
65.06
, 百拇医药
0.41
6 回收率
精密称取不同量的已经测定含量的土贝母皂苷原料样品，加入一定量的土贝母苷甲，同“样品测定”法试验，计算出回收率，结果见表2。表2 回收率试验结果 序号
原含有量
(mg)
加入标准品
量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
, 百拇医药
平均值
(%)
RSD
(%)
1
2.439
1.585
3.975
98.79
2
2.927
2.378
5.490
, 百拇医药
103.49
3
3.415
3.170
6.595
100.15
101.39
1.91
4
3.903
3.962
8.089
102.85
, 百拇医药
5
4.391
4.755
9.299
101.67
7 讨 论
土贝母苷甲、乙、丙，结构相似，尤其是乙、丙苷较难分离，它们都有一定的生理活性，因此，测定其总含量有重要意义。本文筛选出以5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,脱水硫酸0.6ml,90℃加热20min的最佳显色条件，用分光光度法测定了土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量，方法简单，经测定平均回收率为101.39%,RSD=1.91%(n=5)。从测定结果看，注射液中含量较原料中低20%～30%，经了解和试验是由于工艺中加活性炭脱色所致，灭菌后亦稍有下降。 收稿日期：1997-09-02, http://www.100md.com
单位：魏有良 宝鸡 721001 宝鸡市药品检验所；陈志兴 党创世 宝鸡市华西制药厂
关键词：土贝母皂苷；土贝母总皂苷；土贝母皂苷注射液；分光光度法；含量测定
中国现代应用药学990117摘要 目的：建立土贝母总皂苷含量测定法。方法：用5%香草醛冰醋酸溶液-脱水硫酸为显色剂，在90℃加热显色，用分光光度法测定土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量。结果：平均回收率为101.39%，RSD=1.91%(n=5)。结论：该法可作为土贝母皂苷原料及其注射液的定量控制方法之一。
Determination of all tubeimosides in bolbostemma panicultun franquet and its injection
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Wei Youliang(Wei YL),Chen Zhixing(Chen ZX),Dang Chuangshi(Dang CS)(Baoji City Institute of Drug Control,Baoji 721001)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an accurate method for the determination of all tabeimosides.METHODS:The spectrophotometry method was used for the determination of all tubeimosides in bolbostemma panicultun franquet and its injection.The solution of 5g vanillin in 100ml mixture of glacial acetie acid and anhydrous sulfuric acid was used to locate.RESULTS:The average recovery and relative standard deviation were 101.39%,1.91%(n=5) respectively.CONCLUSION:The method can be used for quality control for the bolbostemma panicultun franquet and its injection.
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KEY WORDS glucosides tobeimosides,all tobeimosides,bolbostemma panicultum franqnet injection,spectrophotometry,assay
土贝母皂苷是从葫芦科植物土贝母Bolbostemma panisulatum(Maxim.) Franquet.干燥块茎中提取的皂苷类成分，其主要组分为三种巨环三萜皂苷土贝母苷甲、乙、丙(tubeimoside Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。这三种皂苷结构相似，具有抗病毒和抗肿瘤的作用。土贝母皂苷注射液为土贝母皂苷加水配制而成，主要用于治疗病毒性尖锐湿疣，寻常疣和流行性感冒。本文采用分光光度法测定土贝母皂苷原料及其注射液中总皂苷的含量，结果满意。
1 仪器与试药
WFZ-800D2型分光光度仪(北京第二光学仪器厂)。
, http://www.100md.com
土贝母苷甲(陕西省药品检验所)；土贝母皂苷原料(陕西省麟游制药厂)；土贝母皂苷注射液(陕西省麒麟制药有限公司)。脱水硫酸：取分析纯硫酸50ml,加入5g无水硫酸钠，振摇即可。
2 测定条件选择
配制土贝母苷甲每毫升中含0.3mg的甲醇溶液，取该液数份，每份0.3ml,置10ml具塞刻度试管中，置90℃水浴上蒸干，105℃烘烤20min,冷却，取该含样试管作如下试验。
2.1 显色剂用量及测定波长选择
取上述含样试管5支，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,振摇溶解，再分别精密加入脱水硫酸0.4,0.5,0.6,0.7,0.8ml，振摇均匀，置90℃水浴上加热20min,取出，立即置冰水中冷却1min，精密加入冰醋酸4ml,摇匀，于冰水中放置10min后，在波长400～800nm范围测最大吸收，并在最大吸收波长处测定每支试管中溶液的吸收度，结果λmax=540nm,当硫酸用量为0.5～0.7ml时，吸收度变化不大。故选择5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,脱水硫酸0.6ml,90℃加热显色，在540nm波长处测定。另取土贝母原料及其注射液，在此条件下作吸收光谱，同时作空白对照，结果见图1。
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图1 吸收光谱图
2.2 香草醛溶液浓度选择
取上述含样试管5支，分别精密加入2%,3%,4%,5%和6%的香草醛冰醋溶液0.2ml,振摇溶解，脱水硫酸0.6ml,照2.1中，从“置90℃水浴上加热20min”开始，至“在冰水中放置10min后”操作，在540nm波长处测定每支试管中溶液的吸收度，结果香草醛冰醋酸溶液浓度在3%～6%时，吸收度为0.298，0.302和0.300。故选择5%香草醛溶液为宜。
2.3 加热温度和加热时间选择
取上述含样试管5支为一份，共3份，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,摇匀，再精密加入脱水硫酸0.6ml,摇匀，三份分别置70,80和90℃水浴上加热5,10,15,20和25min,立即置冰水中冷却1min,精密加入冰醋酸4ml,摇匀，在冰水中放置10min,在选定波长处测吸收度；结果90℃加热15～25min时，吸收度无明显变化。故选择90℃加热20min为宜。
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2.4 稳定性试验
取2.3中90℃加热20min的溶液，每隔10min测定吸收度，结果吸收度在30min内无明显下降。
3 标准曲线制备
精密称取105℃减压干燥至恒重的土贝母苷甲15mg,置50ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取该液0.1,0.2,0.3,0.4和0.5ml,置10ml具塞刻度试管中，置水浴上蒸干,105℃烘20min,取出，稍冷、精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,振摇溶解，自然冷却至室温，精密加入脱水硫酸0.6ml,摇匀，置90℃水浴上加热20min,取出，立即置冰水中冷却1min,精密加入冰醋酸4ml,摇匀，置冰水中放置10min，在波长540nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，作标准曲线，得回归方程为:Y=3.4038X-0.0139，相关系数r=0.9993。
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4 样品测定
4.1 供试液制备
4.1.1 土贝母皂苷原料：取本品0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加入乙醇80ml,置水浴上加热至溶液澄明，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml,蒸干，加甲醇溶解转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀即可。
4.1.2 土贝母皂苷注射液：精密量取该注射液5ml,置水浴上蒸干，用甲醇溶解转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。
4.2 测定法
精密量取供试液1ml,照标准曲线制备中，从“置10ml具塞刻度试管中”开始操作，查阅标准曲线计算出总皂苷的含量。土贝母皂苷原料按干燥品计算含量；注射液按标示量计算含量，结果见表1。
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5 重复试验与精密度
取同一批样品，照“样品测定法”试验，测定5次，结果RSD=1.28%。再取同一批样品供试液，照：测定法”测定5次，结果RSD=0.73%。表1 样品测定结果(n=3) 名 称
批 号
总皂苷含量(%)
RSD(%)
土贝母皂苷
940907
92.37
0.75
950413
, 百拇医药 93.20
0.62
950728
87.95
0.35
960120
89.86
0.97
960418
94.71
1.02
土贝母皂苷注射液
960909
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78.85
1.20
960121
72.99
0.47
960122
79.49
0.82
960911
70.82
0.78
960124
65.06
, 百拇医药
0.41
6 回收率
精密称取不同量的已经测定含量的土贝母皂苷原料样品，加入一定量的土贝母苷甲，同“样品测定”法试验，计算出回收率，结果见表2。表2 回收率试验结果 序号
原含有量
(mg)
加入标准品
量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
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平均值
(%)
RSD
(%)
1
2.439
1.585
3.975
98.79
2
2.927
2.378
5.490
, 百拇医药
103.49
3
3.415
3.170
6.595
100.15
101.39
1.91
4
3.903
3.962
8.089
102.85
, 百拇医药
5
4.391
4.755
9.299
101.67
7 讨 论
土贝母苷甲、乙、丙，结构相似，尤其是乙、丙苷较难分离，它们都有一定的生理活性，因此，测定其总含量有重要意义。本文筛选出以5%香草醛冰醋酸溶液0.2ml,脱水硫酸0.6ml,90℃加热20min的最佳显色条件，用分光光度法测定了土贝母皂苷原料及其注射液中土贝母总皂苷的含量，方法简单，经测定平均回收率为101.39%,RSD=1.91%(n=5)。从测定结果看，注射液中含量较原料中低20%～30%，经了解和试验是由于工艺中加活性炭脱色所致，灭菌后亦稍有下降。 收稿日期：1997-09-02, http://www.100md.com