苏灵感冒颗粒中的葛根素含量测定
作者：杨 竞 林 跃
单位：杨 竞 南京 210029 南京脑科医院；林 跃 南京 210009 中国药科大学
关键词：葛根素；含量测定；双波长薄层扫描
中国现代应用药学990208摘要 目的：对苏灵感冒颗粒进行质量控制。方法：采用双波长薄层扫描法测定苏灵感冒颗粒中主要成分葛根素的含量。结果：葛根素在0.968～4.84μg范围内线性关系良好，其平均回收率为95.69%，RSD=4.92%。结论：该方法简便、可行，适用于苏灵感冒颗粒的含量测定。
Determination of puerarin in Suling Ganmao Keli
Yang Jing(Yang J),Lin Yue(Lin Y)(Nanjing brain Hospital,Nanjing 210009)
, 百拇医药
ABSTRACT OBJECTIVE：To control quality of Suling Ganmao Keli.METHODS:The puterarin in Suling Ganmao Keli was determined by TLC-Scanner.RESULTS:The linear range is 0.968～4.84μg(r=0.9990).The average recovery and RSD were 95.69% and 4.92%,respectively.CONCLUSION:This method is simple,available and suitable for assay of Suling Ganmao Keli.
KEY WORDS puterin,assay,TLC-Scanning
苏灵感冒颗粒系皖南山区一民间验方，后经一著名军医的整理与修订，在治疗病毒性感冒方面有奇效。现已按国家三类新药进行申报临床。其主要以葛根、牛蒡子等11味中药组成。为此根据新药审批要求，做了四味药的鉴别，一味药的含量测定，含量测定选择了本方的君药葛根，采用薄层法测定葛根中的葛根素含量。实验结果表明，方法简便、可靠，可作为苏灵感冒颗粒的质量控制方法之一。
, http://www.100md.com
1 仪器及试药
岛津CS-9000双波长薄层扫描仪。
葛根素对照品：由中国药品生物制品检定所提供。药品来源：苏灵制药有限公司提供。
其它试剂：均为分析纯。
2 试验条件与结果
2.1 扫描波长的选择
吸取供试品液，阴性对照溶液各2μl,葛根素对照品溶液5μl。点于同一硅胶GF254板上，经展后，在紫外光灯(254nm)下检视定位，照薄层色谱扫描法进行光谱扫描，结果葛根素在265和310nm处有两吸收峰，在265nm处为最大吸收，在370nm处吸收最小，但在薄层扫描中如两波长相距超过100nm时，会影响扫描的结果，所以选择扫描波长λS=265nm,参比波长λR=360nm，线性参数SX=3进行锯齿扫描。
, 百拇医药
2.2 线性范围考察
分别吸取葛根素对照品溶液(每毫升含葛根素0.484mg)2,4,6,8和10μl。分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开12cm,取出，晾干，置254nm紫外灯下检视定位，于λS=265nm,λR=360nm波长处进行双波长扫描测定，结果见表1。
表1 标准曲线(线性范围考察) 点样体积
(μg)
点样量
(μg)
峰面积
回归方程
, 百拇医药 r
2
0.968
8763.23
4
1.936
16758.54
6
2.904
22034.30
y=6862.96x+2567.45
0.9990
8
, 百拇医药
3.872
29144.30
10
4.84
35787.09
从表1可以看出，葛根素点样量在0.968～4.84μg范围内呈线性关系。测定样品点样量在此线性范围内可使用本方法进行含量测定。
2.3 空白试验
取不含葛根素的阴性对照品溶液点样展开，阴性对照品色谱中，在与葛根素对照品相应的位置上没有吸收。
2.4 稳定性试验
取葛根素标准曲线绘制项下的斑点，每隔20min进行一次扫描，共考察2h，结果尚稳定，见表2。表2 稳定性试验 时间(min)
, 百拇医药
峰面积
RSD(%)
1
17213.55
2
16523.66
3
16024.47
4
16722.03
2.87
5
16029.44
, 百拇医药
6
16888.37
7
17090.82
2.5 精密度试验
仪器精密度试验：取薄层板上的同一斑点，连续扫描6次，结果见表3。表3 仪器精密度试验 时间(min)
峰面积
RSD(%)
1
21275.30
2
21746.38
, 百拇医药
3
20978.56
4
21763.39
1.54
5
21098.75
6
21177.66
点样精密度试验：
①精密吸取等量对照品溶液5份，点于同一硅胶GF254薄层板上，展开，扫描，结果见表4。表4 同板精密度试验 时间(min)
, 百拇医药
峰面积
RSD(%)
1
23750.54
2
24039.08
3
24462.77
1.08
4
23955.34
5
24097.85
, http://www.100md.com
②精密吸取等量对照品溶液5份，点于不同的硅胶GF254薄层板上，展开，扫描结果见表5。
2.6 重现性试验
取同一批号的样品，制备5份供试品溶液进行扫描测定，葛根素的含量结果见表6。
2.7 回收率试验表5 异板精密度试验 时间(min)
峰面积
RSD(%)
1
23848.13
2
24405.25
, 百拇医药 3
25071.34
2.81
4
23441.55
5
24866.78
表6 重现性试验 时间(min)
峰面积RSD(%)
1
25347.99
2
26488.94
, 百拇医药
3
27849.44
3.40
4
26775.23
5
26272.60
取已知葛根素含量的样品1g,精密称定，精密加入葛根素对照品10mg,与样品液同法制备得加样回收测定液，吸取加样回收液5μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，同含量测定项下方法进行测定，并计算回收率，见表7。表7 回收率试验结果
1
2
, 百拇医药
3
4
5
样品含量(mg)
11.369
11.405
11.244
11.322
11.392
对照品加入量(mg)
10.018
9.976
9.899
, 百拇医药
10.105
9.983
葛根素总含量(mg)
21.387
21.381
21.143
21.427
21.375
实际测得量(mg)
21.532
20.643
20.910
, http://www.100md.com
20.356
21.108
回收率(%)
101.45
92.60
97.65
89.40
97.33
平均回收率(%)
95.69±4.71 RSD%=4.92
2.8 含量测定
样品溶液的制备：取本品5g,精密称定，加乙醇(30,30,20ml),置水浴上加热回流提取3次，每次30min,趁热滤过，滤液浓缩至适量，转移至50ml的量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取葛根素(供含量测定用)对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液2μl,对照品溶液2μl、4μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干。置254nm紫外光灯下检视定位，照色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)薄层扫描法进行扫描，波长：λS=265nm,λR=360nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。测定样品3批，结果见表8。表8 样品测定结果 批号
, 百拇医药
970311
970312
970313
含量(mg/g)
6.372
11.312
2.840
注：含量相差较大的原因，是由于药材品种不一样而致，药典收载的葛根有粉葛根和野葛根两种，野葛根素比粉葛根所含葛根素高得多。
根据样品测定结果，暂定为本品每克含葛根素不得少于2.0mg。
2.9 葛根药材中葛根素的含量测定
, 百拇医药
供试品溶液的制备：取葛根粗粉20g,精密称定，加乙醇(20,15,15ml)，置水浴上加热回流3次，每次30min,趁热过滤至50ml量瓶中，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按上含量测定方法测得葛根药材中葛根素含量。测定结果见表9。表9 不同来源的葛根中葛根素的含量 药材来源
葛根素含量(%)
南京市药材公司(野葛)
2.42
合肥市药材公司(野葛)
4.51
南昌市药材公司(野葛)
1.88
重庆市药材公司(甘葛藤)
, http://www.100md.com
0.47
福建省药材公司(甘葛藤)
0.028
3 讨 论
从以上实验可以看出葛根中葛根素的含量相差较大，药典收载的品种有甘葛藤和野葛两种。据所查文献资料报道野葛中葛根素的含量在1.6%～6.0%范围内；甘葛藤根据我们实测的两批结果，葛根素的含量在0.028%～0.47%范围内，根据原药材中葛根素含量，暂定葛根中葛根素的含量不能低于0.025%。
该含量测定方法简便、可靠，是苏灵感冒颗粒良好的质量控制手段之一。
参考文献
[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994∶314.
[2] 新药审批办法及有关法规汇编(一).北京：卫生部药品审评办公室编.1992∶38.
收稿日期：1998-06-08, 百拇医药
单位：杨 竞 南京 210029 南京脑科医院；林 跃 南京 210009 中国药科大学
关键词：葛根素；含量测定；双波长薄层扫描
中国现代应用药学990208摘要 目的：对苏灵感冒颗粒进行质量控制。方法：采用双波长薄层扫描法测定苏灵感冒颗粒中主要成分葛根素的含量。结果：葛根素在0.968～4.84μg范围内线性关系良好，其平均回收率为95.69%，RSD=4.92%。结论：该方法简便、可行，适用于苏灵感冒颗粒的含量测定。
Determination of puerarin in Suling Ganmao Keli
Yang Jing(Yang J),Lin Yue(Lin Y)(Nanjing brain Hospital,Nanjing 210009)
, 百拇医药
ABSTRACT OBJECTIVE：To control quality of Suling Ganmao Keli.METHODS:The puterarin in Suling Ganmao Keli was determined by TLC-Scanner.RESULTS:The linear range is 0.968～4.84μg(r=0.9990).The average recovery and RSD were 95.69% and 4.92%,respectively.CONCLUSION:This method is simple,available and suitable for assay of Suling Ganmao Keli.
KEY WORDS puterin,assay,TLC-Scanning
苏灵感冒颗粒系皖南山区一民间验方，后经一著名军医的整理与修订，在治疗病毒性感冒方面有奇效。现已按国家三类新药进行申报临床。其主要以葛根、牛蒡子等11味中药组成。为此根据新药审批要求，做了四味药的鉴别，一味药的含量测定，含量测定选择了本方的君药葛根，采用薄层法测定葛根中的葛根素含量。实验结果表明，方法简便、可靠，可作为苏灵感冒颗粒的质量控制方法之一。
, http://www.100md.com
1 仪器及试药
岛津CS-9000双波长薄层扫描仪。
葛根素对照品：由中国药品生物制品检定所提供。药品来源：苏灵制药有限公司提供。
其它试剂：均为分析纯。
2 试验条件与结果
2.1 扫描波长的选择
吸取供试品液，阴性对照溶液各2μl,葛根素对照品溶液5μl。点于同一硅胶GF254板上，经展后，在紫外光灯(254nm)下检视定位，照薄层色谱扫描法进行光谱扫描，结果葛根素在265和310nm处有两吸收峰，在265nm处为最大吸收，在370nm处吸收最小，但在薄层扫描中如两波长相距超过100nm时，会影响扫描的结果，所以选择扫描波长λS=265nm,参比波长λR=360nm，线性参数SX=3进行锯齿扫描。
, 百拇医药
2.2 线性范围考察
分别吸取葛根素对照品溶液(每毫升含葛根素0.484mg)2,4,6,8和10μl。分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开12cm,取出，晾干，置254nm紫外灯下检视定位，于λS=265nm,λR=360nm波长处进行双波长扫描测定，结果见表1。
表1 标准曲线(线性范围考察) 点样体积
(μg)
点样量
(μg)
峰面积
回归方程
, 百拇医药 r
2
0.968
8763.23
4
1.936
16758.54
6
2.904
22034.30
y=6862.96x+2567.45
0.9990
8
, 百拇医药
3.872
29144.30
10
4.84
35787.09
从表1可以看出，葛根素点样量在0.968～4.84μg范围内呈线性关系。测定样品点样量在此线性范围内可使用本方法进行含量测定。
2.3 空白试验
取不含葛根素的阴性对照品溶液点样展开，阴性对照品色谱中，在与葛根素对照品相应的位置上没有吸收。
2.4 稳定性试验
取葛根素标准曲线绘制项下的斑点，每隔20min进行一次扫描，共考察2h，结果尚稳定，见表2。表2 稳定性试验 时间(min)
, 百拇医药
峰面积
RSD(%)
1
17213.55
2
16523.66
3
16024.47
4
16722.03
2.87
5
16029.44
, 百拇医药
6
16888.37
7
17090.82
2.5 精密度试验
仪器精密度试验：取薄层板上的同一斑点，连续扫描6次，结果见表3。表3 仪器精密度试验 时间(min)
峰面积
RSD(%)
1
21275.30
2
21746.38
, 百拇医药
3
20978.56
4
21763.39
1.54
5
21098.75
6
21177.66
点样精密度试验：
①精密吸取等量对照品溶液5份，点于同一硅胶GF254薄层板上，展开，扫描，结果见表4。表4 同板精密度试验 时间(min)
, 百拇医药
峰面积
RSD(%)
1
23750.54
2
24039.08
3
24462.77
1.08
4
23955.34
5
24097.85
, http://www.100md.com
②精密吸取等量对照品溶液5份，点于不同的硅胶GF254薄层板上，展开，扫描结果见表5。
2.6 重现性试验
取同一批号的样品，制备5份供试品溶液进行扫描测定，葛根素的含量结果见表6。
2.7 回收率试验表5 异板精密度试验 时间(min)
峰面积
RSD(%)
1
23848.13
2
24405.25
, 百拇医药 3
25071.34
2.81
4
23441.55
5
24866.78
表6 重现性试验 时间(min)
峰面积RSD(%)
1
25347.99
2
26488.94
, 百拇医药
3
27849.44
3.40
4
26775.23
5
26272.60
取已知葛根素含量的样品1g,精密称定，精密加入葛根素对照品10mg,与样品液同法制备得加样回收测定液，吸取加样回收液5μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，同含量测定项下方法进行测定，并计算回收率，见表7。表7 回收率试验结果
1
2
, 百拇医药
3
4
5
样品含量(mg)
11.369
11.405
11.244
11.322
11.392
对照品加入量(mg)
10.018
9.976
9.899
, 百拇医药
10.105
9.983
葛根素总含量(mg)
21.387
21.381
21.143
21.427
21.375
实际测得量(mg)
21.532
20.643
20.910
, http://www.100md.com
20.356
21.108
回收率(%)
101.45
92.60
97.65
89.40
97.33
平均回收率(%)
95.69±4.71 RSD%=4.92
2.8 含量测定
样品溶液的制备：取本品5g,精密称定，加乙醇(30,30,20ml),置水浴上加热回流提取3次，每次30min,趁热滤过，滤液浓缩至适量，转移至50ml的量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取葛根素(供含量测定用)对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液2μl,对照品溶液2μl、4μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干。置254nm紫外光灯下检视定位，照色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)薄层扫描法进行扫描，波长：λS=265nm,λR=360nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。测定样品3批，结果见表8。表8 样品测定结果 批号
, 百拇医药
970311
970312
970313
含量(mg/g)
6.372
11.312
2.840
注：含量相差较大的原因，是由于药材品种不一样而致，药典收载的葛根有粉葛根和野葛根两种，野葛根素比粉葛根所含葛根素高得多。
根据样品测定结果，暂定为本品每克含葛根素不得少于2.0mg。
2.9 葛根药材中葛根素的含量测定
, 百拇医药
供试品溶液的制备：取葛根粗粉20g,精密称定，加乙醇(20,15,15ml)，置水浴上加热回流3次，每次30min,趁热过滤至50ml量瓶中，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按上含量测定方法测得葛根药材中葛根素含量。测定结果见表9。表9 不同来源的葛根中葛根素的含量 药材来源
葛根素含量(%)
南京市药材公司(野葛)
2.42
合肥市药材公司(野葛)
4.51
南昌市药材公司(野葛)
1.88
重庆市药材公司(甘葛藤)
, http://www.100md.com
0.47
福建省药材公司(甘葛藤)
0.028
3 讨 论
从以上实验可以看出葛根中葛根素的含量相差较大，药典收载的品种有甘葛藤和野葛两种。据所查文献资料报道野葛中葛根素的含量在1.6%～6.0%范围内；甘葛藤根据我们实测的两批结果，葛根素的含量在0.028%～0.47%范围内，根据原药材中葛根素含量，暂定葛根中葛根素的含量不能低于0.025%。
该含量测定方法简便、可靠，是苏灵感冒颗粒良好的质量控制手段之一。
参考文献
[1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994∶314.
[2] 新药审批办法及有关法规汇编(一).北京：卫生部药品审评办公室编.1992∶38.
收稿日期：1998-06-08, 百拇医药