消瘀宁颗粒剂对大鼠实验性脑出血的作用研究*
作者：夏素霞 胡丽萍 马 杰 苗 华 张迎春 向绍杰
单位：沈阳 110034 辽宁省中医研究院
关键词：消瘀宁颗粒剂；脑血肿；氧自由基；脑组织结构
中国现代应用药学990205
摘要 目的：为探讨消瘀宁颗粒剂治疗脑出血中风的机制。方法：以大鼠自体血凝块复制脑出血模型，用干湿比重法测脑组织水份，同时观察氧自由基(O)有关参数与脑组织学的变化。结果：脑血肿形成后，脑组织水份、脑蛋白、丙二醛含量明显增加；脑组织超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶活性降低。结论：消瘀宁颗粒剂有明显减轻脑血肿时O连锁反应对血脑屏障与脑细胞的损害作用，促进脑组织内血肿的吸收，对脑水肿有明显的防治作用。
Effects of “Xiaoyuning” Granule on change of oxygen free radical and brain histomorphology in rats with experimental cerebral hematoma
, http://www.100md.com
Xia Suxia(Xia SX),Hu Liping(Hu LP),Ma Jie(Ma J),et al(Liaoning Academy of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034)
ABSTRACT OBJECTIVE：To observe the effect of “Xiaoyuning” on cerebral bematoma.METHODS:The experimental cerebralhematoma models were produced by injecting autogenous clot in therats.The influences of “XYN” on contents of protein,contents of water,oxygen free radical in brain tissue,histomorphology at the third day,seventh day after cerebral hematoma were observed.RESULTS:In the pathological group brain contents of protein and water,malondialdehyde increased progressively,and the decline of activities of superoxide dismutase and glutathione peroxidase were obvious,especially in side of hematoma(right brain).CONCLUSION:“XYN” was advantageous in thetreatment of encephall edema induced by experiment cerebal hematoma,and it suggest that “XYN” had the evident effects in antagonizing the damage of blood brain barrier and encephalic cell caused by free radical in cerebral hematoma.
, 百拇医药
KEY WORDS Xiaoyuning granule,cerebral hematoma,cerebral edema,oxygen free radical,brain histomorphology
脑出血中风急性期治疗迄今仍是医学领域亟待解决的问题[1，2]。由于脑组织特别易受氧自由基损伤，近年的实验资料表明，氧自由基介导的病变过程起着关键的病理生理作用。本实验通过观察消瘀宁颗粒剂对急性脑出血大鼠脑水含量，以及氧自由基变化的影响。用消瘀宁颗粒剂进行治疗探讨该药对脑细胞和血脑屏障(BBB)的保护效应及机理，以求为消瘀宁颗粒剂的临床应用提供一定实验依据。
材料与方法
1 材 料
1.1 动物：Wistar大白鼠56只，体重200～300g,月龄4～6个月，由沈阳药学院动物中心提供。
, http://www.100md.com
1.2 药物：由本院制剂室提供，含生药5.5g/ml(含黄芪、当归、远志、川芎、地龙、菖蒲、赤芍、红花、甘草)。
1.3 试剂：丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，蛋白含量用考马斯蓝测定法。
2 实验方法
2.1 脑血肿模型建立：实验大鼠均在术前一日眼动脉采血约1ml,凝固，置冰箱4℃保存(无菌)，手术当日统一用硫酸纸在万分之一天平上称取7mg自体血凝块，装入18号穿刺针内，仿王楠[3]等脑内注入血块的方法，行右侧脑内血肿埋藏术，所有动物均用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，手术部位在冠状缝前1mm,矢状缝旁开2.5mm,深度6mm,慢慢插入针芯，血块即被推出，注入血块后保留片刻拔针，颅骨小孔用骨蜡封口，再涂以火棉胶，缝合头皮。术后观察大鼠全身反应。
, 百拇医药
2.2 给药及指标检测：68只大鼠随机分为4组：①正常对照组14只不造型，po生理盐水8ml/kg;②模型组18只，于造模前2d po生理盐水8ml/kg;③消瘀宁高、低剂量组各18只，于造模前2天给药，高剂量组po 44.0g/kg,低剂量组po 22.0g/kg，每组均分为给药5d和9d二批。观察动物一般情况，体重变化及死亡率。造模后第3天、第7天分批活杀取脑，将脑经纵裂均匀分为左、右两半球，再经血肿正中冠状切开，分为左右前后四部分，前部作组织学检查，后部作水含量[4]、脑蛋白、SOD、MDA、GSH-PX的测定，并用统计学方法进行数据处理。
3 结 果
3.1 动物一般情况、体重变化及死亡率：实验动物在麻醉苏醒后均有不同程度的活动减少，自洁能力下降、饮食、饮水量减少，体重明显减轻，左侧肢体肌张力增高，肌力减弱，以前肢明显，动作缓慢、行走跛行，并向右侧(健侧)偏转，个别动物1～3d内有死亡。上述各种表现以模型组尤为明显(见表1)。
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表1 消瘀宁颗粒剂对大鼠体重、死亡率的影响 组 别
体重差异值(g,d)
死亡率(%,d)
P*
3
7
3
正常组
+5
+10
0
>0.05
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模型组
-14
-24
22.2
消瘀宁高剂量组
-3
-5
5.6
>0.05
(44g/kg)
消瘀宁低剂量组
-4
-7
, 百拇医药
11.1
>0.05
(22g/kg)
注：*与模型组比较的死亡率
3.2 脑组织含水量的变化：脑组织含水量测定基本按Gotoh等[4]方法，(湿重-干重)/湿重×100%。结果表明造模后3、7d，模型组右脑组织含水量明显高于正常组(P<0.05)，而给药组上述值均明显低于模型组(P<0.05)，见表2。表2 消瘀宁颗粒剂对大鼠脑组织含水量的影响(±s，%) 组 别
天数(d)
动物数
左脑
, 百拇医药 右脑
正常组
3
7
78.01±0.72
78.04±0.56*1
7
7
78.03±0.68
78.03±0.37*2
模型组
3
, 百拇医药
7
78.59±0.75
80.57±0.97*3
7
7
78.21±0.23
79.30±0.69*4
消瘀宁高剂量组
3
9
78.09±0.71
78.82±0.74*2
, 百拇医药
7
8
78.21±0.22
78.25±0.57
消瘀宁低剂量组
3
8
78.67±0.68
79.58±0.78*2
7
8
78.31±0.71
, http://www.100md.com
78.78±0.59
注：与模型组比较，*1P<0.01，*2P<0.05；与左脑比较，*3P<0.01，*4P<0.05
3.3 脑组织MDA、蛋白含量及SOD、GSH-PX活性：造模3d时，模型组和给药组左右侧脑组织MDA、蛋白含量较正常组左右侧 明显增高(P<0.05)，给药组左右侧 脑组织MDA、蛋白含量均较模型组同一部位明显减少(P<0.05)。而模型组和给药组SOD、GSH-PX活性均低于正常组(P<0.05)，右侧均较左侧降低显著(P<0.01)，给药组左右侧 脑组织SOD、GSH-PX活性则非常明显地高于模型组相应部位(P<0.01)，这与欧正武[5]等报道结果相符。造模7d时，给药各组左右侧脑组织MDA、蛋白含量及SOD、GSH-PX活性与正常组比较均无显著性差异(P>0.05)，与模型组同一部位比较差异显著(P<0.01)，结果见图1。
, 百拇医药
图1 消瘀宁颗粒剂对大鼠脑组织蛋白含量、MDA、SOD、GSH-PX活性的影响
A-正常组(7只)；B-模型组(7只)；C-消瘀宁高剂量组；D-消瘀宁低剂量组；Ⅰ-左脑组织；Ⅱ-右脑组强；□-3d；□-7d
3.4 组织学变化：脑血肿形成3d时，模型组神经细胞高度肿胀呈空网状，同时可见大量淋巴细胞浸润及一些吞噬细胞存在，神经细胞呈缺血性改变，7d水肿减轻，见有单核细胞浸润用消瘀宁后上述水肿现象减轻，并促使胶质细胞、肉芽组织及胶原成分大量出现，吞噬反应活跃，可见多数吞噬细胞对病灶的修复起到一定的积极作用。
4 讨 论
脑水肿是脑出血时一复杂的继发性病理改变，很多方面的研究难以在人体进行，而是以不同类型的脑出血动物模型中获得。本实验的脑出血动物模型较接近临床脑出血的病理特征实验结果表明，脑组织水含量升高明显与O含量升高相平行，提示消瘀宁对减轻脑细胞受损、降低毛细血管通透性，减少血浆成分渗出有一定作用，其机理可能与保护抗氧化酶活性、清除O、抑制O介导的脂质过氧化物连锁反应等相关。研究证明脑中风时，氧自由基和脂质过氧化物(LPO)是重要的病理介质，在中风急性期氧自由基介导的病变过程起着关键的病理生理作用。脑蛋白的变化是反映血脑屏障受损程度的主要指标[5]。从实验结果来看，消瘀宁能促进血肿溶化吸收，增强胶质细胞的吞噬消化作用，降低脑水肿，对脑水肿有较好的防治作用，这可能与消瘀宁能提高脑组织SOD活性，纠正自由基代谢紊乱有一定直接关系，因此认为消瘀宁对脑水肿及脑出血的防治有一定作用。
, 百拇医药
*辽宁省自然基金资助课题第962257号
参考文献
[1] Tohansson BB.Brain eedema.Acta Neurochirurgica Suppp,1986,36∶137.
[2] Klatzo I.Pathophysiological aspects of brain edema.Acta Neuropathologica,1987,72(3)∶236.
[3] 王楠，贾筠生，曹棣芳，等.益气化瘀法治疗皮下和脑内血肿的实验性研究.上海中医药杂志，1985，(1)∶45.
[4] Gotoh O,Asamo T,Koide T,et al.Ischemic brain edema following occlusion of the middle cerebral artery im the rat.Strdce,1985,(6)∶101.
[5] 欧正武，李安国，李晖，等.补阳还五汤对实验性脑水肿氧自由基与细胞超微结构变化的影响.中国中西医结合杂志，1992，12(9)∶538.
收稿日期：1998-03-23, 百拇医药
单位：沈阳 110034 辽宁省中医研究院
关键词：消瘀宁颗粒剂；脑血肿；氧自由基；脑组织结构
中国现代应用药学990205
摘要 目的：为探讨消瘀宁颗粒剂治疗脑出血中风的机制。方法：以大鼠自体血凝块复制脑出血模型，用干湿比重法测脑组织水份，同时观察氧自由基(O)有关参数与脑组织学的变化。结果：脑血肿形成后，脑组织水份、脑蛋白、丙二醛含量明显增加；脑组织超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶活性降低。结论：消瘀宁颗粒剂有明显减轻脑血肿时O连锁反应对血脑屏障与脑细胞的损害作用，促进脑组织内血肿的吸收，对脑水肿有明显的防治作用。
Effects of “Xiaoyuning” Granule on change of oxygen free radical and brain histomorphology in rats with experimental cerebral hematoma
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Xia Suxia(Xia SX),Hu Liping(Hu LP),Ma Jie(Ma J),et al(Liaoning Academy of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034)
ABSTRACT OBJECTIVE：To observe the effect of “Xiaoyuning” on cerebral bematoma.METHODS:The experimental cerebralhematoma models were produced by injecting autogenous clot in therats.The influences of “XYN” on contents of protein,contents of water,oxygen free radical in brain tissue,histomorphology at the third day,seventh day after cerebral hematoma were observed.RESULTS:In the pathological group brain contents of protein and water,malondialdehyde increased progressively,and the decline of activities of superoxide dismutase and glutathione peroxidase were obvious,especially in side of hematoma(right brain).CONCLUSION:“XYN” was advantageous in thetreatment of encephall edema induced by experiment cerebal hematoma,and it suggest that “XYN” had the evident effects in antagonizing the damage of blood brain barrier and encephalic cell caused by free radical in cerebral hematoma.
, 百拇医药
KEY WORDS Xiaoyuning granule,cerebral hematoma,cerebral edema,oxygen free radical,brain histomorphology
脑出血中风急性期治疗迄今仍是医学领域亟待解决的问题[1，2]。由于脑组织特别易受氧自由基损伤，近年的实验资料表明，氧自由基介导的病变过程起着关键的病理生理作用。本实验通过观察消瘀宁颗粒剂对急性脑出血大鼠脑水含量，以及氧自由基变化的影响。用消瘀宁颗粒剂进行治疗探讨该药对脑细胞和血脑屏障(BBB)的保护效应及机理，以求为消瘀宁颗粒剂的临床应用提供一定实验依据。
材料与方法
1 材 料
1.1 动物：Wistar大白鼠56只，体重200～300g,月龄4～6个月，由沈阳药学院动物中心提供。
, http://www.100md.com
1.2 药物：由本院制剂室提供，含生药5.5g/ml(含黄芪、当归、远志、川芎、地龙、菖蒲、赤芍、红花、甘草)。
1.3 试剂：丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，蛋白含量用考马斯蓝测定法。
2 实验方法
2.1 脑血肿模型建立：实验大鼠均在术前一日眼动脉采血约1ml,凝固，置冰箱4℃保存(无菌)，手术当日统一用硫酸纸在万分之一天平上称取7mg自体血凝块，装入18号穿刺针内，仿王楠[3]等脑内注入血块的方法，行右侧脑内血肿埋藏术，所有动物均用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，手术部位在冠状缝前1mm,矢状缝旁开2.5mm,深度6mm,慢慢插入针芯，血块即被推出，注入血块后保留片刻拔针，颅骨小孔用骨蜡封口，再涂以火棉胶，缝合头皮。术后观察大鼠全身反应。
, 百拇医药
2.2 给药及指标检测：68只大鼠随机分为4组：①正常对照组14只不造型，po生理盐水8ml/kg;②模型组18只，于造模前2d po生理盐水8ml/kg;③消瘀宁高、低剂量组各18只，于造模前2天给药，高剂量组po 44.0g/kg,低剂量组po 22.0g/kg，每组均分为给药5d和9d二批。观察动物一般情况，体重变化及死亡率。造模后第3天、第7天分批活杀取脑，将脑经纵裂均匀分为左、右两半球，再经血肿正中冠状切开，分为左右前后四部分，前部作组织学检查，后部作水含量[4]、脑蛋白、SOD、MDA、GSH-PX的测定，并用统计学方法进行数据处理。
3 结 果
3.1 动物一般情况、体重变化及死亡率：实验动物在麻醉苏醒后均有不同程度的活动减少，自洁能力下降、饮食、饮水量减少，体重明显减轻，左侧肢体肌张力增高，肌力减弱，以前肢明显，动作缓慢、行走跛行，并向右侧(健侧)偏转，个别动物1～3d内有死亡。上述各种表现以模型组尤为明显(见表1)。
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表1 消瘀宁颗粒剂对大鼠体重、死亡率的影响 组 别
体重差异值(g,d)
死亡率(%,d)
P*
3
7
3
正常组
+5
+10
0
>0.05
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模型组
-14
-24
22.2
消瘀宁高剂量组
-3
-5
5.6
>0.05
(44g/kg)
消瘀宁低剂量组
-4
-7
, 百拇医药
11.1
>0.05
(22g/kg)
注：*与模型组比较的死亡率
3.2 脑组织含水量的变化：脑组织含水量测定基本按Gotoh等[4]方法，(湿重-干重)/湿重×100%。结果表明造模后3、7d，模型组右脑组织含水量明显高于正常组(P<0.05)，而给药组上述值均明显低于模型组(P<0.05)，见表2。表2 消瘀宁颗粒剂对大鼠脑组织含水量的影响(±s，%) 组 别
天数(d)
动物数
左脑
, 百拇医药 右脑
正常组
3
7
78.01±0.72
78.04±0.56*1
7
7
78.03±0.68
78.03±0.37*2
模型组
3
, 百拇医药
7
78.59±0.75
80.57±0.97*3
7
7
78.21±0.23
79.30±0.69*4
消瘀宁高剂量组
3
9
78.09±0.71
78.82±0.74*2
, 百拇医药
7
8
78.21±0.22
78.25±0.57
消瘀宁低剂量组
3
8
78.67±0.68
79.58±0.78*2
7
8
78.31±0.71
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78.78±0.59
注：与模型组比较，*1P<0.01，*2P<0.05；与左脑比较，*3P<0.01，*4P<0.05
3.3 脑组织MDA、蛋白含量及SOD、GSH-PX活性：造模3d时，模型组和给药组左右侧脑组织MDA、蛋白含量较正常组左右侧 明显增高(P<0.05)，给药组左右侧 脑组织MDA、蛋白含量均较模型组同一部位明显减少(P<0.05)。而模型组和给药组SOD、GSH-PX活性均低于正常组(P<0.05)，右侧均较左侧降低显著(P<0.01)，给药组左右侧 脑组织SOD、GSH-PX活性则非常明显地高于模型组相应部位(P<0.01)，这与欧正武[5]等报道结果相符。造模7d时，给药各组左右侧脑组织MDA、蛋白含量及SOD、GSH-PX活性与正常组比较均无显著性差异(P>0.05)，与模型组同一部位比较差异显著(P<0.01)，结果见图1。
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图1 消瘀宁颗粒剂对大鼠脑组织蛋白含量、MDA、SOD、GSH-PX活性的影响
A-正常组(7只)；B-模型组(7只)；C-消瘀宁高剂量组；D-消瘀宁低剂量组；Ⅰ-左脑组织；Ⅱ-右脑组强；□-3d；□-7d
3.4 组织学变化：脑血肿形成3d时，模型组神经细胞高度肿胀呈空网状，同时可见大量淋巴细胞浸润及一些吞噬细胞存在，神经细胞呈缺血性改变，7d水肿减轻，见有单核细胞浸润用消瘀宁后上述水肿现象减轻，并促使胶质细胞、肉芽组织及胶原成分大量出现，吞噬反应活跃，可见多数吞噬细胞对病灶的修复起到一定的积极作用。
4 讨 论
脑水肿是脑出血时一复杂的继发性病理改变，很多方面的研究难以在人体进行，而是以不同类型的脑出血动物模型中获得。本实验的脑出血动物模型较接近临床脑出血的病理特征实验结果表明，脑组织水含量升高明显与O含量升高相平行，提示消瘀宁对减轻脑细胞受损、降低毛细血管通透性，减少血浆成分渗出有一定作用，其机理可能与保护抗氧化酶活性、清除O、抑制O介导的脂质过氧化物连锁反应等相关。研究证明脑中风时，氧自由基和脂质过氧化物(LPO)是重要的病理介质，在中风急性期氧自由基介导的病变过程起着关键的病理生理作用。脑蛋白的变化是反映血脑屏障受损程度的主要指标[5]。从实验结果来看，消瘀宁能促进血肿溶化吸收，增强胶质细胞的吞噬消化作用，降低脑水肿，对脑水肿有较好的防治作用，这可能与消瘀宁能提高脑组织SOD活性，纠正自由基代谢紊乱有一定直接关系，因此认为消瘀宁对脑水肿及脑出血的防治有一定作用。
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*辽宁省自然基金资助课题第962257号
参考文献
[1] Tohansson BB.Brain eedema.Acta Neurochirurgica Suppp,1986,36∶137.
[2] Klatzo I.Pathophysiological aspects of brain edema.Acta Neuropathologica,1987,72(3)∶236.
[3] 王楠，贾筠生，曹棣芳，等.益气化瘀法治疗皮下和脑内血肿的实验性研究.上海中医药杂志，1985，(1)∶45.
[4] Gotoh O,Asamo T,Koide T,et al.Ischemic brain edema following occlusion of the middle cerebral artery im the rat.Strdce,1985,(6)∶101.
[5] 欧正武，李安国，李晖，等.补阳还五汤对实验性脑水肿氧自由基与细胞超微结构变化的影响.中国中西医结合杂志，1992，12(9)∶538.
收稿日期：1998-03-23, 百拇医药