P53、nm23、CD44及FN表达与大肠癌淋巴结转移的关系
作者：赵铁华 严美申 何莉
单位：首都医科大学附属北京市复兴医院病理科
关键词：大肠癌 淋巴结转移 P53 nm23 CD44 纤维粘连蛋白(FN)
首都医科大学学报990106 提要：对73例原发性大肠癌(淋巴结转移37例，非转移36例)进行P53、nm23、CD44及纤维粘连蛋白(FN)免疫组化检测，研究其表达与淋巴结转移的关系。结果显示，nm23阴性表达与CD44阳性表达在淋巴结转移组与非转移组之间有显著性差异(P<0.01)。2项指标串联筛检，预测淋巴结转移的特异性为97.22%，敏感性为56.76%。nm23表达水平与大肠癌淋巴结转移呈负相关，CD44则呈正相关，2项指标联合应用可作为预测淋巴结转移的1项比较客观的指标。
中图分类号：R735.34
, http://www.100md.com
The Relation between the Expression of P53,nm23,CD44,FN and Lymph Node
Metastasis of Colorectal Carcinoma
Zhao Tiehua,Yan Meishen,He Li
Department of Pathology,Beijing Fuxing Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract:To assess the relationship of P53,nm23,CD44 and FN with lymph node metastasis of colorectal carcinoma,the expression of the four proteins was examined from 73 cases of colorectal carcinomas(37 cases with lymph node metastasis and 36 cases without metastasis) using immunohistochemical method. The low expression of nm23 and the positive expression of CD44 were significant difference between metastasis group and non-metastasis(P<0.01). When using the combination of nm23 and CD44 to predict the lymph node metastasis,the specificity was 97.22%,and the sensitivity was 56.76%. An inverse correlation was observed between nm23 expression and lymph node metastasis. While CD44 expression showed a positive correlation. The combination of the two tests may be used as a objective parameter in predicting the lymph node metastasis of colorectal carcinoma.
, 百拇医药
Key words: colorectal carcinoma; lymph node metastasis; P53; nm23; CD44; FN
肿瘤转移与肿瘤生长有关，受多种相关基因及蛋白产物调控。众多研究表明，肿瘤转移抑制基因nm23的表达水平与肿瘤细胞的转移呈显著负相关但有关P53、纤维粘连蛋白(FN)和CD44蛋白与肿瘤转移关系的报道不多。为探讨P53、nm23、CD44及FN与大肠癌淋巴结转移的关系及其临床应用价值，观察了73例大肠癌根治标本中上述4种蛋白表达结果，并进行免疫组化检测和分析。
1 材料和方法
收集我院1994～1997年间大肠癌根治切除标本73例，其中淋巴结转移37例，无淋巴结转移36例。标本均用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4 μm，HE染色，做病理诊断。全部病例采用LSAB法做免疫组化检测。P53单克隆抗体、CD44单克隆抗体、nm23多克隆抗体系DACO公司产品，FN单克隆抗体系北京中山公司产品，抗体体积比为1∶50。所有标本均进行微波抗原修复，滴加抗体均经微波处理。
, 百拇医药
判别标准：P53阳性信号位于细胞核内，呈均匀一致深染棕色颗粒，P53细胞核阳性数≥10%为阳性，<10%为阴性。nm23和FN阳性信号均位于胞浆，呈棕黄色颗粒，染色阳性肿瘤细胞数≥30%为阳性，<30%为阴性。CD44阳性信号位于胞膜，呈棕黄色细小颗粒，阳性肿瘤细胞数≥30%为阳性，<30%为阴性。
统计学处理采用卡方检验和多变量logistic回归统计分析。
2 结果
P53、nm23、CD44及FN与淋巴结(LN)转移的关系见表1。
表1 P53、nm23、CD44及FN与LN转移的关系 组别
n
P53
, 百拇医药 nm23
CD44
FN
+
-
+
-
+
-
+
-
LN转移+
37
24
, http://www.100md.com
13
10
27
27
10
24
13
LN转移-
36
16
20
26
10
14
, 百拇医药
22
19
17
P
>0.05
<0.01
<0.01
>0.05
由表1看出，nm23阴性表达和CD44阳性表达在淋巴结转移组和非转移组之间具有显著性差异。其预测LN转移的敏感性均为72.97%，特异性分别为72.22%和61.11%。而P53和FN阳性表达在上述2组之间无显著差异。
nm23与CD44联合应用与LN转移的关系见表2。表2 nm23与CD44联合应用与LN转移的关系
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组别
n
LN
+
-
nm23(-)CD44(+)
22
21
1
nm23(-)CD44(-)
15
6
9
, 百拇医药
nm23(+)CD44(+)
19
6
13
nm23(+)CD44(-)
17
4
13
合计
73
37
36
由表2可见，有22例nm23阴性表达而CD44阳性表达，其中21例淋巴结有转移。17例nm23阳性表达而CD44阴性表达中只有4例发生淋巴结转移，nm23阴性表达及CD44阳性表达与淋巴结转移密切相关(P<0.01)。2项指标串联筛检预测淋巴结转移的敏感性为56.76%，特异性为97.22%2项指标并联筛检预测淋巴结转移的敏感性为89.19%，特异性为36.11%。
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3 讨论
突变型P53为癌基因，具有促进恶性转化的活性，免疫方法测得的P53蛋白均是突变型P53蛋白。目前使用此方法已在乳腺癌、结肠癌、肺癌及胃癌等大多数人类肿瘤中检出P53的改变[1，2]。虽然许多报道认为它是肿瘤具有较强浸润性及高转移率的标志[2]，但已有不少观察结果证实P53过度表达与肿瘤淋巴结转移及患者生存时间无关[3，4]。本研究也得出同样结论，即P53蛋白阳性率在淋巴结转移组和非转移组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。据此我们认为P53基因突变使其抑癌作用丧失，仅与肿瘤发生密切相关，而对大肠癌的转移过程无明显作用。
众多研究表明，nm23表达水平与肿瘤细胞转移呈显著负相关，nm23基因在癌细胞内具有等位基因缺失及基因突变的遗传学特征[5]。本研究结果显示nm23蛋白表达与大肠癌淋巴结转移呈负相关，即伴有区域淋巴结转移者，其nm23阳性表达率显著低于无转移者，提示nm23基因在大肠癌淋巴结转移过程中发挥重要免疫调控作用，从而影响患者预后。
, 百拇医药
Arck等提出假说认为CD44变异型(CD44v)通过与远隔血管和淋巴管内尚未查明的配体结合，使转移而至的癌细胞更稳定地寄宿、聚集生长，形成转移瘤[6]。在乳腺癌及肺癌的研究中也证实CD44表达与淋巴结转移呈正相关[7]。Mulder等报道含有v6外显子CD44转录子所合成的CD44v6蛋白在肿瘤进展期有过度表达，并常伴术后肿瘤再发或远处转移[8]。本研究结果显示：CD44v表达与大肠癌区域淋巴结转移呈显著正相关。可以认为CD44v是一种参与癌侵袭过程的细胞粘附分子，其高表达是判断大肠癌转移的有用指标。
纤维粘连蛋白(FN)是细胞外基质的主要糖蛋白，对肿瘤细胞起粘附作用，限制瘤细胞脱离原发部位而转移。但有研究指出肿瘤细胞外的基质蛋白已不是正常的细胞外基质，而由肿瘤细胞所产生，因而不具备正常组织的屏障作用，对肿瘤细胞起不到粘附和限制其脱离原发部位的作用[9]。本研究显示，FN标记主要位于肿瘤细胞胞浆，癌周上皮细胞内分布较少，且色较淡染，对淋巴结转移组与非转移组的FN表达进行显著性检验，显示FN表达与大肠癌淋巴结转移无相关性。
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肿瘤的发生和转移是2个既相互联系又各自独立的生物学过程。它涉及多种相关基因的调控，肿瘤细胞转移、相关基因的激活和(或)转移抑制相关基因的失活，均可诱发肿瘤转移表型而导致转移的发生[10]。本组资料还显示，并联应用nm23和CD44 2个指标预测肿瘤淋巴结转移有较高的敏感性(89.19%)而串联应用2个指标有较高的特异性(97.22%)。故术前对活检标本做此种检测，有助于临床医师制定最佳手术方案，估计预后，并为今后开展的基因治疗提供更多的临床资料。
参考文献
1 Porter P L,Gown A M,Kramp S G,et al. Widespread P53 over expression in human malignant tumor. Am J Pathol,1992,140:145～153
2 Lipponen P,Ji H,Aaltomas S,et al. P53 protein expression in breast cancer as related to histopathological characteristics and prognosis. Int J Cancer,1993,55:51～56
, 百拇医药
3 张建中,郑庆璇,曹军,等.P53基因蛋白异常表达在胃癌中的意义.临床与实验病理学杂志,1997,13(3):238
4 陈晓黎,黄莺,王康敏.人肺癌P53及NDPK/nm23蛋白的研究.西安医科大学学报,1998,19(1):18
5 Wang L,Patel U,Ghosh L,et al. Mutation in nm23 gene is associated with metastasis in colorectal cancer. Cancer Res,1993,53:717～720
6 Arck R,Wirth K,Hofmann M,et al. Participation in normal immune responses of a metastasis-inducing splicing variant of CD44. Science,1992,257:1262
, 百拇医药
7 毛慧生,冯玉梅,刘红,等.乳腺癌淋巴结转移与nm23、CD44基因表达产物定量分析.中国肿瘤临床,1998,25:19
8 Mulder J W R,Kruyt P M,Sewnath M,et al. Colorectal cancer prognosis and expression of xeon-v6-containing CD44 proteins. Lancet,1994,344:1470
9 陈嘉薇,张艳梅,薛玉华.层粘连蛋白和纤维蛋白粘连在肺癌中的分布和意义.中华肿瘤杂志,1996,18(4):298
10 Aznavoorian S,Murphy A N,Stetler-Stevenson W G,et al. Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis. Cancer,1993,71:1368～1383
收稿日期：1998-09-07, 百拇医药
单位：首都医科大学附属北京市复兴医院病理科
关键词：大肠癌 淋巴结转移 P53 nm23 CD44 纤维粘连蛋白(FN)
首都医科大学学报990106 提要：对73例原发性大肠癌(淋巴结转移37例，非转移36例)进行P53、nm23、CD44及纤维粘连蛋白(FN)免疫组化检测，研究其表达与淋巴结转移的关系。结果显示，nm23阴性表达与CD44阳性表达在淋巴结转移组与非转移组之间有显著性差异(P<0.01)。2项指标串联筛检，预测淋巴结转移的特异性为97.22%，敏感性为56.76%。nm23表达水平与大肠癌淋巴结转移呈负相关，CD44则呈正相关，2项指标联合应用可作为预测淋巴结转移的1项比较客观的指标。
中图分类号：R735.34
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The Relation between the Expression of P53,nm23,CD44,FN and Lymph Node
Metastasis of Colorectal Carcinoma
Zhao Tiehua,Yan Meishen,He Li
Department of Pathology,Beijing Fuxing Hospital,Affiliate of Capital University of Medical Sciences
Abstract:To assess the relationship of P53,nm23,CD44 and FN with lymph node metastasis of colorectal carcinoma,the expression of the four proteins was examined from 73 cases of colorectal carcinomas(37 cases with lymph node metastasis and 36 cases without metastasis) using immunohistochemical method. The low expression of nm23 and the positive expression of CD44 were significant difference between metastasis group and non-metastasis(P<0.01). When using the combination of nm23 and CD44 to predict the lymph node metastasis,the specificity was 97.22%,and the sensitivity was 56.76%. An inverse correlation was observed between nm23 expression and lymph node metastasis. While CD44 expression showed a positive correlation. The combination of the two tests may be used as a objective parameter in predicting the lymph node metastasis of colorectal carcinoma.
, 百拇医药
Key words: colorectal carcinoma; lymph node metastasis; P53; nm23; CD44; FN
肿瘤转移与肿瘤生长有关，受多种相关基因及蛋白产物调控。众多研究表明，肿瘤转移抑制基因nm23的表达水平与肿瘤细胞的转移呈显著负相关但有关P53、纤维粘连蛋白(FN)和CD44蛋白与肿瘤转移关系的报道不多。为探讨P53、nm23、CD44及FN与大肠癌淋巴结转移的关系及其临床应用价值，观察了73例大肠癌根治标本中上述4种蛋白表达结果，并进行免疫组化检测和分析。
1 材料和方法
收集我院1994～1997年间大肠癌根治切除标本73例，其中淋巴结转移37例，无淋巴结转移36例。标本均用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4 μm，HE染色，做病理诊断。全部病例采用LSAB法做免疫组化检测。P53单克隆抗体、CD44单克隆抗体、nm23多克隆抗体系DACO公司产品，FN单克隆抗体系北京中山公司产品，抗体体积比为1∶50。所有标本均进行微波抗原修复，滴加抗体均经微波处理。
, 百拇医药
判别标准：P53阳性信号位于细胞核内，呈均匀一致深染棕色颗粒，P53细胞核阳性数≥10%为阳性，<10%为阴性。nm23和FN阳性信号均位于胞浆，呈棕黄色颗粒，染色阳性肿瘤细胞数≥30%为阳性，<30%为阴性。CD44阳性信号位于胞膜，呈棕黄色细小颗粒，阳性肿瘤细胞数≥30%为阳性，<30%为阴性。
统计学处理采用卡方检验和多变量logistic回归统计分析。
2 结果
P53、nm23、CD44及FN与淋巴结(LN)转移的关系见表1。
表1 P53、nm23、CD44及FN与LN转移的关系 组别
n
P53
, 百拇医药 nm23
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+
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+
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LN转移+
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LN转移-
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由表1看出，nm23阴性表达和CD44阳性表达在淋巴结转移组和非转移组之间具有显著性差异。其预测LN转移的敏感性均为72.97%，特异性分别为72.22%和61.11%。而P53和FN阳性表达在上述2组之间无显著差异。
nm23与CD44联合应用与LN转移的关系见表2。表2 nm23与CD44联合应用与LN转移的关系
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组别
n
LN
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nm23(-)CD44(+)
22
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nm23(-)CD44(-)
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, 百拇医药
nm23(+)CD44(+)
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nm23(+)CD44(-)
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合计
73
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由表2可见，有22例nm23阴性表达而CD44阳性表达，其中21例淋巴结有转移。17例nm23阳性表达而CD44阴性表达中只有4例发生淋巴结转移，nm23阴性表达及CD44阳性表达与淋巴结转移密切相关(P<0.01)。2项指标串联筛检预测淋巴结转移的敏感性为56.76%，特异性为97.22%2项指标并联筛检预测淋巴结转移的敏感性为89.19%，特异性为36.11%。
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3 讨论
突变型P53为癌基因，具有促进恶性转化的活性，免疫方法测得的P53蛋白均是突变型P53蛋白。目前使用此方法已在乳腺癌、结肠癌、肺癌及胃癌等大多数人类肿瘤中检出P53的改变[1，2]。虽然许多报道认为它是肿瘤具有较强浸润性及高转移率的标志[2]，但已有不少观察结果证实P53过度表达与肿瘤淋巴结转移及患者生存时间无关[3，4]。本研究也得出同样结论，即P53蛋白阳性率在淋巴结转移组和非转移组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。据此我们认为P53基因突变使其抑癌作用丧失，仅与肿瘤发生密切相关，而对大肠癌的转移过程无明显作用。
众多研究表明，nm23表达水平与肿瘤细胞转移呈显著负相关，nm23基因在癌细胞内具有等位基因缺失及基因突变的遗传学特征[5]。本研究结果显示nm23蛋白表达与大肠癌淋巴结转移呈负相关，即伴有区域淋巴结转移者，其nm23阳性表达率显著低于无转移者，提示nm23基因在大肠癌淋巴结转移过程中发挥重要免疫调控作用，从而影响患者预后。
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Arck等提出假说认为CD44变异型(CD44v)通过与远隔血管和淋巴管内尚未查明的配体结合，使转移而至的癌细胞更稳定地寄宿、聚集生长，形成转移瘤[6]。在乳腺癌及肺癌的研究中也证实CD44表达与淋巴结转移呈正相关[7]。Mulder等报道含有v6外显子CD44转录子所合成的CD44v6蛋白在肿瘤进展期有过度表达，并常伴术后肿瘤再发或远处转移[8]。本研究结果显示：CD44v表达与大肠癌区域淋巴结转移呈显著正相关。可以认为CD44v是一种参与癌侵袭过程的细胞粘附分子，其高表达是判断大肠癌转移的有用指标。
纤维粘连蛋白(FN)是细胞外基质的主要糖蛋白，对肿瘤细胞起粘附作用，限制瘤细胞脱离原发部位而转移。但有研究指出肿瘤细胞外的基质蛋白已不是正常的细胞外基质，而由肿瘤细胞所产生，因而不具备正常组织的屏障作用，对肿瘤细胞起不到粘附和限制其脱离原发部位的作用[9]。本研究显示，FN标记主要位于肿瘤细胞胞浆，癌周上皮细胞内分布较少，且色较淡染，对淋巴结转移组与非转移组的FN表达进行显著性检验，显示FN表达与大肠癌淋巴结转移无相关性。
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肿瘤的发生和转移是2个既相互联系又各自独立的生物学过程。它涉及多种相关基因的调控，肿瘤细胞转移、相关基因的激活和(或)转移抑制相关基因的失活，均可诱发肿瘤转移表型而导致转移的发生[10]。本组资料还显示，并联应用nm23和CD44 2个指标预测肿瘤淋巴结转移有较高的敏感性(89.19%)而串联应用2个指标有较高的特异性(97.22%)。故术前对活检标本做此种检测，有助于临床医师制定最佳手术方案，估计预后，并为今后开展的基因治疗提供更多的临床资料。
参考文献
1 Porter P L,Gown A M,Kramp S G,et al. Widespread P53 over expression in human malignant tumor. Am J Pathol,1992,140:145～153
2 Lipponen P,Ji H,Aaltomas S,et al. P53 protein expression in breast cancer as related to histopathological characteristics and prognosis. Int J Cancer,1993,55:51～56
, 百拇医药
3 张建中,郑庆璇,曹军,等.P53基因蛋白异常表达在胃癌中的意义.临床与实验病理学杂志,1997,13(3):238
4 陈晓黎,黄莺,王康敏.人肺癌P53及NDPK/nm23蛋白的研究.西安医科大学学报,1998,19(1):18
5 Wang L,Patel U,Ghosh L,et al. Mutation in nm23 gene is associated with metastasis in colorectal cancer. Cancer Res,1993,53:717～720
6 Arck R,Wirth K,Hofmann M,et al. Participation in normal immune responses of a metastasis-inducing splicing variant of CD44. Science,1992,257:1262
, 百拇医药
7 毛慧生,冯玉梅,刘红,等.乳腺癌淋巴结转移与nm23、CD44基因表达产物定量分析.中国肿瘤临床,1998,25:19
8 Mulder J W R,Kruyt P M,Sewnath M,et al. Colorectal cancer prognosis and expression of xeon-v6-containing CD44 proteins. Lancet,1994,344:1470
9 陈嘉薇,张艳梅,薛玉华.层粘连蛋白和纤维蛋白粘连在肺癌中的分布和意义.中华肿瘤杂志,1996,18(4):298
10 Aznavoorian S,Murphy A N,Stetler-Stevenson W G,et al. Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis. Cancer,1993,71:1368～1383
收稿日期：1998-09-07, 百拇医药