胃癌及乳癌对化疗药物敏感性的测定
作者：王秋波 鲁迎年 王静 张艳丽
单位：青岛医学院免疫学教研室(青岛 266021)
关键词：胃肿瘤；乳房肿瘤；抗肿瘤药；药物筛选；比色法
青岛医学院学报990210 【摘要】 ①目的 探讨胃癌、乳癌对常用化疗药物的反应性，筛选针对个体的化疗药物，为临床用药提供依据。②方法 采用噻唑蓝(MTT)法，对肿瘤组织进行5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、氨甲喋呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)、平阳霉素(PYM)、足叶乙甙(VP-16)敏感性测定。③结果 7种化疗药物对胃癌、乳癌抑制率不同，其中DDP，5-FU，PYM，VCR，MMC对胃癌抑制率较高；5-FU，PYM，DDP对乳癌抑制率较高。不同个体对化疗药物敏感性差异较大，胃癌病人对DDP，5-FU，PYM敏感者居多；乳癌病人对5-FU，PYM敏感者居多。④结论 不同肿瘤及同一肿瘤不同个体对化疗药物敏感性有显著差异。
, 百拇医药
中国图书馆分类法分类号 R73-361
SENSITIVITY TEST OF HUMAN GAS TRIC CANCER
AND BREAST CANCER TO CHEMOTHERAPY
Wang Qiubo, Lu Yingnian , Wang Jing，et al
Departmment of Immunology, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the reactivity of human gastric cancer and breast cancer to chemotherapeutic agents and screen the sensi tive drugs for individual. Methods The chemosensitivities of 24 human gastric cancer and 17 human breast cancer samples to 5-FU,DDP,MTX,MMC,VCR,PYM,VP-16 were determined by using tetrazolium-based colorimetric assay ( MTT assay). Results DDP, 5-FU,PYM,VCR,MMC showed significant inhibitory effe cts for gastric cancer, and 5-FU,PYM,DDP showed significant inhibitory effe cts for breast cancer. The individual chemosensitivity was different. Most of ga stric cancer samples were sensitive to DDP,5-FU,PYM, and breast cancer samples were sensitive to 5-FU,PYM. Conclusion Different neoplasms and different individual of the sa me neoplasm showed significant difference in chemosensitivity.
, http://www.100md.com
【KEY WORDS】 stomach neoplasms; mammary neoplasms; antineoplastic agents; drug screening; colorimetry
临床上肿瘤化疗存在明显的个体差异，体外检测肿瘤细胞对化疗药物的反应性，对指导临床化疗，提高疗效有重要意义〔1〕。本文采用噻唑蓝(MTT)比色法检测24例胃癌、17例乳癌对7种常用抗癌药物的敏感性，为临床用药提供参考。
1 材料和方法
1.1 标本来源
1996年3～6月，自我院附属医院及青岛市市立医院收集新鲜肿瘤标本41例，其中胃癌24例，年龄55～76岁；乳癌17例，年龄35～70岁。全部标本均经病理证实。无菌条件下自肿瘤生长较好部位取1～2g组织，置无菌Hanks液中，2h内送检。
, http://www.100md.com
1.2 抗癌药物
7种抗癌药物分别为5-氟尿嘧啶(5-FU，天津人民制药厂生产)、顺铂(DDP，齐鲁制药厂生产)、氨甲喋呤(MTX，上海华联制药厂生产)、丝裂霉素(MMC，日本Kyowa公司生产)、长春新碱(VCR，南通勤奋制药厂生产)、平阳霉素(PYM，天津河北制药厂生产)。
1.3 测定方法
1.3.1 肿瘤单细胞悬液制备 无菌条件下，剪去脂肪组织及坏死组织，用Hank液漂洗2次，剪成约1mm×1mm组织块，置于0.025g/L胰蛋白酶中，37℃消化3h,150目细胞筛过滤，Hank液洗2次，离心弃上清，然后用含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养液配制成单细胞悬液，台盼蓝检测肿瘤细胞活性达90%以上，最终调整细胞的浓度为(1～2)×108/L.
1.3.2 MTT比色分析 将上述调整好的细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，100μL/孔，在37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中预培养4h，每种药物做复孔，每孔加入20μL抗癌药物，4孔做RPMI-1640培养液对照，继续培养24h，弃上清,加入二甲亚砜，振荡器振荡，充分溶解甲
，酶标仪上测定吸光度(λ＝490nm)。药物对肿瘤抑制率按下列公式计算：抑制率＝(对照孔吸光度-加药孔吸光度)/对照孔吸光度×100%.判断标准：抑制率≥30%为敏感，<30%为不敏感。
, 百拇医药
1.4 统计学方法
结果用
±s表示。药物敏感性及不同个体间敏感性比较采用配伍组设计的多个样本均数的方差分析。为达到方差齐性要求，全部数据均进行平方根反正弦转换。7种抗癌药物间两两比较采用q检验。用POMS软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 抗癌药物对胃癌和乳癌抑制率
7种抗癌药物对胃癌抑制率比较差异有显著性(F=4.98,P<0.01),其中DDP,5-FU,PYM,VCR,MMC为敏感组，VP-16和MTX为不敏感组，两组间比较有显著差异(q=4.41～5.36,P<0.05);7种抗癌药物对乳癌抑制率比较差异有极显著性(F=8.30,P<0.01),其中5-FU，PYM，DDP为敏感组，MMC，MTX，VP-16和VCR为不敏感组，两组间比较差异有极显著意义(q=3.56～7.67，P<0.01)。见表1.
, 百拇医药
表1 抗癌药物对胃癌和乳癌抑制率(%,±s) 疾病
n
5-FU
DDP
MMC
PYM
VP-16
VCR
MTX
胃癌
24
44±19
, http://www.100md.com
45±17
30±12
42±21
28±16
34±20
25±12
乳癌
17
37±15
33±13
27± 9
36±10
22±7
, 百拇医药
21±8
23±10
2.2 抗癌药物对胃癌和乳癌敏感性
同一种肿瘤不同个体对化疗药物敏感性不同。胃癌病人对DDP，5-FU和PYM敏感者居多；乳癌病人对5-FU和PYM敏感者居多。见表2.
表2 抗癌药物对胃癌和乳癌敏感性(%) 疾病
n
5-FU
DDP
MMC
PYM
VP-16
, 百拇医药
VCR
MTX
胃癌
24
83
83
50
75
33
33
16
乳癌
17
70
, 百拇医药
41
35
70
12
29
24
3 讨论
胃癌和乳癌是常见的恶性肿瘤，以手术为主辅以化疗是治疗的主要手段。近年来发现，肿瘤细胞对化疗药物存在明显个体差异，因此，化疗前预测个体对化疗药物敏感性，对提高肿瘤治疗效果，减轻副作用，减少用药盲目性有重要意义〔2〕。MTT比色法是较常采用的体外抗癌药物筛选方法之一，已用于多种肿瘤的化疗药物筛选〔3〕。
本研究采用7种化疗药物对胃癌、乳癌进行药敏试验，结果显示，胃癌、乳癌对化疗药物反应性不同。DDP，5-FU，PYM，VCR和MMC对胃癌抑制率较高；5-FU，PYM和DDP对乳癌抑制率较高。同种肿瘤不同病人对上述药物敏感程度不同，其中胃癌对DDP，5-FU和PYM敏感者居多；乳癌对5-FU和PYM敏感者居多，这一结果与临床用药基本一致。而不同个体对某一药物敏感性差异较大，这进一步说明预测个体化疗敏感性对指导治疗的重要性。
, 百拇医药
MTT比色法系体外药物敏感试验方法，受多种因素影响，有其局限性〔4〕。某些药物不适宜用该方法，如通过体内发挥抗肿瘤作用的药物(环磷酰胺、保尔佳等)。另外，药物的成色及酸碱度也影响实验结果，如阿霉素、正定霉素等〔5〕。因此，MTT比色法药敏结果只可作为选药参考，最好能结合体内药敏结果以及临床选择有效药物。 参考文献
1 Alley MC, Scudiero DA, Monks, et al. Feasibility of drug screening wi th panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay. C ancer Res,1988，48:589
2 张援平.恶性肿瘤体外化疗药物敏感试验的进展.国外医学临床生物化学及检验学分册,1995，16(4):165
, 百拇医药
3 Pieters R, Huismans DR, Legva A, et al. Comparison of the rapid autom ated MTT-assay with a dye exclusion assay for chemosensitivity testing in child hood leukemia. Br J Cancer,1989，59:217
4 Twentyman PR, Luscombe M. A study of some variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay for cell growth and chemosensitivity. Br J Cancer,1987 ，56:279
5 汉 平,王小宁,孙华蕴,等.肿瘤细胞体外药敏试验MTT分析法.中华肿瘤杂志，1993，15(6):570
(1998-11-10收稿 1999-05-21修回), 百拇医药
单位：青岛医学院免疫学教研室(青岛 266021)
关键词：胃肿瘤；乳房肿瘤；抗肿瘤药；药物筛选；比色法
青岛医学院学报990210 【摘要】 ①目的 探讨胃癌、乳癌对常用化疗药物的反应性，筛选针对个体的化疗药物，为临床用药提供依据。②方法 采用噻唑蓝(MTT)法，对肿瘤组织进行5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、氨甲喋呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)、长春新碱(VCR)、平阳霉素(PYM)、足叶乙甙(VP-16)敏感性测定。③结果 7种化疗药物对胃癌、乳癌抑制率不同，其中DDP，5-FU，PYM，VCR，MMC对胃癌抑制率较高；5-FU，PYM，DDP对乳癌抑制率较高。不同个体对化疗药物敏感性差异较大，胃癌病人对DDP，5-FU，PYM敏感者居多；乳癌病人对5-FU，PYM敏感者居多。④结论 不同肿瘤及同一肿瘤不同个体对化疗药物敏感性有显著差异。
, 百拇医药
中国图书馆分类法分类号 R73-361
SENSITIVITY TEST OF HUMAN GAS TRIC CANCER
AND BREAST CANCER TO CHEMOTHERAPY
Wang Qiubo, Lu Yingnian , Wang Jing，et al
Departmment of Immunology, Qingdao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the reactivity of human gastric cancer and breast cancer to chemotherapeutic agents and screen the sensi tive drugs for individual. Methods The chemosensitivities of 24 human gastric cancer and 17 human breast cancer samples to 5-FU,DDP,MTX,MMC,VCR,PYM,VP-16 were determined by using tetrazolium-based colorimetric assay ( MTT assay). Results DDP, 5-FU,PYM,VCR,MMC showed significant inhibitory effe cts for gastric cancer, and 5-FU,PYM,DDP showed significant inhibitory effe cts for breast cancer. The individual chemosensitivity was different. Most of ga stric cancer samples were sensitive to DDP,5-FU,PYM, and breast cancer samples were sensitive to 5-FU,PYM. Conclusion Different neoplasms and different individual of the sa me neoplasm showed significant difference in chemosensitivity.
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【KEY WORDS】 stomach neoplasms; mammary neoplasms; antineoplastic agents; drug screening; colorimetry
临床上肿瘤化疗存在明显的个体差异，体外检测肿瘤细胞对化疗药物的反应性，对指导临床化疗，提高疗效有重要意义〔1〕。本文采用噻唑蓝(MTT)比色法检测24例胃癌、17例乳癌对7种常用抗癌药物的敏感性，为临床用药提供参考。
1 材料和方法
1.1 标本来源
1996年3～6月，自我院附属医院及青岛市市立医院收集新鲜肿瘤标本41例，其中胃癌24例，年龄55～76岁；乳癌17例，年龄35～70岁。全部标本均经病理证实。无菌条件下自肿瘤生长较好部位取1～2g组织，置无菌Hanks液中，2h内送检。
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1.2 抗癌药物
7种抗癌药物分别为5-氟尿嘧啶(5-FU，天津人民制药厂生产)、顺铂(DDP，齐鲁制药厂生产)、氨甲喋呤(MTX，上海华联制药厂生产)、丝裂霉素(MMC，日本Kyowa公司生产)、长春新碱(VCR，南通勤奋制药厂生产)、平阳霉素(PYM，天津河北制药厂生产)。
1.3 测定方法
1.3.1 肿瘤单细胞悬液制备 无菌条件下，剪去脂肪组织及坏死组织，用Hank液漂洗2次，剪成约1mm×1mm组织块，置于0.025g/L胰蛋白酶中，37℃消化3h,150目细胞筛过滤，Hank液洗2次，离心弃上清，然后用含体积分数为0.1小牛血清的RPMI-1640培养液配制成单细胞悬液，台盼蓝检测肿瘤细胞活性达90%以上，最终调整细胞的浓度为(1～2)×108/L.
1.3.2 MTT比色分析 将上述调整好的细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，100μL/孔，在37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中预培养4h，每种药物做复孔，每孔加入20μL抗癌药物，4孔做RPMI-1640培养液对照，继续培养24h，弃上清,加入二甲亚砜，振荡器振荡，充分溶解甲
，酶标仪上测定吸光度(λ＝490nm)。药物对肿瘤抑制率按下列公式计算：抑制率＝(对照孔吸光度-加药孔吸光度)/对照孔吸光度×100%.判断标准：抑制率≥30%为敏感，<30%为不敏感。, 百拇医药
1.4 统计学方法
结果用
±s表示。药物敏感性及不同个体间敏感性比较采用配伍组设计的多个样本均数的方差分析。为达到方差齐性要求，全部数据均进行平方根反正弦转换。7种抗癌药物间两两比较采用q检验。用POMS软件进行统计学处理。2 结果
2.1 抗癌药物对胃癌和乳癌抑制率
7种抗癌药物对胃癌抑制率比较差异有显著性(F=4.98,P<0.01),其中DDP,5-FU,PYM,VCR,MMC为敏感组，VP-16和MTX为不敏感组，两组间比较有显著差异(q=4.41～5.36,P<0.05);7种抗癌药物对乳癌抑制率比较差异有极显著性(F=8.30,P<0.01),其中5-FU，PYM，DDP为敏感组，MMC，MTX，VP-16和VCR为不敏感组，两组间比较差异有极显著意义(q=3.56～7.67，P<0.01)。见表1.
, 百拇医药
表1 抗癌药物对胃癌和乳癌抑制率(%,
±s) 疾病n
5-FU
DDP
MMC
PYM
VP-16
VCR
MTX
胃癌
24
44±19
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45±17
30±12
42±21
28±16
34±20
25±12
乳癌
17
37±15
33±13
27± 9
36±10
22±7
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21±8
23±10
2.2 抗癌药物对胃癌和乳癌敏感性
同一种肿瘤不同个体对化疗药物敏感性不同。胃癌病人对DDP，5-FU和PYM敏感者居多；乳癌病人对5-FU和PYM敏感者居多。见表2.
表2 抗癌药物对胃癌和乳癌敏感性(%) 疾病
n
5-FU
DDP
MMC
PYM
VP-16
, 百拇医药
VCR
MTX
胃癌
24
83
83
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33
16
乳癌
17
70
, 百拇医药
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35
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29
24
3 讨论
胃癌和乳癌是常见的恶性肿瘤，以手术为主辅以化疗是治疗的主要手段。近年来发现，肿瘤细胞对化疗药物存在明显个体差异，因此，化疗前预测个体对化疗药物敏感性，对提高肿瘤治疗效果，减轻副作用，减少用药盲目性有重要意义〔2〕。MTT比色法是较常采用的体外抗癌药物筛选方法之一，已用于多种肿瘤的化疗药物筛选〔3〕。
本研究采用7种化疗药物对胃癌、乳癌进行药敏试验，结果显示，胃癌、乳癌对化疗药物反应性不同。DDP，5-FU，PYM，VCR和MMC对胃癌抑制率较高；5-FU，PYM和DDP对乳癌抑制率较高。同种肿瘤不同病人对上述药物敏感程度不同，其中胃癌对DDP，5-FU和PYM敏感者居多；乳癌对5-FU和PYM敏感者居多，这一结果与临床用药基本一致。而不同个体对某一药物敏感性差异较大，这进一步说明预测个体化疗敏感性对指导治疗的重要性。
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MTT比色法系体外药物敏感试验方法，受多种因素影响，有其局限性〔4〕。某些药物不适宜用该方法，如通过体内发挥抗肿瘤作用的药物(环磷酰胺、保尔佳等)。另外，药物的成色及酸碱度也影响实验结果，如阿霉素、正定霉素等〔5〕。因此，MTT比色法药敏结果只可作为选药参考，最好能结合体内药敏结果以及临床选择有效药物。 参考文献
1 Alley MC, Scudiero DA, Monks, et al. Feasibility of drug screening wi th panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay. C ancer Res,1988，48:589
2 张援平.恶性肿瘤体外化疗药物敏感试验的进展.国外医学临床生物化学及检验学分册,1995，16(4):165
, 百拇医药
3 Pieters R, Huismans DR, Legva A, et al. Comparison of the rapid autom ated MTT-assay with a dye exclusion assay for chemosensitivity testing in child hood leukemia. Br J Cancer,1989，59:217
4 Twentyman PR, Luscombe M. A study of some variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay for cell growth and chemosensitivity. Br J Cancer,1987 ，56:279
5 汉 平,王小宁,孙华蕴,等.肿瘤细胞体外药敏试验MTT分析法.中华肿瘤杂志，1993，15(6):570
(1998-11-10收稿 1999-05-21修回), 百拇医药