脑胶质瘤细胞的化疗药物敏感试验
作者：贺昭忠 王秋波 杨新生 鲁迎年
单位：贺昭忠 杨新生(青岛医学院附属医院神经外科，青岛 266003)；王秋波 鲁迎年(青岛医学院免疫学教研室)
关键词：神经胶质瘤；脑；药物评价
青岛医学院学报990217 【摘要】 ①目的 探讨脑胶质瘤对化疗药物的敏感性，指导化疗药物的选择。②方法 采用四唑蓝快速比色(MTT)法,检测38例脑胶质瘤新鲜组织对8种化疗药物的敏感性。③结果 8种化疗药物对脑胶质瘤的抑制率差异有极显著性(F＝47.7，P<0.01)，其中双氯乙基亚硝脲、司莫司汀、洛莫司汀抑制率较高。与其他几种化疗药物比较差异有显著性(q＝8.69～14.31，6.09～11.74，5.43～9.13，P均<0.05)。④结论 双氯乙基亚硝脲、司莫司汀、洛莫司汀对脑胶质瘤具有明显的抑制作用。
中国图书馆分类法分类号 R735.1
, http://www.100md.com
STUDY OF THE SENSITIVITY OF B RAIN GLIOMA
CELLS TO SOME CHEMOTHERAPEUTIC DRUGS
He Zhaozhong, Wang Qiubo, Yang Xinsheng, et al
Department of Neurosurgery, The Affiliated Hospital
of Qingdao Medical College, Qingdao 266003
【ABSTRACT】 Objective To study the sensitivity of brain glioma cells to some chemotherapeutic drugs and to select the sensitive dru gs for individual patient. Methods The chemosensitivities of glioma cells in 38 patients to eight chemotherapeutic agents were determined by using a tetrazolium-based deco lorimetric assay (MTT assay). Results The inhibitory effects of eight chemotherapeutic agents t o brain glioma cells were different(F=47.7,P<0.01), with carmustine(BCNU), s emustine(MeCCNU), comustin(CCNU) having better inhibitory effect than other agen ts(q=8.69-14.31, 6.09-11.74,5.43-9.13, P<0.05). Conclusion BCNU, MeCCNU, CCNU had better inhibitory effects to br ain glioma cells and the results may be used for clinical reference in selecting chemotherapeutic drugs.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 glioma; brain; drug evaluation
1997年5月～1998年7月，我们采用四唑蓝快速比色(MTT)法,对38例脑胶质瘤新鲜组织进行了化疗药物敏感试验,以指导化疗药物的选择。
1 资料和方法
1.1 一般资料
38例病人中，男25例，女13例；年龄6～66岁。全部病人均行肿瘤切除术，并经病理检查证实为脑胶质瘤。其中星形细胞瘤Ⅰ～Ⅱ级5例，星形细胞瘤Ⅱ级11例，星形细胞瘤Ⅲ级12例，星形细胞瘤Ⅳ级3例，少突胶质细胞瘤3例，间变性室管膜细胞瘤4例。病人术前均未行放疗及化疗。
1.2 单细胞悬液的制备
无菌条件下将未电灼的肿瘤标本用Hank液漂洗2次，剪成约1mm×1mm大小组织块，然后置25g/L胰蛋白酶中消化，4℃搅拌过夜。细胞消化液经15目细胞筛过滤，用Hank液洗2次，制成单细胞悬液，用台盼蓝测试细胞活性，肿瘤细胞活性达95%以上，再用含体积分数为0.1的小牛血清的PRMI-1640培养液调整浓度为(1～5)×108/L.
, http://www.100md.com
1.3 化疗药物的选择
8种化疗药物分别为氟尿嘧啶(FU)、顺铂(DDP)、氨甲喋呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)、司莫司汀(MeCCNU)、洛莫司汀(CCNU)、双氯乙基亚硝脲(BCNU)、威猛-26(VM-26)，以上药物均用培养液配制，浓度按临床治疗剂量的血浆峰值计算。
1.4 MTT法
取上述细胞液0.1mL置96孔细胞培养板中预培养4h，每孔加入20μL化疗药物，每种药物2～3孔。对照组加PRMI-1640培养液。在37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中培养68h后，离心10min，吸去上清液，每孔加入MTT20μL(5g/L)，继续培养4h后，离心弃去上清液，每孔加入二甲亚砜(DMSO)20μL，使甲
彻底溶解，用490nm滤光片在自动酶标读数仪上比色，测出每孔吸光度(A)值。按下列公式计算化疗药物对肿瘤细胞的抑制率：
, 百拇医药
抑制率＝(对照A值-加药A值)/对照A值×100%
1.5 统计学处理
结果用
±s表示。每种药物抑制率及不同个体间抑制率比较，采用配伍组设计的多个标本均数的方差分析，8种化疗药物间比较采用q检验。
2 结果
8种化疗药物对脑胶质瘤细胞的抑制率差异有极显著性(F＝47.6，P<0.01)。其中BCNU，MeCCNU，CCNU平均抑制率较高，与其他几种化疗药物比较差异有显著性(q＝8.69～14.31，6.09～11.74，5.43～9.13，P均<0.05)。见表1.
表1 8种化疗药物对脑胶质瘤的抑制率(%,±s) 药物
, 百拇医药
n
抑制率
FU
38
24.1±7.4
DDP
38
28.1±6.6
MTX
38
17.3±9.3
MMC
38
, http://www.100md.com
20.7±7.2
BCNU
38
41.1±9.8
VM-26
38
30.3±8.4
CCNU
38
36.4±5.7
MeCCNU
38
38.9±6.5
, 百拇医药
3 讨论
化疗是综合治疗脑胶质瘤的重要方法之一，特别是对消灭手术后残留肿瘤细胞，防止肿瘤复发起十分重要的作用。然而，临床上相当一部分病人化疗效果不理想，以前一直强调是由于血-脑屏障的存在，药物不易进入肿瘤细胞，近年来的研究发现，脑胶质瘤化疗效果不理想有多方面的原因，除了胶质瘤本身对化疗药物耐药外，未能针对不同的肿瘤类型、不同的肿瘤个体选择敏感的药物也是一个重要原因〔1～3〕。因而进行肿瘤化学治疗敏感性、抗药性的检测和研究，对指导临床化疗药物的选择具有重要意义〔4〕。本试验采用MTT法检测了临床上常用的8种化疗药物对脑胶质瘤细胞的抑制率，结果发现8种药物对脑胶质瘤的抑制率是不同的。其中以BCNU，MeCCNU，CCNU抑制率较高，与其他几种化疗药物比较，差异有显著性。可见在化疗前进行化疗药物敏感性检测是十分必要的〔5，6〕。Kondo〔7〕报道了23例肿瘤病人，依据药物敏感性检测结果实施化疗，结果43.5%的病人肿瘤缩小50%以上。Furukawa〔8〕依据药物敏感性预测给140例肿瘤病人化疗，有效率高达88.6%.Vonhoff〔9〕给246例肿瘤病人作体外药物敏感试验，比较体外结果与临床反应之间的关系，结果临床有效与体外敏感的符合率为60%；临床无效与体外不敏感的符合率为85%.我们严格按照药敏预测的结果给病人实施了化疗，化疗后的确切效果有待于临床上进一步观察。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Pieters R,Huismans DR,Legva A,et al. Comparison of the rapid auto mated MTT-assay with a dye exclusion assay for chemosensitivity in childhood leukaemia. Br J Cancer, 1989,59:217
2 Campling BG,Pym J,Baker HM, et al. Chemosensitivity testing of small lung cancer using the MTT assay. Br J Cancer, 1991,63:75
3 李珊珊.恶性肿瘤化疗药物的体外敏感试验.癌症,1993,12(6):547
4 丁亚军.恶性肿瘤体外药物敏感性试验新进展.国外医学肿瘤学分册,1990,3:145
, 百拇医药
5 王皓.几种常用恶性肿瘤体外化疗药物敏感性预测法的临床应用评价.国外医学肿瘤学分册,1994,21(1):23
6 张胜本主编.肿瘤化学治疗敏感性与抗药性.成都:四川科学技术出版社,1995.55
7 Kondo T. High-sensitivity antitumor drug sensitivity testing. Onco logy, 1994,51(6):1711
8 Furukawa T. High in vitro-in vivo correlation of drug respon se using sponge-gel-supported three-dimensional histoculture and the MTT end point. Int J Cancer,1992,52:489
9 Vonhoff D. Prospective clinical trial of a human tumor cloni ng system. Cancer Res, 1983,43:1926
(1998-07-30收稿 1999-04-25修回), 百拇医药
单位：贺昭忠 杨新生(青岛医学院附属医院神经外科，青岛 266003)；王秋波 鲁迎年(青岛医学院免疫学教研室)
关键词：神经胶质瘤；脑；药物评价
青岛医学院学报990217 【摘要】 ①目的 探讨脑胶质瘤对化疗药物的敏感性，指导化疗药物的选择。②方法 采用四唑蓝快速比色(MTT)法,检测38例脑胶质瘤新鲜组织对8种化疗药物的敏感性。③结果 8种化疗药物对脑胶质瘤的抑制率差异有极显著性(F＝47.7，P<0.01)，其中双氯乙基亚硝脲、司莫司汀、洛莫司汀抑制率较高。与其他几种化疗药物比较差异有显著性(q＝8.69～14.31，6.09～11.74，5.43～9.13，P均<0.05)。④结论 双氯乙基亚硝脲、司莫司汀、洛莫司汀对脑胶质瘤具有明显的抑制作用。
中国图书馆分类法分类号 R735.1
, http://www.100md.com
STUDY OF THE SENSITIVITY OF B RAIN GLIOMA
CELLS TO SOME CHEMOTHERAPEUTIC DRUGS
He Zhaozhong, Wang Qiubo, Yang Xinsheng, et al
Department of Neurosurgery, The Affiliated Hospital
of Qingdao Medical College, Qingdao 266003
【ABSTRACT】 Objective To study the sensitivity of brain glioma cells to some chemotherapeutic drugs and to select the sensitive dru gs for individual patient. Methods The chemosensitivities of glioma cells in 38 patients to eight chemotherapeutic agents were determined by using a tetrazolium-based deco lorimetric assay (MTT assay). Results The inhibitory effects of eight chemotherapeutic agents t o brain glioma cells were different(F=47.7,P<0.01), with carmustine(BCNU), s emustine(MeCCNU), comustin(CCNU) having better inhibitory effect than other agen ts(q=8.69-14.31, 6.09-11.74,5.43-9.13, P<0.05). Conclusion BCNU, MeCCNU, CCNU had better inhibitory effects to br ain glioma cells and the results may be used for clinical reference in selecting chemotherapeutic drugs.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 glioma; brain; drug evaluation
1997年5月～1998年7月，我们采用四唑蓝快速比色(MTT)法,对38例脑胶质瘤新鲜组织进行了化疗药物敏感试验,以指导化疗药物的选择。
1 资料和方法
1.1 一般资料
38例病人中，男25例，女13例；年龄6～66岁。全部病人均行肿瘤切除术，并经病理检查证实为脑胶质瘤。其中星形细胞瘤Ⅰ～Ⅱ级5例，星形细胞瘤Ⅱ级11例，星形细胞瘤Ⅲ级12例，星形细胞瘤Ⅳ级3例，少突胶质细胞瘤3例，间变性室管膜细胞瘤4例。病人术前均未行放疗及化疗。
1.2 单细胞悬液的制备
无菌条件下将未电灼的肿瘤标本用Hank液漂洗2次，剪成约1mm×1mm大小组织块，然后置25g/L胰蛋白酶中消化，4℃搅拌过夜。细胞消化液经15目细胞筛过滤，用Hank液洗2次，制成单细胞悬液，用台盼蓝测试细胞活性，肿瘤细胞活性达95%以上，再用含体积分数为0.1的小牛血清的PRMI-1640培养液调整浓度为(1～5)×108/L.
, http://www.100md.com
1.3 化疗药物的选择
8种化疗药物分别为氟尿嘧啶(FU)、顺铂(DDP)、氨甲喋呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)、司莫司汀(MeCCNU)、洛莫司汀(CCNU)、双氯乙基亚硝脲(BCNU)、威猛-26(VM-26)，以上药物均用培养液配制，浓度按临床治疗剂量的血浆峰值计算。
1.4 MTT法
取上述细胞液0.1mL置96孔细胞培养板中预培养4h，每孔加入20μL化疗药物，每种药物2～3孔。对照组加PRMI-1640培养液。在37℃,体积分数为0.05的CO2培养箱中培养68h后，离心10min，吸去上清液，每孔加入MTT20μL(5g/L)，继续培养4h后，离心弃去上清液，每孔加入二甲亚砜(DMSO)20μL，使甲
彻底溶解，用490nm滤光片在自动酶标读数仪上比色，测出每孔吸光度(A)值。按下列公式计算化疗药物对肿瘤细胞的抑制率：, 百拇医药
抑制率＝(对照A值-加药A值)/对照A值×100%
1.5 统计学处理
结果用
±s表示。每种药物抑制率及不同个体间抑制率比较，采用配伍组设计的多个标本均数的方差分析，8种化疗药物间比较采用q检验。2 结果
8种化疗药物对脑胶质瘤细胞的抑制率差异有极显著性(F＝47.6，P<0.01)。其中BCNU，MeCCNU，CCNU平均抑制率较高，与其他几种化疗药物比较差异有显著性(q＝8.69～14.31，6.09～11.74，5.43～9.13，P均<0.05)。见表1.
表1 8种化疗药物对脑胶质瘤的抑制率(%,
±s) 药物, 百拇医药
n
抑制率
FU
38
24.1±7.4
DDP
38
28.1±6.6
MTX
38
17.3±9.3
MMC
38
, http://www.100md.com
20.7±7.2
BCNU
38
41.1±9.8
VM-26
38
30.3±8.4
CCNU
38
36.4±5.7
MeCCNU
38
38.9±6.5
, 百拇医药
3 讨论
化疗是综合治疗脑胶质瘤的重要方法之一，特别是对消灭手术后残留肿瘤细胞，防止肿瘤复发起十分重要的作用。然而，临床上相当一部分病人化疗效果不理想，以前一直强调是由于血-脑屏障的存在，药物不易进入肿瘤细胞，近年来的研究发现，脑胶质瘤化疗效果不理想有多方面的原因，除了胶质瘤本身对化疗药物耐药外，未能针对不同的肿瘤类型、不同的肿瘤个体选择敏感的药物也是一个重要原因〔1～3〕。因而进行肿瘤化学治疗敏感性、抗药性的检测和研究，对指导临床化疗药物的选择具有重要意义〔4〕。本试验采用MTT法检测了临床上常用的8种化疗药物对脑胶质瘤细胞的抑制率，结果发现8种药物对脑胶质瘤的抑制率是不同的。其中以BCNU，MeCCNU，CCNU抑制率较高，与其他几种化疗药物比较，差异有显著性。可见在化疗前进行化疗药物敏感性检测是十分必要的〔5，6〕。Kondo〔7〕报道了23例肿瘤病人，依据药物敏感性检测结果实施化疗，结果43.5%的病人肿瘤缩小50%以上。Furukawa〔8〕依据药物敏感性预测给140例肿瘤病人化疗，有效率高达88.6%.Vonhoff〔9〕给246例肿瘤病人作体外药物敏感试验，比较体外结果与临床反应之间的关系，结果临床有效与体外敏感的符合率为60%；临床无效与体外不敏感的符合率为85%.我们严格按照药敏预测的结果给病人实施了化疗，化疗后的确切效果有待于临床上进一步观察。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Pieters R,Huismans DR,Legva A,et al. Comparison of the rapid auto mated MTT-assay with a dye exclusion assay for chemosensitivity in childhood leukaemia. Br J Cancer, 1989,59:217
2 Campling BG,Pym J,Baker HM, et al. Chemosensitivity testing of small lung cancer using the MTT assay. Br J Cancer, 1991,63:75
3 李珊珊.恶性肿瘤化疗药物的体外敏感试验.癌症,1993,12(6):547
4 丁亚军.恶性肿瘤体外药物敏感性试验新进展.国外医学肿瘤学分册,1990,3:145
, 百拇医药
5 王皓.几种常用恶性肿瘤体外化疗药物敏感性预测法的临床应用评价.国外医学肿瘤学分册,1994,21(1):23
6 张胜本主编.肿瘤化学治疗敏感性与抗药性.成都:四川科学技术出版社,1995.55
7 Kondo T. High-sensitivity antitumor drug sensitivity testing. Onco logy, 1994,51(6):1711
8 Furukawa T. High in vitro-in vivo correlation of drug respon se using sponge-gel-supported three-dimensional histoculture and the MTT end point. Int J Cancer,1992,52:489
9 Vonhoff D. Prospective clinical trial of a human tumor cloni ng system. Cancer Res, 1983,43:1926
(1998-07-30收稿 1999-04-25修回), 百拇医药