茶多酚急性、慢性毒性实验研究☆
作者：宋小鸽 袁静 唐照亮 侯正明 陈全珠 章复清 余新欣
单位：安徽中医学院 合肥 230038
关键词：茶多酚；急性毒性实验；慢性毒性实验
安徽中医学院学报990232 摘要 目的：观察动物对茶多酚的急性和慢性的毒性反应。方法：小鼠分5组，剂量比值为1∶0.8，连续灌胃7d。按Bliss法计算茶多酚LD50。大鼠分对照组，茶多酚高、中、低剂量组(0.4g/kg.d-1、0.6g/kg.d-1和0.8g/kg.d-1)，连续灌胃90d。结果：茶多酚LD50为2.499g/kg。动物长期服用茶多酚未出现体重、血常规、肝肾功能及脏器组织的毒性变化。结论：茶多酚属低毒性，对大鼠0.8g/kg.d-1的剂量相当于成人用量的100倍以上，提示临床用药量是安全的。
, 百拇医药
中图法分类号 R965.3
ACUTE AND CHRONIC TOXICITY TEST OF TEA POLYPHENOLS
Song Xiaoge,Yuang Jing,Tang Zhaoliang,et al
(Anhui College of TCM,Hefei 230038)
ABSTRACT Objective:The study was to observe the acute and chronic toxicity of Tea Polyphenols(TP).Methods:the mice were divided into five groups and TP was given orally for 7 days.The method of Bliss was used to determine the LD50 of the TP.The rats was divided into control group,TP high dosage group,TP middle dosage group and low dosage group(0.4,0.6,0.8g/kg.d-1)to observe the chronic toxicity.Result:The LD50 of TP is 2.499g/kg.The rats have showed no toxicity reaction in weight,blood,the internal organs,liver and kidneys function after the using of the drug.Conclusion:The TP has low toxicity,the dosage of 0.8g/kg.d-1 in rat is equivalent to 100 times of the dosage used in clinic for an adult.It indicates that the clinical using of TP is safe.
, 百拇医药
KEY WORDS Tea polyphenols;Acute toxicity test;Chronic toxicity test
茶多酚是从茶叶中提取的多酚类复合体。有研究表明，茶多酚具有抗动脉硬化、抗肿瘤及降血脂等药理作用〔1〕。
对茶多酚的急性、慢性毒性实验研究尚未见报道，为此我们进行了茶多酚药物毒性的实验观察，现将结果报告如下。
1 实验材料
1.1 药品 茶多酚，淡棕色粉剂，由浙江省莫干山化工公司提供。符合中国农科院茶叶研究所制定的标准。含茶多酚>95%，水份<3%，杂质<5%。批号97011105。密闭干燥保存，使用时溶解于蒸馏水中。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重20±2g。Wistar大鼠，体重90±20g(9周龄)，由安徽医科大学实验动物中心提供。
, 百拇医药
2 急性毒性实验
2.1 方法 健康小鼠70只。随机分成5组，每组
14只，雌雄各半。给药前禁食12h，不禁水。通过预试找出最大致死量为5.7g/kg，最小致死量为1.9g/kg，按1∶0.8比例用蒸馏水等比稀释〔2〕。分别给5组小鼠一次性灌胃，体积为0.2ml/10g。灌胃后即刻观察动物进食、活动、毛发、粪便等行为学活动情况，连续7d。记录动物毒性反应情况和死亡动物分布。动物死亡后及时进行尸检，若肉眼观察异常时则进行病理检查。LD50测定方法采用Bliss法，经电脑统计结果〔3，4〕。
2.2 结果 给小鼠灌胃茶多酚后，部分动物先后出现四肢紫绀，呼吸短促，最后呼吸停止死亡。经解剖肉眼观察肝、肾、肺等内脏均未见明显异常改变。按Bliss法经电脑计算，测得茶多酚LD50为2.499g/kg(见表1)。LD50的95%可信限为2.43～2.56g/kg，相当于成人每天临床用药量的120倍以上。
, 百拇医药
表1 Bliss法测定茶多酚LD50 剂量
(g/kg)
动物数
(只)
死亡数
(只)
死亡率
(%)
LD50
(g/kg)
5.7
14
, 百拇医药
14
100.00
2.499
4.5
14
12
85.71
3.6
14
12
85.71
2.3
14
, http://www.100md.com
6
42.86
1.9
14
4
28.57
3 慢性毒性实验
3.1 方法 健康大鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，雌雄分笼饲养，每笼5只。茶多酚高剂量组按0.8g/kg.d-1给药，茶多酚中剂量组按 0.6g/kg.d-1给药，茶多酚低剂量组按0.4g/kg.d-1给药，对照组给等量蒸馏水。每天1次，连续灌胃90d。
, 百拇医药
3.2 指标 观察动物实验前后活动，毛发，粪便性状及进食量等情况。每周称1次体重，并按体重调整给药量。用药后24h每组取12只动物，断头取血检查血常规、肝肾功能等生化指标(剩余动物停药，继续饲养作可逆性观察2周)。系统尸解取脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑、子宫、睾丸、卵巢、附睾)称重，计算脏器系数，对脏器进行全面肉眼尸检，常规对心、肝、脾、肺、肾5个实质脏器进行病理组织学检查。
3.3 结果
3.3.1 一般指标 对照组和茶多酚各组大鼠在90d试验期内活动、饮食、大便和皮毛光泽等情况未见异常症状。各组动物进食量和体重经时变化基本一致，无明显异常(P>0.05)。
3.3.2 血液及生化指标 结果见表2。茶多酚各组与对照组相比，肝功能、肾功能、总胆固醇、红细胞计数、白细胞计数等均无显著差异(P>0.05)。
表2 茶多酚灌胃(90d)大鼠血液生化指标结果(n=14，±s) 检测项
, 百拇医药
对照组
茶多酚(小)
茶多酚(中)
茶多酚(大)
红细胞(×1012/L)
9.21±1.19
白细胞(×109/L)
10.48±1.57
12.40±3.00
14.51±5.26
14.30±3.46
, http://www.100md.com
血小板(×109/L)
465.10±117.30
464.5±31.4
558.1±22.30
480.3±56.50
血红蛋白(g/L)
132.5±13.90
150.6±4.10
132.5±13.90
135.0±8.00
总胆固醇(nmol/L)
, 百拇医药
1.93±0.24
1.42±0.27
1.58±0.23
1.50±0.23
总蛋白(g/L)
66.2±3.90
70.8±5.40
69.4±4.70
70.0±5.70
白蛋白(g/L)
33.30±1.40
45.10±2.60
, http://www.100md.com
42.00±5.20
39.20±3.20
球蛋白(g/L)
27.8±1.50
25.7±5.50
27.4±5.20
30.5±7.30
谷丙转氨酶(u/L)
0.35±0.04
0.29±0.04
0.36±0.09
0.33±0.07
, 百拇医药
尿素氮(mmol/L)
4.44±0.67
4.32±0.86
5.57±1.21
5.19±1.11
肌 酐(μmol/L)
125.53±8.84
134.37±18.56
118.45±46.00
136.14±21.22
3.3.3 脏器重量和脏器系数 结果见表3。各组动物用药期及恢复期体重、脏器重量差异不显著，其脏器系数(g/100g体重或mg/100g体重)亦无显著差异(P>0.05)表3 茶多酚灌胃(90d)大鼠脏器重量(n=14，±s) 检测项
, http://www.100md.com
对照组
茶多酚(小)
茶多酚(中)
茶多酚(大)
心脏(g)
0.32±0.07
0.35±0.04
0.35±0.05
0.33±0.06
肝脏(g)
4.10±0.54
3.08±0.50
, 百拇医药
3.24±0.47
3.08±0.37
脾脏(g)
0.26±0.08
0.19±0.04
0.21±0.04
0.25±0.05
肺脏(g)
0.76±0.18
0.73±0.18
0.65±0.13
0.60±0.13
, http://www.100md.com
肾脏(g)
0.69±0.06
0.66±0.03
0.75±0.06
0.70±0.05
脑 (g)
0.56±0.04
0.53±0.08
0.49±0.07
0.51±0.07
睾丸(g)
0.93±0.12
, 百拇医药
0.99±0.01
1.04±0.09
0.01±0.15
子宫(g)
0.22±0.04
0.23±0.06
0.25±0.10
0.22±0.070
卵巢(mg)
46.00±10.0
48.80±4.44
47.60±5.10
, http://www.100md.com
48.00±1.0
体睾(mg)
0.60±0.04
0.62±0.04
0.62±0.08
0.43±0.11
3.3.4 解剖和病理学检查 放血处死各组动物后，尸解对脏器进行肉眼观察未发现异常现象。常规对心、肝、脾、肺、肾等实质脏器进行病理组织学检查〔5〕。结果表明，茶多酚各组上述组织结构未发现毒性损害。
4 讨论
按Bliss法算得茶多酚LD50为2.499g/kg。慢性毒性实验表明，大鼠口服茶多酚0.4g/kg.d-1、0.6g/kg.d-1和0.8g/kg.d-1，共90天，未出见毒性反应及动物死亡的情况。动物体重增加，血常规和生化检查、脏器重量和脏器系数等与蒸馏水对照相比均无明显差异。病理学检查脏器组织未见毒性损害。提示茶多酚在0.8g/kg.d-1剂量下对大鼠的生长发育、血常规、肝肾功能、脏器组织均无明显毒副作用。国内对茶多酚临床成人推荐用量为 0.6g/kg.d-1(0.2g/次，3次/d)，4周为1个疗程。本实验表明，茶多酚属低毒性，对大鼠0.8 g/kg.d-1的无毒剂量相当于成人常用量的(0.08g/kg.d-1)100倍以上。故可以认为临床用药量是安全的。
, 百拇医药
☆安徽省自然科学基金资助项目(95-医-19)，国家中医药管理局项目(95B3050)
作者简介：宋小鸽，女，45岁，副研究员
参考文献
1 陈为钧，万圣勤.茶多酚药效研究概况.中草药，1993；24(9)：493
2 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：528
3 上海第一医学院卫生统计教研组.医学统计方法.上海：上海科学术出版社，1984：209
4 中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编.1993：198
5 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南.1994：206
(1998-11-26收稿), 百拇医药
单位：安徽中医学院 合肥 230038
关键词：茶多酚；急性毒性实验；慢性毒性实验
安徽中医学院学报990232 摘要 目的：观察动物对茶多酚的急性和慢性的毒性反应。方法：小鼠分5组，剂量比值为1∶0.8，连续灌胃7d。按Bliss法计算茶多酚LD50。大鼠分对照组，茶多酚高、中、低剂量组(0.4g/kg.d-1、0.6g/kg.d-1和0.8g/kg.d-1)，连续灌胃90d。结果：茶多酚LD50为2.499g/kg。动物长期服用茶多酚未出现体重、血常规、肝肾功能及脏器组织的毒性变化。结论：茶多酚属低毒性，对大鼠0.8g/kg.d-1的剂量相当于成人用量的100倍以上，提示临床用药量是安全的。
, 百拇医药
中图法分类号 R965.3
ACUTE AND CHRONIC TOXICITY TEST OF TEA POLYPHENOLS
Song Xiaoge,Yuang Jing,Tang Zhaoliang,et al
(Anhui College of TCM,Hefei 230038)
ABSTRACT Objective:The study was to observe the acute and chronic toxicity of Tea Polyphenols(TP).Methods:the mice were divided into five groups and TP was given orally for 7 days.The method of Bliss was used to determine the LD50 of the TP.The rats was divided into control group,TP high dosage group,TP middle dosage group and low dosage group(0.4,0.6,0.8g/kg.d-1)to observe the chronic toxicity.Result:The LD50 of TP is 2.499g/kg.The rats have showed no toxicity reaction in weight,blood,the internal organs,liver and kidneys function after the using of the drug.Conclusion:The TP has low toxicity,the dosage of 0.8g/kg.d-1 in rat is equivalent to 100 times of the dosage used in clinic for an adult.It indicates that the clinical using of TP is safe.
, 百拇医药
KEY WORDS Tea polyphenols;Acute toxicity test;Chronic toxicity test
茶多酚是从茶叶中提取的多酚类复合体。有研究表明，茶多酚具有抗动脉硬化、抗肿瘤及降血脂等药理作用〔1〕。
对茶多酚的急性、慢性毒性实验研究尚未见报道，为此我们进行了茶多酚药物毒性的实验观察，现将结果报告如下。
1 实验材料
1.1 药品 茶多酚，淡棕色粉剂，由浙江省莫干山化工公司提供。符合中国农科院茶叶研究所制定的标准。含茶多酚>95%，水份<3%，杂质<5%。批号97011105。密闭干燥保存，使用时溶解于蒸馏水中。
1.2 动物 昆明种小鼠，体重20±2g。Wistar大鼠，体重90±20g(9周龄)，由安徽医科大学实验动物中心提供。
, 百拇医药
2 急性毒性实验
2.1 方法 健康小鼠70只。随机分成5组，每组
14只，雌雄各半。给药前禁食12h，不禁水。通过预试找出最大致死量为5.7g/kg，最小致死量为1.9g/kg，按1∶0.8比例用蒸馏水等比稀释〔2〕。分别给5组小鼠一次性灌胃，体积为0.2ml/10g。灌胃后即刻观察动物进食、活动、毛发、粪便等行为学活动情况，连续7d。记录动物毒性反应情况和死亡动物分布。动物死亡后及时进行尸检，若肉眼观察异常时则进行病理检查。LD50测定方法采用Bliss法，经电脑统计结果〔3，4〕。
2.2 结果 给小鼠灌胃茶多酚后，部分动物先后出现四肢紫绀，呼吸短促，最后呼吸停止死亡。经解剖肉眼观察肝、肾、肺等内脏均未见明显异常改变。按Bliss法经电脑计算，测得茶多酚LD50为2.499g/kg(见表1)。LD50的95%可信限为2.43～2.56g/kg，相当于成人每天临床用药量的120倍以上。
, 百拇医药
表1 Bliss法测定茶多酚LD50 剂量
(g/kg)
动物数
(只)
死亡数
(只)
死亡率
(%)
LD50
(g/kg)
5.7
14
, 百拇医药
14
100.00
2.499
4.5
14
12
85.71
3.6
14
12
85.71
2.3
14
, http://www.100md.com
6
42.86
1.9
14
4
28.57
3 慢性毒性实验
3.1 方法 健康大鼠80只，雌雄各半，随机分为4组，每组20只，雌雄分笼饲养，每笼5只。茶多酚高剂量组按0.8g/kg.d-1给药，茶多酚中剂量组按 0.6g/kg.d-1给药，茶多酚低剂量组按0.4g/kg.d-1给药，对照组给等量蒸馏水。每天1次，连续灌胃90d。
, 百拇医药
3.2 指标 观察动物实验前后活动，毛发，粪便性状及进食量等情况。每周称1次体重，并按体重调整给药量。用药后24h每组取12只动物，断头取血检查血常规、肝肾功能等生化指标(剩余动物停药，继续饲养作可逆性观察2周)。系统尸解取脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑、子宫、睾丸、卵巢、附睾)称重，计算脏器系数，对脏器进行全面肉眼尸检，常规对心、肝、脾、肺、肾5个实质脏器进行病理组织学检查。
3.3 结果
3.3.1 一般指标 对照组和茶多酚各组大鼠在90d试验期内活动、饮食、大便和皮毛光泽等情况未见异常症状。各组动物进食量和体重经时变化基本一致，无明显异常(P>0.05)。
3.3.2 血液及生化指标 结果见表2。茶多酚各组与对照组相比，肝功能、肾功能、总胆固醇、红细胞计数、白细胞计数等均无显著差异(P>0.05)。
表2 茶多酚灌胃(90d)大鼠血液生化指标结果(n=14，±s) 检测项
, 百拇医药
对照组
茶多酚(小)
茶多酚(中)
茶多酚(大)
红细胞(×1012/L)
9.21±1.19
白细胞(×109/L)
10.48±1.57
12.40±3.00
14.51±5.26
14.30±3.46
, http://www.100md.com
血小板(×109/L)
465.10±117.30
464.5±31.4
558.1±22.30
480.3±56.50
血红蛋白(g/L)
132.5±13.90
150.6±4.10
132.5±13.90
135.0±8.00
总胆固醇(nmol/L)
, 百拇医药
1.93±0.24
1.42±0.27
1.58±0.23
1.50±0.23
总蛋白(g/L)
66.2±3.90
70.8±5.40
69.4±4.70
70.0±5.70
白蛋白(g/L)
33.30±1.40
45.10±2.60
, http://www.100md.com
42.00±5.20
39.20±3.20
球蛋白(g/L)
27.8±1.50
25.7±5.50
27.4±5.20
30.5±7.30
谷丙转氨酶(u/L)
0.35±0.04
0.29±0.04
0.36±0.09
0.33±0.07
, 百拇医药
尿素氮(mmol/L)
4.44±0.67
4.32±0.86
5.57±1.21
5.19±1.11
肌 酐(μmol/L)
125.53±8.84
134.37±18.56
118.45±46.00
136.14±21.22
3.3.3 脏器重量和脏器系数 结果见表3。各组动物用药期及恢复期体重、脏器重量差异不显著，其脏器系数(g/100g体重或mg/100g体重)亦无显著差异(P>0.05)表3 茶多酚灌胃(90d)大鼠脏器重量(n=14，±s) 检测项
, http://www.100md.com
对照组
茶多酚(小)
茶多酚(中)
茶多酚(大)
心脏(g)
0.32±0.07
0.35±0.04
0.35±0.05
0.33±0.06
肝脏(g)
4.10±0.54
3.08±0.50
, 百拇医药
3.24±0.47
3.08±0.37
脾脏(g)
0.26±0.08
0.19±0.04
0.21±0.04
0.25±0.05
肺脏(g)
0.76±0.18
0.73±0.18
0.65±0.13
0.60±0.13
, http://www.100md.com
肾脏(g)
0.69±0.06
0.66±0.03
0.75±0.06
0.70±0.05
脑 (g)
0.56±0.04
0.53±0.08
0.49±0.07
0.51±0.07
睾丸(g)
0.93±0.12
, 百拇医药
0.99±0.01
1.04±0.09
0.01±0.15
子宫(g)
0.22±0.04
0.23±0.06
0.25±0.10
0.22±0.070
卵巢(mg)
46.00±10.0
48.80±4.44
47.60±5.10
, http://www.100md.com
48.00±1.0
体睾(mg)
0.60±0.04
0.62±0.04
0.62±0.08
0.43±0.11
3.3.4 解剖和病理学检查 放血处死各组动物后，尸解对脏器进行肉眼观察未发现异常现象。常规对心、肝、脾、肺、肾等实质脏器进行病理组织学检查〔5〕。结果表明，茶多酚各组上述组织结构未发现毒性损害。
4 讨论
按Bliss法算得茶多酚LD50为2.499g/kg。慢性毒性实验表明，大鼠口服茶多酚0.4g/kg.d-1、0.6g/kg.d-1和0.8g/kg.d-1，共90天，未出见毒性反应及动物死亡的情况。动物体重增加，血常规和生化检查、脏器重量和脏器系数等与蒸馏水对照相比均无明显差异。病理学检查脏器组织未见毒性损害。提示茶多酚在0.8g/kg.d-1剂量下对大鼠的生长发育、血常规、肝肾功能、脏器组织均无明显毒副作用。国内对茶多酚临床成人推荐用量为 0.6g/kg.d-1(0.2g/次，3次/d)，4周为1个疗程。本实验表明，茶多酚属低毒性，对大鼠0.8 g/kg.d-1的无毒剂量相当于成人常用量的(0.08g/kg.d-1)100倍以上。故可以认为临床用药量是安全的。
, 百拇医药
☆安徽省自然科学基金资助项目(95-医-19)，国家中医药管理局项目(95B3050)
作者简介：宋小鸽，女，45岁，副研究员
参考文献
1 陈为钧，万圣勤.茶多酚药效研究概况.中草药，1993；24(9)：493
2 李仪奎.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：528
3 上海第一医学院卫生统计教研组.医学统计方法.上海：上海科学术出版社，1984：209
4 中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编.1993：198
5 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南.1994：206
(1998-11-26收稿), 百拇医药