甲状腺乳头状及滤泡状癌的疗效分析
作者：赵勇 张伟 郎锦义
单位：赵勇 张伟 郎锦义(四川省肿瘤医院放疗科(成都市，610041))
关键词：甲状腺肿瘤/外科手术；放射疗法；疗效
癌症/990219
【摘要】目的：探讨影响NPCp53蛋白表达的因素、p53和mdm2蛋白在NPC发生中的变化和意义。方法：采用免疫组化法检测p53和mdm2蛋白、Southern杂交法检测p53基因结构。结果：31例p53蛋白阳性的NPC中10例(32.3%)有p53基因结构改变；在2.8/6kb(4例)与8kb(6例)HindⅢ杂交片段者之间，mdm2蛋白表达有显著差异(P=0.0238)。无p53基因结构改变的21例NPC中12例mdm2蛋白表达阳性和9例阴性。p53和mdm2蛋白表达在中-重度异型性改变(32例)与轻度异型性改变(21例)之间，或与NPC(34例)之间均有显著差异(P<0.01)；两蛋白同时表达率在中-重度异型性改变时从“0”骤升至50.0%，非常接近NPC(54.3%)。结论：p53基因结构改变和mdm2蛋白过度表达是影响NPCp53蛋白过度表达的两个因素；不同类型p53基因结构改变所产生的p53蛋白激活MDM2的功能并不相同；p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两蛋白协同作用，可能在NPC发生中起重要作用。
, 百拇医药
中图号：R361.2；R739.63 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)02-0176-04
The relationship between p53 protein overexpression and
p53 gene structural abnormality or mdm2 protein
overexpression in nasopharyngeal carcinoma (NPC)
and their significance during NPC genesis
LI Jin-tian LONG Jiang-bin DENG Man-quan, et al
, 百拇医药
Cancer Center, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060,China
【Abstract】 Purposes： To explore the influencing factors on p53 protein expression in NPC, the changes and significance of p53 and mdm2 protein expression during NPC genesis. Methods：： To assay p53 and mdm2 proteins by immunohistochemical technique and p53 gene structure by Southern blot technique in primary NPC biopies. Results：： p53 gene structural abnormality was found in 10 of 31 (32.3% ) NPCs with p53 protein-positivity. In these 10 cases, there was a significant difference statistically in mdm2 protein expression between 2.8/6 kb (4 cases) and 8 kb (6 cases) Hind Ⅲ fragment group (p=0.0238). In those 21 cases without p53 gene structural abnormality, mdm2 protein expression was positive in 12 cases and negative in 9 cases. Otherwise, there was a significant statistical difference in p53 or mdm2 protein expression between moderate-severe dysplasia (32 cases) and mild dysplasia (21 cases) or between NPC (34 cases) (P<0.01, respectively). The simultaneous expression rate of both proteins was rapidly elevated from 0 to 50.0% in moderate-severe dysplasia, very closing to 54.3% in NPC. Conclusion：： The p53 gene structural abnormality and mdm2 protein overexpression might be two factors causing p53 protein overexpresion in NPC. The function of p53 proteins produced by various structural anormality of p53 gene might be different in activating MDM2. The overexpression of p53 or mdm2 protein, particularly both cooperation, might play an important role during NPC genesis.
, http://www.100md.com
Key words： Nasopharyngeal neoplasms; p53 gene; p53 protein; mdm2 protein
鼻咽癌(NPC)的p53蛋白阳性率80%以上[1]，基因突变率差别很大[2，3]。通常认为p53基因突变率低而蛋白表达率高可能是mdm2蛋白或EB病毒蛋白作用的结果[4]。确切原因尚待进一步证实。为此，本实验对p53蛋白阳性的NPC组织同时进行p53基因结构和mdm2蛋白检测，探讨后两者与p53蛋白表达的关系；及p53和mdm2蛋白在NPC发生中的作用。
1 材料和方法
1.1 材料
收集本中心鼻咽活检标本，作p53蛋白检测阳性的初发鼻咽低分化癌组织34例，同时作p53基因结构和mdm2蛋白检测，其中3例因组织量不足未作基因检测。34例EB病毒血清学检测均阳性。
, 百拇医药
1.2 免疫组化检测
采用免疫组化LsAB法检测组织切片的p53和mdm2蛋白，一抗分别为Dako-p53(Do-7)(Dako公司产)和MDM2(Ab-1)(IF2)(oncogen science公司产)的单克隆抗体，稀释度分别为1∶160和1∶100。微波炉预处理。检测时分别设阳性和阴性对照。两蛋白分别定位于细胞核(图1，2)，当染色呈深棕色、阳性细胞数占60%以上(p53蛋白)或50%以上(mdm2蛋白)为阳性Ⅲ级；当染色呈淡棕色、阳性细胞数占30%以下(p53蛋白)或20%以下(mdm2蛋白)为阳性Ⅰ级；介乎两者间为阳性Ⅱ级；无明确阳性染色为阴性。
, 百拇医药
图1 p53蛋白定位胞核，阳性细胞呈棕色反应。400×
图2 mdm2蛋白定位胞核，阳性细胞呈棕色反应。400×
1.3 Southern杂交检测
采用标准方法，将肿瘤压碎后蛋白酶K消化，酚氯仿抽提。10μgDNA经EcoRI或HindⅢ酶消化，0.85%琼脂糖凝胶电泳，硝酸纤维膜转移。杂交探针为pC53-SN重组质粒分离的人野生型p53基因1.8cDNA，32P标记。
1.4 NPC发生过程各阶段的划分
正常上皮、单纯性改变(增生和化生)、异型性改变(增生和化生)和癌，异型性改变进一步划分为轻、中、重三级[5]
, 百拇医药 1.5 统计学分析
采用χ2检验(包括Fisher精确检验法)
2 结果
2.1 p53蛋白阳性NPC的p53基因结构状况(表1)
表1 NPC的p53基因结构、p53蛋白和mdm2蛋白的状况 p53基因结构
例数
p53蛋白表达(例)
mdm2蛋白表达(例)
Ⅲ级
Ⅱ级
, 百拇医药
Ⅰ级
Ⅲ级
Ⅱ级
Ⅰ级
-
异常杂交片段①
2.8kb
2
2
2
6kb
, 百拇医药
2
1
1
1
1
8kb
6
2
2
2
1
1
4
, 百拇医药
无异常杂交片段②
21
15
5
1
2
8
2
9
统计学分析*+与
, 百拇医药
①与②
P=0.466
P>0.05
P=0.0238
P>0.05
*采用Fisher精确检验法
31例p53蛋白阳性NPC中，出现p53基因结构异常(图3)占10例(32.3%)，包括2.8kb(2例)、6kb(2例)和8kb(6例)的HindⅢ异常杂交片段。出现2.8/6kb片段的4例，p53蛋白均呈阳性Ⅲ/Ⅱ级表达；出现8kb片段的6例，p53蛋白表达水平不一；但两组之间并无统计学的显著性差异。无异常杂交片段的21例中，20例的p53蛋白呈阳性Ⅲ/Ⅱ级，与出现异常杂交片段者比较，亦无统计学的显著性差异。结果表明p53基因结构改变只是NPCp53蛋白过度表达的原因之一，非p53基因结构改变的因素同样可以引起p53蛋白过度表达。
, http://www.100md.com
图3 p53基因印迹杂交放射自显影图，Southern杂交法检测NPC活检组织p53基因结构。
箭头指示HindⅢ片段所见的异常杂交信号
(8kb和2.8kb)，C198：正常人血液标本，398T、334T、444T和448T：NPC活检标本
2.2 p53蛋白阳性NPC的mdm2蛋白表达(表1)
10例p53基因结构异常的NPC中，出现2.8/6kb片段的4例，mdm2蛋白亦均呈阳性Ⅲ/Ⅱ级；出现8kb片段的6例，有4例为mdm2蛋白阴性；两组之间有统计学的显著性差异。结果表明p53基因结构改变虽然可以引起p53蛋白过度表达，但这些p53蛋白激活MDM2的功能可能是不相同的。
, 百拇医药
21例p53基因结构无改变的NPC中，12例呈mdm2蛋白阳性(其中10例阳性Ⅲ/Ⅱ级)和9例阴性。结果表明在p53基因结构无改变的NPC，mdm2蛋白过度表达可能与部分肿瘤的p53蛋白过度表达有关，而mdm2蛋白阴性的肿瘤则可能是其它因素所致。
2.3 p53和mdm2蛋白在NPC发生各阶段的表达
34例NPC的癌旁上皮存在癌发生过程各阶段病变和正常上皮。比较p53、mdm2蛋白和两蛋白同时在各阶段病变的表达(表2)，正常上皮和单纯性改变上皮的p53或mdm2蛋白均阴性；随病情加重，两蛋白表达亦增高，在中-重度异型性改变与轻度异型性改变之间或与NPC之间均存在统计学的显著性差异。又两蛋白同时表达仅见于中-重度异型性改变和NPC，同时表达率均在50%或以上。结果表明p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两蛋白的协同作用可能在相当部分NPC发生中起重要作用。
, 百拇医药
表2 p53、mdm2蛋白及两蛋白同时在NPC发生过程各阶段病变上皮的表达 上皮病变
例数
p53蛋白表达(%)
mdm2蛋白表达(%)
p53、mdm2同时表达(%)
Ⅲ级
Ⅱ级
Ⅰ级
-
Ⅲ级
Ⅱ级
, 百拇医药
Ⅰ级
-
NPC①
34
21(61.77)
10(29.41)
3(8.82)
6(17.65)
10(29.41)
3(8.82)
15(44.12)
19(54.30)
, 百拇医药
异型性改变
重-中度②
32
4(12.50)
19(59.38)
8(25.00)
1(3.12)
3(9.38)
13(40.62)
16(50.00)
16(50.00)
轻度③
, 百拇医药
21
1(4.76)
10(47.62)
10(47.62)
21(100.00)
0
单纯性改变及
正常上皮④
16
16(100.00)
16(100.00)
0
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统计学分析
①与②
②与③
③与④
①与②
②与③
①与②
②与③
χ2
17.58
15.65
11.93
16.56
, http://www.100md.com
15.04
0.12
7.11
P
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
>0.75
<0.01
*包括10例重度异型性改变和22例中度异型性改变
, 百拇医药
3 讨论
NPCp53基因突变的问题颇有争议。Sun等显示NPCp53基因exon5-8突变率极低[2]。陈氏却发现23例NPC中15例有exon8点突变[3]。本实验31例p53蛋白阳性的NPC中10例有异常杂交片段，说明p53基因结构异常在NPC并不少见。
mdm2基因第一内含子中存在p53依赖性启动子，激活态的p53蛋白与其内的两个串列成分结合，则激活mdm2转录与表达[6]。本实验有p53基因结构改变者均呈p53蛋白过度表达，其中2.8/6kb片段组同时有mdm2蛋白阳性Ⅲ/Ⅱ级，而8kb片段组却有2/3病例mdm2蛋白阴性。似乎说明前者基因改变所产生的p53蛋白，激活mdm2的功能并未受明显的影响；而后者则受明显的抑制。Lianes在膀胱癌研究亦有类同结果[7]。当然，不能排除非p53依赖性通道激活mdm2的可能。但若巧合，难解释。
, 百拇医药
mdm2蛋白分子中存在p53蛋白的结合部位，当两蛋白形成复合物时，p53蛋白被灭活，稳定性增中且造成过度表达。本实验无p53基因结构改变的21例p53蛋白阳性NPC中，12例mdm2蛋白阳性(其中10例阳性Ⅲ/Ⅱ级)和9例阴性。说明mdm2蛋白过度表达有可能是造成部分NPC无p53基因结构改变而p53蛋白过度表达的原因之一。
多种病毒编码蛋白(腺病毒E1B、SV40大丁抗原、HPVE6等)能与p53蛋白形成复合物，作用与mdm2蛋白类似[8]。Szekely已证实EBNA-5蛋白能与p53蛋白形成复合物[9]，鼻咽低分化癌细胞内普遍存在编码EBNA-5的EB病毒DNABamHI-W片段[10]。本实验病例EB病毒血清学检测均阳性，说明均有EB病毒感染。其中无p53基因结构改变且mdm2蛋白阴性的NPC，若体内EB病毒编码蛋白(例如EBNA-5)与非突变型p53蛋白结合，是有可能引起p53蛋白过度表达的。
, 百拇医药
肿瘤的发生是多基因/因素、多步骤的演进过程[11]。p53和mdm2蛋白表达随鼻咽上皮病变加重而升高，尤其在中-重度异型性改变，两蛋白表达均与轻度异型性改变有显著差异，且两蛋白同时表达率骤升至50.0%，与NPC接近。说明p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两者协同作用可能在相当部分NPC的发生过程中起重要作用。
参考文献
1 李锦添，邓满全，吴荫棠，等.免疫组化法检测鼻咽病变组织中PCNA和p53的意义〔J〕.癌症，1995，14：99.
2 Sun Y, Hegamyer G, Cheng YJ, et al. An infrequent point mutation of the p53 gene in human nesopharyngeal carcinoma〔J〕. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89:6516.
, http://www.100md.com
3 陈仁武，朱丹，殷蔚伯，等.p53基因在鼻咽癌中的热点突变〔J〕.中华肿瘤杂志，1995，17(6)：401.
4 Sheu LF, Chen A, Tseng HH, et al. Expression of p53 protein in nasopharyngeal carcinoma, J Pathol, 1994, 172:294.
5 李锦添，宗永生.上皮异型性增生和鳞状化生在鼻咽癌组织发生中关系的探讨〔J〕.中华病理学杂志，1986，15(1)：43.
6 Zauberman A, Flusberg D, Haupt Y, et al. A functional responsive p53-responsive intronic promoter is contained within the hu mann mdm gene〔J〕. Nucleic Acids Res, 1995, 23(14):2584.
, 百拇医药
7 Lianes P, Orlow I, Zhang ZF, et al. Altered patterns of MDM and TP53 expression in human bladder cancer〔J〕. J Natl Cancer Inst, 1994, 86:1325.
8 Cordon-Cardo C. Mutation of cell cycel regulators, Biological and clinical implications for human neoplasia〔J〕. Am J Pathol, 1995, 147(3):545.
9 Szekely L, Selivanova G, Magnusson KP, et al. EBNA-5, an Epstein-Barr virus encoded nuclear antigen, bind to the retinoblastoma and p53 protein〔J〕. Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90:5455.
10 李锦添，黄宝珍，罗天锡.EB病毒DNA在鼻咽病变中的表现〔J〕.癌症，1993，12(1)：36.
11 Hunter T. Coperation between oncogenes〔J〕. Cell, 1991, 64:249.
收稿日期：1998-04-09；修回日期：1998-06-29, 百拇医药
单位：赵勇 张伟 郎锦义(四川省肿瘤医院放疗科(成都市，610041))
关键词：甲状腺肿瘤/外科手术；放射疗法；疗效
癌症/990219
【摘要】目的：探讨影响NPCp53蛋白表达的因素、p53和mdm2蛋白在NPC发生中的变化和意义。方法：采用免疫组化法检测p53和mdm2蛋白、Southern杂交法检测p53基因结构。结果：31例p53蛋白阳性的NPC中10例(32.3%)有p53基因结构改变；在2.8/6kb(4例)与8kb(6例)HindⅢ杂交片段者之间，mdm2蛋白表达有显著差异(P=0.0238)。无p53基因结构改变的21例NPC中12例mdm2蛋白表达阳性和9例阴性。p53和mdm2蛋白表达在中-重度异型性改变(32例)与轻度异型性改变(21例)之间，或与NPC(34例)之间均有显著差异(P<0.01)；两蛋白同时表达率在中-重度异型性改变时从“0”骤升至50.0%，非常接近NPC(54.3%)。结论：p53基因结构改变和mdm2蛋白过度表达是影响NPCp53蛋白过度表达的两个因素；不同类型p53基因结构改变所产生的p53蛋白激活MDM2的功能并不相同；p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两蛋白协同作用，可能在NPC发生中起重要作用。
, 百拇医药
中图号：R361.2；R739.63 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)02-0176-04
The relationship between p53 protein overexpression and
p53 gene structural abnormality or mdm2 protein
overexpression in nasopharyngeal carcinoma (NPC)
and their significance during NPC genesis
LI Jin-tian LONG Jiang-bin DENG Man-quan, et al
, 百拇医药
Cancer Center, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060,China
【Abstract】 Purposes： To explore the influencing factors on p53 protein expression in NPC, the changes and significance of p53 and mdm2 protein expression during NPC genesis. Methods：： To assay p53 and mdm2 proteins by immunohistochemical technique and p53 gene structure by Southern blot technique in primary NPC biopies. Results：： p53 gene structural abnormality was found in 10 of 31 (32.3% ) NPCs with p53 protein-positivity. In these 10 cases, there was a significant difference statistically in mdm2 protein expression between 2.8/6 kb (4 cases) and 8 kb (6 cases) Hind Ⅲ fragment group (p=0.0238). In those 21 cases without p53 gene structural abnormality, mdm2 protein expression was positive in 12 cases and negative in 9 cases. Otherwise, there was a significant statistical difference in p53 or mdm2 protein expression between moderate-severe dysplasia (32 cases) and mild dysplasia (21 cases) or between NPC (34 cases) (P<0.01, respectively). The simultaneous expression rate of both proteins was rapidly elevated from 0 to 50.0% in moderate-severe dysplasia, very closing to 54.3% in NPC. Conclusion：： The p53 gene structural abnormality and mdm2 protein overexpression might be two factors causing p53 protein overexpresion in NPC. The function of p53 proteins produced by various structural anormality of p53 gene might be different in activating MDM2. The overexpression of p53 or mdm2 protein, particularly both cooperation, might play an important role during NPC genesis.
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Key words： Nasopharyngeal neoplasms; p53 gene; p53 protein; mdm2 protein
鼻咽癌(NPC)的p53蛋白阳性率80%以上[1]，基因突变率差别很大[2，3]。通常认为p53基因突变率低而蛋白表达率高可能是mdm2蛋白或EB病毒蛋白作用的结果[4]。确切原因尚待进一步证实。为此，本实验对p53蛋白阳性的NPC组织同时进行p53基因结构和mdm2蛋白检测，探讨后两者与p53蛋白表达的关系；及p53和mdm2蛋白在NPC发生中的作用。
1 材料和方法
1.1 材料
收集本中心鼻咽活检标本，作p53蛋白检测阳性的初发鼻咽低分化癌组织34例，同时作p53基因结构和mdm2蛋白检测，其中3例因组织量不足未作基因检测。34例EB病毒血清学检测均阳性。
, 百拇医药
1.2 免疫组化检测
采用免疫组化LsAB法检测组织切片的p53和mdm2蛋白，一抗分别为Dako-p53(Do-7)(Dako公司产)和MDM2(Ab-1)(IF2)(oncogen science公司产)的单克隆抗体，稀释度分别为1∶160和1∶100。微波炉预处理。检测时分别设阳性和阴性对照。两蛋白分别定位于细胞核(图1，2)，当染色呈深棕色、阳性细胞数占60%以上(p53蛋白)或50%以上(mdm2蛋白)为阳性Ⅲ级；当染色呈淡棕色、阳性细胞数占30%以下(p53蛋白)或20%以下(mdm2蛋白)为阳性Ⅰ级；介乎两者间为阳性Ⅱ级；无明确阳性染色为阴性。
, 百拇医药
图1 p53蛋白定位胞核，阳性细胞呈棕色反应。400×
图2 mdm2蛋白定位胞核，阳性细胞呈棕色反应。400×
1.3 Southern杂交检测
采用标准方法，将肿瘤压碎后蛋白酶K消化，酚氯仿抽提。10μgDNA经EcoRI或HindⅢ酶消化，0.85%琼脂糖凝胶电泳，硝酸纤维膜转移。杂交探针为pC53-SN重组质粒分离的人野生型p53基因1.8cDNA，32P标记。
1.4 NPC发生过程各阶段的划分
正常上皮、单纯性改变(增生和化生)、异型性改变(增生和化生)和癌，异型性改变进一步划分为轻、中、重三级[5]
, 百拇医药 1.5 统计学分析
采用χ2检验(包括Fisher精确检验法)
2 结果
2.1 p53蛋白阳性NPC的p53基因结构状况(表1)
表1 NPC的p53基因结构、p53蛋白和mdm2蛋白的状况 p53基因结构
例数
p53蛋白表达(例)
mdm2蛋白表达(例)
Ⅲ级
Ⅱ级
, 百拇医药
Ⅰ级
Ⅲ级
Ⅱ级
Ⅰ级
-
异常杂交片段①
2.8kb
2
2
2
6kb
, 百拇医药
2
1
1
1
1
8kb
6
2
2
2
1
1
4
, 百拇医药
无异常杂交片段②
21
15
5
1
2
8
2
9
统计学分析*
+与, 百拇医药
①与②
P=0.466
P>0.05
P=0.0238
P>0.05
*采用Fisher精确检验法
31例p53蛋白阳性NPC中，出现p53基因结构异常(图3)占10例(32.3%)，包括2.8kb(2例)、6kb(2例)和8kb(6例)的HindⅢ异常杂交片段。出现2.8/6kb片段的4例，p53蛋白均呈阳性Ⅲ/Ⅱ级表达；出现8kb片段的6例，p53蛋白表达水平不一；但两组之间并无统计学的显著性差异。无异常杂交片段的21例中，20例的p53蛋白呈阳性Ⅲ/Ⅱ级，与出现异常杂交片段者比较，亦无统计学的显著性差异。结果表明p53基因结构改变只是NPCp53蛋白过度表达的原因之一，非p53基因结构改变的因素同样可以引起p53蛋白过度表达。
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图3 p53基因印迹杂交放射自显影图，Southern杂交法检测NPC活检组织p53基因结构。
箭头指示HindⅢ片段所见的异常杂交信号
(8kb和2.8kb)，C198：正常人血液标本，398T、334T、444T和448T：NPC活检标本
2.2 p53蛋白阳性NPC的mdm2蛋白表达(表1)
10例p53基因结构异常的NPC中，出现2.8/6kb片段的4例，mdm2蛋白亦均呈阳性Ⅲ/Ⅱ级；出现8kb片段的6例，有4例为mdm2蛋白阴性；两组之间有统计学的显著性差异。结果表明p53基因结构改变虽然可以引起p53蛋白过度表达，但这些p53蛋白激活MDM2的功能可能是不相同的。
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21例p53基因结构无改变的NPC中，12例呈mdm2蛋白阳性(其中10例阳性Ⅲ/Ⅱ级)和9例阴性。结果表明在p53基因结构无改变的NPC，mdm2蛋白过度表达可能与部分肿瘤的p53蛋白过度表达有关，而mdm2蛋白阴性的肿瘤则可能是其它因素所致。
2.3 p53和mdm2蛋白在NPC发生各阶段的表达
34例NPC的癌旁上皮存在癌发生过程各阶段病变和正常上皮。比较p53、mdm2蛋白和两蛋白同时在各阶段病变的表达(表2)，正常上皮和单纯性改变上皮的p53或mdm2蛋白均阴性；随病情加重，两蛋白表达亦增高，在中-重度异型性改变与轻度异型性改变之间或与NPC之间均存在统计学的显著性差异。又两蛋白同时表达仅见于中-重度异型性改变和NPC，同时表达率均在50%或以上。结果表明p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两蛋白的协同作用可能在相当部分NPC发生中起重要作用。
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表2 p53、mdm2蛋白及两蛋白同时在NPC发生过程各阶段病变上皮的表达 上皮病变
例数
p53蛋白表达(%)
mdm2蛋白表达(%)
p53、mdm2同时表达(%)
Ⅲ级
Ⅱ级
Ⅰ级
-
Ⅲ级
Ⅱ级
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Ⅰ级
-
NPC①
34
21(61.77)
10(29.41)
3(8.82)
6(17.65)
10(29.41)
3(8.82)
15(44.12)
19(54.30)
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异型性改变
重-中度②
32
4(12.50)
19(59.38)
8(25.00)
1(3.12)
3(9.38)
13(40.62)
16(50.00)
16(50.00)
轻度③
, 百拇医药
21
1(4.76)
10(47.62)
10(47.62)
21(100.00)
0
单纯性改变及
正常上皮④
16
16(100.00)
16(100.00)
0
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统计学分析
①与②
②与③
③与④
①与②
②与③
①与②
②与③
χ2
17.58
15.65
11.93
16.56
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15.04
0.12
7.11
P
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
>0.75
<0.01
*包括10例重度异型性改变和22例中度异型性改变
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3 讨论
NPCp53基因突变的问题颇有争议。Sun等显示NPCp53基因exon5-8突变率极低[2]。陈氏却发现23例NPC中15例有exon8点突变[3]。本实验31例p53蛋白阳性的NPC中10例有异常杂交片段，说明p53基因结构异常在NPC并不少见。
mdm2基因第一内含子中存在p53依赖性启动子，激活态的p53蛋白与其内的两个串列成分结合，则激活mdm2转录与表达[6]。本实验有p53基因结构改变者均呈p53蛋白过度表达，其中2.8/6kb片段组同时有mdm2蛋白阳性Ⅲ/Ⅱ级，而8kb片段组却有2/3病例mdm2蛋白阴性。似乎说明前者基因改变所产生的p53蛋白，激活mdm2的功能并未受明显的影响；而后者则受明显的抑制。Lianes在膀胱癌研究亦有类同结果[7]。当然，不能排除非p53依赖性通道激活mdm2的可能。但若巧合，难解释。
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mdm2蛋白分子中存在p53蛋白的结合部位，当两蛋白形成复合物时，p53蛋白被灭活，稳定性增中且造成过度表达。本实验无p53基因结构改变的21例p53蛋白阳性NPC中，12例mdm2蛋白阳性(其中10例阳性Ⅲ/Ⅱ级)和9例阴性。说明mdm2蛋白过度表达有可能是造成部分NPC无p53基因结构改变而p53蛋白过度表达的原因之一。
多种病毒编码蛋白(腺病毒E1B、SV40大丁抗原、HPVE6等)能与p53蛋白形成复合物，作用与mdm2蛋白类似[8]。Szekely已证实EBNA-5蛋白能与p53蛋白形成复合物[9]，鼻咽低分化癌细胞内普遍存在编码EBNA-5的EB病毒DNABamHI-W片段[10]。本实验病例EB病毒血清学检测均阳性，说明均有EB病毒感染。其中无p53基因结构改变且mdm2蛋白阴性的NPC，若体内EB病毒编码蛋白(例如EBNA-5)与非突变型p53蛋白结合，是有可能引起p53蛋白过度表达的。
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肿瘤的发生是多基因/因素、多步骤的演进过程[11]。p53和mdm2蛋白表达随鼻咽上皮病变加重而升高，尤其在中-重度异型性改变，两蛋白表达均与轻度异型性改变有显著差异，且两蛋白同时表达率骤升至50.0%，与NPC接近。说明p53和mdm2蛋白过度表达，尤其两者协同作用可能在相当部分NPC的发生过程中起重要作用。
参考文献
1 李锦添，邓满全，吴荫棠，等.免疫组化法检测鼻咽病变组织中PCNA和p53的意义〔J〕.癌症，1995，14：99.
2 Sun Y, Hegamyer G, Cheng YJ, et al. An infrequent point mutation of the p53 gene in human nesopharyngeal carcinoma〔J〕. Proc Natl Acad Sci USA, 1992, 89:6516.
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3 陈仁武，朱丹，殷蔚伯，等.p53基因在鼻咽癌中的热点突变〔J〕.中华肿瘤杂志，1995，17(6)：401.
4 Sheu LF, Chen A, Tseng HH, et al. Expression of p53 protein in nasopharyngeal carcinoma, J Pathol, 1994, 172:294.
5 李锦添，宗永生.上皮异型性增生和鳞状化生在鼻咽癌组织发生中关系的探讨〔J〕.中华病理学杂志，1986，15(1)：43.
6 Zauberman A, Flusberg D, Haupt Y, et al. A functional responsive p53-responsive intronic promoter is contained within the hu mann mdm gene〔J〕. Nucleic Acids Res, 1995, 23(14):2584.
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7 Lianes P, Orlow I, Zhang ZF, et al. Altered patterns of MDM and TP53 expression in human bladder cancer〔J〕. J Natl Cancer Inst, 1994, 86:1325.
8 Cordon-Cardo C. Mutation of cell cycel regulators, Biological and clinical implications for human neoplasia〔J〕. Am J Pathol, 1995, 147(3):545.
9 Szekely L, Selivanova G, Magnusson KP, et al. EBNA-5, an Epstein-Barr virus encoded nuclear antigen, bind to the retinoblastoma and p53 protein〔J〕. Proc Natl Acad Sci USA, 1993, 90:5455.
10 李锦添，黄宝珍，罗天锡.EB病毒DNA在鼻咽病变中的表现〔J〕.癌症，1993，12(1)：36.
11 Hunter T. Coperation between oncogenes〔J〕. Cell, 1991, 64:249.
收稿日期：1998-04-09；修回日期：1998-06-29, 百拇医药