肝癌高发区饮用水对蝌蚪红细胞微核率影响的研究
作者：刘清华 马军 袁志刚 韦忠亮 梁任祥
单位：刘清华 马军 袁志刚 广西医科大学生物学教研室(南宁530021)；韦忠亮 梁任祥 广西扶绥肝癌研究所
关键词：生活用水；蝌蚪；微核率；肝癌
广西预防医学990203
摘要 采用蝌蚪红细胞微核实验对广西肝癌高发区4个点的饮用水进行致突变性研究。结果表明：4个点的微核率分别是对照组的3.34、2.97、2.48和2.29倍，差异非常显著(P<0.01)，并且红细胞微核率与当地居民肝癌死亡率呈正相关(r=0.994)
Observation of the micronucleus test of tadpole erythrocyte in Guangxi high-morbidity-district water of liver cancer.
, 百拇医药
Liu Qinghua,Ma Jun,Yuan Zhigang,et al.Biological Teaching and Research Section of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract The mutagenic study was made by the micronucleus test of tadpole erythrocyte at drinking water of four places in Guangxi high-morbidity-district of liver cancer.The studied results displayed that the micronucleus rates of drinking water are 3.34,2.97,2.48,2.29 times as high as that of the control.And the differences between them are very notable (P<0.01).In addition,the micronucleus rates interrelate closely with the liver-cancer mortalities of the district(r=0.994).
, 百拇医药
Key words Drinking water Tadpole Micronucleus rate Liver cancer
广西扶绥县是肝癌高发区，许多研究表明与该地居民饮用不良水质有关[1～2]。为了进一步探讨该地水质的致突变作用，本文以蝌蚪红细胞微核率变化为指标，并结合流行病学调查资料，对该县4个肝癌发病率较高的村的饮用水进行了致突变性研究，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 水样采集和实验分组 在该县肝癌发病率较高(>80/10万)的R村、D村、Q村和Z村各采集生活用水样25升，自然沉淀后作实验组，以三蒸水为实验对照组。
1.2 实验动物 用饰纹姬蛙变态前的蝌蚪，捕捞于南宁市郊。体重约0.04～0.05克/只。在染毒前两周，把蝌蚪放入符合卫生标准的饮用水中饲养，每日投入磨细的金鱼饵料一次，3～4日换水一次。
, 百拇医药
1.3 标本制备和观察 将蝌蚪随机分配到各实验组，每组30只。7日后，取出蝌蚪转移到符合卫生标准的饮用水中，6小时后用小剪刀剪断蝌蚪尾部，将尾部血直接涂在洁净载玻片上。自然晾干，用甲醇固定15分钟，干燥后以10%的Giemsa染色12～15分钟，用自来水冲洗，干燥后镜检[3～4]。每组观察10只蝌蚪，每只平均观察2000个红细胞，记录带有微核的细胞数，观察结果以千分率(‰)表示。
2 结果
2.1 实验组与对照组微核率的比较 见表1。
表1 实验组与对照组的微核率比较 组别
观察动
物数
观察红
细胞数
, 百拇医药
带有微核的
红细胞数
微核率
(‰)
χ2
P
R组
10
20149
661
32.81
259.88
<0.01
, http://www.100md.com
D组
10
20003
583
29.15
200.17
<0.01
Q组
10
20045
487
24.30
127.96
, http://www.100md.com
<0.01
Z组
10
20084
451
22.46
103.01
<0.01
对照组
10
20598
202
9.81
, 百拇医药
从表1可知，对照组的蝌蚪红细胞微核率为9.81‰，4个实验组的微核率分别为32.81‰、29.15‰、24.30‰和22.46‰，它们分别是对照组的3.34、2.97、2.48和2.29倍，与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。在实验组中除了有典型的单微核外，还可见双微核、三微核、四微核，甚至在R组还见五微核。实验组的核异常有核质外凸、核内凹、核内空泡、核碎裂及无丝分裂。
2.2 红细胞微核率与居民肝癌死亡率的相关性 将各实验组微核率与该地区1974～1996年的平均肝癌死亡率作相关分析，结果表明，微核率与居民肝癌死亡率间存在正相关关系，凡肝癌死亡率高的地区，红细胞微核率亦高，相关系数r=0.994(P<0.01)，结果列于表2。表2 红细胞微核率与居民肝癌死亡率的相关性 采样地点
红细胞微
核率(‰)
, 百拇医药 1974～1996年年均肝癌
死亡率(1/10万)
R组
32.81
176.60
D组
29.15
152.33
Q组
24.30
97.30
Z组
22.46
, http://www.100md.com
83.10
3 讨论
目前，微核实验已被国际环境致突变物致癌物防护委员会推荐为检测致癌物和诱变剂常用的遗传毒理学方法之一，它具有简便、快速、灵敏和准确等优点。国内用微核法对水体污染物的测定已做了一些研究，如贺维顺等曾多次进行了鱼类红细胞与蝌蚪红细胞微核试验的比较，发现鱼类细胞的灵敏度较低，对检测水体中低浓度致癌物和致突变物效果不理想，而蝌蚪是变态前的幼体，处于高度分化发育阶段，细胞分裂旺盛，对水体中低浓度毒物反应灵敏度高[5]。故本实验采用蝌蚪红细胞微核试验。
有关扶绥肝癌高发区水体的致突变性研究已有一些报道，但未用蝌蚪红细胞微核实验来检测。过去常用蝌蚪的心脏血制片，本文则改用蝌蚪尾部血涂片，因而克服了前者存在的弊端而使涂片的质量显著提高，结果也更为满意。实验结果表明该地区水质污染物具有的致突变作用，与张丽生等报道肝癌高发区饮用水的化学诱变剂污染调查结果相似[6]。进一步证实该地区饮用水中有致染色体损伤的化学诱变剂存在。蝌蚪红细胞微核率与该地区肝癌死亡率的相关分析表明，肝癌死亡率越高的地方其水质所致蝌蚪红细胞微核率越高，呈现出明显的正相关关系。这不仅进一步证实了该地区水体污染与肝癌的密切关系，同时也说明了蝌蚪微核实验用于肝癌高发区水体污染的检测是灵敏的，这对综合评价水体致突变物污染是一个客观实用的指标。
, http://www.100md.com
核异常是综合性的核损伤指标，在实验中除观察到微核外，还有核质外凸、核内凹、核内空泡、核碎裂及无丝分裂，不同组核损伤的程度是不同的，血R组出现的频率高于其它组，提示该组水体中致突变致癌物活性较强，至于水体中哪些物质有致癌和致突变作用尚待进一步研究。
参考文献
1 苏德隆.饮水与肝癌.中华预防医学杂志，1980，14(2)：65
2 愈顺章，刘佩莉，徐 忠，等.饮水与肝癌.肿瘤，1986，6(4)：149
3 贺维顺，王蕊芳.蝌蚪血红细胞微核和核异常监测水质污染的研究.动物学研究，1990，11(1)：1
4 刘清华，袁志刚，胡文庆.南宁朝阳溪、邕江和南湖水对沼蛙蝌蚪红细胞微核率影响的研究.广西预防医学，1995，1(6)：340
5 贺维顺，王蕊芳.污水和污水土地处理系统中各种水质对华西蟾蜍蝌蚪红细胞微核率的影响.动物学研究，1992，13(2)：275
6 张丽生，蒙贵仁，黄珍杨，等.肝癌高发区饮用水中化学诱变剂的污染调查.环境与健康杂志，1989，6(3)：26
1998-09-24收稿。1998-11-05修回。, http://www.100md.com
单位：刘清华 马军 袁志刚 广西医科大学生物学教研室(南宁530021)；韦忠亮 梁任祥 广西扶绥肝癌研究所
关键词：生活用水；蝌蚪；微核率；肝癌
广西预防医学990203
摘要 采用蝌蚪红细胞微核实验对广西肝癌高发区4个点的饮用水进行致突变性研究。结果表明：4个点的微核率分别是对照组的3.34、2.97、2.48和2.29倍，差异非常显著(P<0.01)，并且红细胞微核率与当地居民肝癌死亡率呈正相关(r=0.994)
Observation of the micronucleus test of tadpole erythrocyte in Guangxi high-morbidity-district water of liver cancer.
, 百拇医药
Liu Qinghua,Ma Jun,Yuan Zhigang,et al.Biological Teaching and Research Section of Guangxi Medical University,Nanning 530021
Abstract The mutagenic study was made by the micronucleus test of tadpole erythrocyte at drinking water of four places in Guangxi high-morbidity-district of liver cancer.The studied results displayed that the micronucleus rates of drinking water are 3.34,2.97,2.48,2.29 times as high as that of the control.And the differences between them are very notable (P<0.01).In addition,the micronucleus rates interrelate closely with the liver-cancer mortalities of the district(r=0.994).
, 百拇医药
Key words Drinking water Tadpole Micronucleus rate Liver cancer
广西扶绥县是肝癌高发区，许多研究表明与该地居民饮用不良水质有关[1～2]。为了进一步探讨该地水质的致突变作用，本文以蝌蚪红细胞微核率变化为指标，并结合流行病学调查资料，对该县4个肝癌发病率较高的村的饮用水进行了致突变性研究，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 水样采集和实验分组 在该县肝癌发病率较高(>80/10万)的R村、D村、Q村和Z村各采集生活用水样25升，自然沉淀后作实验组，以三蒸水为实验对照组。
1.2 实验动物 用饰纹姬蛙变态前的蝌蚪，捕捞于南宁市郊。体重约0.04～0.05克/只。在染毒前两周，把蝌蚪放入符合卫生标准的饮用水中饲养，每日投入磨细的金鱼饵料一次，3～4日换水一次。
, 百拇医药
1.3 标本制备和观察 将蝌蚪随机分配到各实验组，每组30只。7日后，取出蝌蚪转移到符合卫生标准的饮用水中，6小时后用小剪刀剪断蝌蚪尾部，将尾部血直接涂在洁净载玻片上。自然晾干，用甲醇固定15分钟，干燥后以10%的Giemsa染色12～15分钟，用自来水冲洗，干燥后镜检[3～4]。每组观察10只蝌蚪，每只平均观察2000个红细胞，记录带有微核的细胞数，观察结果以千分率(‰)表示。
2 结果
2.1 实验组与对照组微核率的比较 见表1。
表1 实验组与对照组的微核率比较 组别
观察动
物数
观察红
细胞数
, 百拇医药
带有微核的
红细胞数
微核率
(‰)
χ2
P
R组
10
20149
661
32.81
259.88
<0.01
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D组
10
20003
583
29.15
200.17
<0.01
Q组
10
20045
487
24.30
127.96
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<0.01
Z组
10
20084
451
22.46
103.01
<0.01
对照组
10
20598
202
9.81
, 百拇医药
从表1可知，对照组的蝌蚪红细胞微核率为9.81‰，4个实验组的微核率分别为32.81‰、29.15‰、24.30‰和22.46‰，它们分别是对照组的3.34、2.97、2.48和2.29倍，与对照组比较有极显著性差异(P<0.01)。在实验组中除了有典型的单微核外，还可见双微核、三微核、四微核，甚至在R组还见五微核。实验组的核异常有核质外凸、核内凹、核内空泡、核碎裂及无丝分裂。
2.2 红细胞微核率与居民肝癌死亡率的相关性 将各实验组微核率与该地区1974～1996年的平均肝癌死亡率作相关分析，结果表明，微核率与居民肝癌死亡率间存在正相关关系，凡肝癌死亡率高的地区，红细胞微核率亦高，相关系数r=0.994(P<0.01)，结果列于表2。表2 红细胞微核率与居民肝癌死亡率的相关性 采样地点
红细胞微
核率(‰)
, 百拇医药 1974～1996年年均肝癌
死亡率(1/10万)
R组
32.81
176.60
D组
29.15
152.33
Q组
24.30
97.30
Z组
22.46
, http://www.100md.com
83.10
3 讨论
目前，微核实验已被国际环境致突变物致癌物防护委员会推荐为检测致癌物和诱变剂常用的遗传毒理学方法之一，它具有简便、快速、灵敏和准确等优点。国内用微核法对水体污染物的测定已做了一些研究，如贺维顺等曾多次进行了鱼类红细胞与蝌蚪红细胞微核试验的比较，发现鱼类细胞的灵敏度较低，对检测水体中低浓度致癌物和致突变物效果不理想，而蝌蚪是变态前的幼体，处于高度分化发育阶段，细胞分裂旺盛，对水体中低浓度毒物反应灵敏度高[5]。故本实验采用蝌蚪红细胞微核试验。
有关扶绥肝癌高发区水体的致突变性研究已有一些报道，但未用蝌蚪红细胞微核实验来检测。过去常用蝌蚪的心脏血制片，本文则改用蝌蚪尾部血涂片，因而克服了前者存在的弊端而使涂片的质量显著提高，结果也更为满意。实验结果表明该地区水质污染物具有的致突变作用，与张丽生等报道肝癌高发区饮用水的化学诱变剂污染调查结果相似[6]。进一步证实该地区饮用水中有致染色体损伤的化学诱变剂存在。蝌蚪红细胞微核率与该地区肝癌死亡率的相关分析表明，肝癌死亡率越高的地方其水质所致蝌蚪红细胞微核率越高，呈现出明显的正相关关系。这不仅进一步证实了该地区水体污染与肝癌的密切关系，同时也说明了蝌蚪微核实验用于肝癌高发区水体污染的检测是灵敏的，这对综合评价水体致突变物污染是一个客观实用的指标。
, http://www.100md.com
核异常是综合性的核损伤指标，在实验中除观察到微核外，还有核质外凸、核内凹、核内空泡、核碎裂及无丝分裂，不同组核损伤的程度是不同的，血R组出现的频率高于其它组，提示该组水体中致突变致癌物活性较强，至于水体中哪些物质有致癌和致突变作用尚待进一步研究。
参考文献
1 苏德隆.饮水与肝癌.中华预防医学杂志，1980，14(2)：65
2 愈顺章，刘佩莉，徐 忠，等.饮水与肝癌.肿瘤，1986，6(4)：149
3 贺维顺，王蕊芳.蝌蚪血红细胞微核和核异常监测水质污染的研究.动物学研究，1990，11(1)：1
4 刘清华，袁志刚，胡文庆.南宁朝阳溪、邕江和南湖水对沼蛙蝌蚪红细胞微核率影响的研究.广西预防医学，1995，1(6)：340
5 贺维顺，王蕊芳.污水和污水土地处理系统中各种水质对华西蟾蜍蝌蚪红细胞微核率的影响.动物学研究，1992，13(2)：275
6 张丽生，蒙贵仁，黄珍杨，等.肝癌高发区饮用水中化学诱变剂的污染调查.环境与健康杂志，1989，6(3)：26
1998-09-24收稿。1998-11-05修回。, http://www.100md.com