角叉菜诱导大鼠胸膜炎中环氧酶-2的生成及NS-398对其选择性抑制作用
作者：杨秋生 原田芳照 鹿取信
单位：原田芳照， 鹿取信(首都医科大学药理学教研室， 北京 100054； 1日本北里医科大学药理学教研室
关键词：
药学学报990306 INDUCTION OF CYCLOOXYGENASE-2 IN RAT CARRAGEENIN-INDUCED
PLEURISY AND ITS SELECTIVE INHIBITION BY NS-398
Yang Qiusheng(Yang QS), Harada Yoshiteru， Katori Makoto
(Capital University of Medical Science, Beijing 100054; 1Kitasato University, Japan)
, 百拇医药
ABSTRACT AIM: To detect cyclooxygenase-2(COX-2)/prostaglandin H synthase-2(PGHS-2) in cells of pleural exudate and investigate the effect of NS-398 on its activity. METHODS: COX-2 was tested by SDS-PAGE and Western blot in cells of the pleural exudate induced in rats by intrapleural injection of 0.2 ml of 2% carrageenin. TLC was used to analyze the activity of COX-2. RESULTS: The examination using PGHS-1 or PGHS-2 antiserum showed that PGHS-2 appeared at the 5th hour after carrageenin injection, and vanished at the 19th hour. While, PGHS-1 appeared in cells before and after carrageenin injection. Furthermore, only PGHS-1, but not PGHS-2, was detected in the microsomal fraction of the lung, stomach and kidney of pleurisy-affected and normal control rats. NS-398, a novel nonsteroidal anti-inflammatory agent, suppressed the activity of COX-2 with IC50=4.5 μmol.L-1. CONCLUSION: COX-2 is only present in inflammatory site induced by carrageenin. NS-398 may selectively inhibit COX-2 activity in a dose-dependent manner.
, 百拇医药
KEY WORDS cyclooxygenase-2(prostaglandin H synthase-2)； pleurisy； Western blot; N-(2-cyclohexyloxy-4-nitrophenyl) methane sulfonamide
摘要 目的：检测角叉菜诱导的大鼠胸膜炎渗出细胞中COX-2的存在并观察NS-398对其活性的影响。方法：用SDS-PAGE和Western blot分析及PGHS-1和PGHS-2抗血清，识别并检测胸膜炎渗出细胞中的COX-2。酶活性用TLC法测定。结果：致炎后5 h, PGHS-2出现, 19 h时消失，而PGHS-1在注射角叉菜前后均出现。此外，在胸膜炎大鼠和正常大鼠的肺、胃、肾微粒体中，只检测到PGHS-1, 未检测到PGHS-2。新的非甾体抗炎药NS-398,可明显抑制COX-2活性(IC50=4.5 μmol.L-1 )。 结论：COX-2仅存在于角叉菜诱导的炎症部位；NS-398可选择性抑制COX-2，并呈剂量依赖性。
, http://www.100md.com
关键词 环氧酶-2(前列腺素H合成酶-2); 胸膜炎; 免疫印迹; NS-398[N-(2-环己氧-4-硝基苯)甲烷磺胺]
环氧酶(COX)或称前列腺素H合成酶(PGHS)是花生四烯酸(AA)代谢、前列腺素(PGs)和血栓素A2(TAX2)生物合成过程中重要的限速酶之一。最近的研究发现：COX有两种形式: COX-1，即通常所指的环氧酶，存在于大多数组织细胞中，而它的异构体COX-2，是一种被诱导的酶，仅存在于多种刺激因子如PMA,LPS和IL-1等引起的炎症组织中[1，2]，并在一些组织中证实有COX-2 mRNA的存在[3，4],然而在实验动物炎症模型上证据极少。因此为了证实炎症组织中COX-2的存在，我们以大鼠胸膜炎模型检测了COX-2的生成并在体外观察了NS-398对两种酶催化的AA代谢产物PGE2的影响。
材料和方法
, 百拇医药
1 大鼠胸膜炎渗出细胞、肺、胃、肾微粒体的制备及免疫印迹分析(Western blot analysis)
Sprague Dawley(SD)大鼠(♂，9～10周龄)，胸膜炎组胸膜腔内注射2%角叉菜0.2 ml，对照组注射等量生理盐水(n=6)。在一定时间内乙醚吸入麻醉断头处死, 收集胸腔渗出液，细胞分离后悬浮于20 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液(pH 7.4，含色氨酸5 mmol.L-1)中，经超声震荡5 min将细胞破碎，于700×g离心10 min，4℃。取上清液加入0.5% Tween 20， 140 000×g离心1 h,4℃,沉淀部分悬浮于20 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液于-20℃保存备用。
分离大鼠肺、胃及肾，分别用100 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液制成匀浆。在12 000×g离心20 min,取上清液于100 000×g离心1 h,4℃。沉淀部分按前述方法悬浮保存。所有操作均在4℃下进行。用Bio-Rad蛋白分析法(Bio-Rad Co.美国)测定制备样品中蛋白含量，分别加样10 μl(50～75 μg/lane),进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, 简称SDS-PAGE)[5 ]。开始电流10 mA, 30 min。当待测样品进入分离胶后将电流调至20 mA, 30 min。电泳展开后转移到Immobilon-P纤维膜(Millipore Co.日本)上，用Block Ace(大日本制药)封闭后，与PGHS-1和PGHS-2(Calyman Chem美国)抗血清反应。再与羊抗兔IgG作用。以70-ku分子标记蛋白(Molecular mark protein，LKB，瑞典)定位[6]，进行蛋白印迹分析[7]。免疫染色的具体步骤按厂家(Konica Co.日本)试剂说明书进行。
, 百拇医药
2 体外AA代谢产物的TLC分离和放射性强度测定
将COX-1和COX-2(Calyman Co.美国)分别加入50 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液中，其中含血红蛋白1 μmol.L-1和色氨酸5 mmol.L-1。在此反应系统中加入不同浓度吲哚美辛(Merck Co.)和NS-398[N-(2-cyclohexyloxy-4-nitrophenyl)methane sulfonamide, Taisho制药，日本]，以等量缓冲液为对照, 于37℃温育4 min。然后加入3H-AA(74 kBq*ml-1) 20 μl继续反应2 min。用1 mol.L-1 HCl终止反应，经乙酸乙酯提取2次。合并提取液经旋转蒸发后溶于乙酸乙酯中进行TLC分离(20 cm×20 cm硅胶板，Whatman Co.美国)。展开剂为乙酸乙酯—异辛烷—乙酸—水(90∶50∶20∶100)。经γ-放射色谱摄影仪定位后将样品分别刮下,加入ASC-II闪烁液6 ml进行放射性强度测定。以产物PGE2生成量，计算药物对COX-1和COX-2活性的抑制作用。抑制率(%)=(对照放射性计数-给药放射性计数)/对照放射性计数×100%。
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实验数据经统计学t-检验处理。
实验结果
1 大鼠胸腔渗出细胞及肺、胃、肾微粒体的免疫印迹分析
胸腔渗出细胞免疫印迹图谱如图1所示。按文献[6]报道, 70 ku标准分子量蛋白质，与人的PGHS-1和PGHS-2的分子量相似。本实验中，正常大鼠胸腔渗出细胞中只有PGHS-1蛋白染色区带,其存留在5 h和19 h保持于同一水平。而在角叉菜诱导的大鼠胸膜炎渗出细胞(92%为多形核白细胞，少量单核细胞)，致炎前无PGHS-2区带, 致炎后5 h出现, 19 h消失。这与培养的人脐索静脉内皮细胞中所测结果[8]相一致。以前的实验[9]证实：角叉菜致胸膜炎1～7 h, PGE2和TXB2明显升高并可被阿斯匹林抑制。PGHS-2印迹的时间过程与胸膜炎渗出细胞中PGs水平相吻合。图2显示：PGHS-1染色区带存在于正常大鼠和胸膜炎5 h后大鼠的肺、胃、肾中，而在这些组织中PGHS-2区带均未出现，明显低于检测水平，这表明即使动物有炎症感染时,PGHS-2(COX-2)也仅存在于炎症部位，而不存在于感染动物的其它组织。
, 百拇医药
Fig 1 Immunoblot analysis of pleural cells. lane 1: pleural lavage cells from normal rats; lane 2: pleural exudate cells at 5 h of pleurisy; lane 3: pleural exudate cells at 19 h of pleurisy. The position of 70-ku molecular marker protein is indicated.
Fig 2 Immunoblot analysis of microsomal fractions of the lung(lane 1), stomach(lane 2) and kidney(lane 3). Panel A, from normal control rats; panel B, from rats of 5 h of pleurisy. The position of 70-ku molecular marker protein is indicated.
, 百拇医药
2 NS-398对AA代谢产物的影响
在环氧酶作用下，AA代谢产物主要为6-keto-PGF1α, PGE2和PGD2。给药后3种产物的生成都受到不同程度抑制，仅以与炎症密切相关的PGE2作图(图3)。结果表明：在体外NS-398可明显抑制COX-2，并呈剂量依赖性，IC50=4.5 μmol.L-1。 相同剂量对COX-1的影响很小, 剂量增至100 μmol.L-1时，对COX-1的抑制率约为30%。在本实验剂量范围内，未得出IC50。说明NS-398对COX-2的抑制作用具有较强选择性。 吲哚美辛对COX-1和COX-2活性的抑制程度近似, IC50分别为0.75 μmol.L-1和1 μmol.L-1。
, http://www.100md.com
Fig 3 Effects of NS-398 (○) and indomethacin (●) on COX-1 and COX-2 activity (±s, n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control).讨论
COX(PGHS)催化AA转变成PGs，是阿斯匹林及其它非甾体抗炎药(NSAIDs)作用的靶位。许多炎症介质可以使COX-2 mRNA和酶蛋白含量升高，而对COX-1无影响。目前，很多环氧酶抑制剂如阿司匹林、吲哚美辛正广泛用于临床。由于其对各部位选择性不高，在发挥抗炎作用的同时，对抗了PGE2对胃粘膜的保护作用，引起胃粘膜及其它组织严重不良反应。本文的研究表明：角叉菜所致胸膜炎5 h时确有COX-2的检出。研究组其他学者的测定证实：地塞米松(3～30 mg.kg-1 ip), NS-398(3 mg.kg-1 ip)可以抑制COX-2和PGE2的生成及炎性渗出[10]，这表明COX-2参与了炎症部位PGs的生物合成。此外，近年的研究表明: COX-1和COX-2对各种抑制剂的敏感性不同[11]，大多数环氧酶抑制剂对COX-1的抑制作用比对COX-2的作用强[12]。本观察证实在胸膜炎大鼠的肺、胃、肾中只检测到COX-1，未检测出COX-2，这可为选择性COX-2抑制剂作为无胃、肾副作用的新抗炎药提供一个合理依据。
, 百拇医药
据报道，新的非甾体抗炎药NS-398，0.3～5 mg.kg-1可以发挥抗炎止痛作用，一次口服给药1 000 mg.kg-1对胃肠道无明显损害[13]。本实验在体外直接检测了NS-398对COX-1和COX-2催化的AA代谢主要产物PGE2生成的影响, 可以合理解释NS-398与炎症有关的选择性抑制作用机制。
致谢 本工作得到日本内藤纪念科学振兴财团奖学金资助。
*Tel:(010)63051452,E-mail:ZhuJuny@publica.bj.CN info.net)
参考文献
1 O′Sullivan MG, Huggins EM, Meade EA, et al. Lipopolysaccharide induces prostaglandin H synthase-2 in alveolar macrophages. Biochem Biophys Res Commun, 1992,187∶1123
, http://www.100md.com
2 Jones DA, Carlton DP, McIntyre TM, et al. Molecular cloning of human prostaglandin endoperoxide synthase type II and demonstration of expression in response to cytokines. J Biol Chem, 1993,268∶9049
3 Kujubu DA, Fletcher BS, Varnum BC, et al. TIS10, a phorbol ester tumor promoter-inducible mRNA from Swiss 3T3 cells, encodes a novel prostaglandin synthase/cyclooxygenase homologue. J Biol Chem, 1991,266∶12866
4 O′Banion MK, Sadowski HB, Winn V, et al. A serum-and glucocorticoids-regulated 4-kilobase mRNA encodes a cyclooxygenase related protein. J Biol Chem, 1991,266∶23261
, 百拇医药
5 东京大学医学研究所癌研究部编. 细胞工学实验プロトコル. 东京: 秀润出版(株), 1992.161
6 Ishimura K, Suzuki T, Fukui K, et al. Immunocytochemical localization of prostaglandin endoperoxide synthase in the bovine intestine. Histochemistry, 1993,99∶485
7 Mitchell JA, Belvisi MG. Induction of cyclooxygenase-2 by cytokines in human pulmonary epithelial cells: regulation by dexamethasone. Br J Pharmacol, 1994,113∶1008
8 Hla T, Neilson K. Human cyclooxygenase-2 cDNA. Proc Natl Acad Sci USA, 1992,89∶7384
, http://www.100md.com
9 Harada Y, Tanaka K, Uchida Y, et al. Changes in the levels of prostaglandins and thromboxane and their roles in the accumulation of exudate in rat carrageenin-induced pleurisy-A profile analysis using gas chromatography-mass spectrometry. Prostaglandins, 1982,23∶881
10 Katori M, Harada Y, Hatanaka K, et al. Induction of prostaglandin H synthase-2 in rat carrageenin-induced pleurisy and effect of a selective COX-2 inhibitor. Adv Prostaglandin Thromboxane Leukotriene Res, 1995,23∶345
, 百拇医药
11 Meade E, Smith WL, Dewitt DL, et al. Differential inhibition of prostaglandin endoperoxide synthase (cyclooxygenase) isozymes by aspirin and other non-steroidal anti-inflammatory drugs. J Biol Chem, 1993,268∶6610
12 Mitchell JA. Selectivity of non-steroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90∶11693
13 Futaki N, Yoshikawa K, Hamasaka Y, et al. NS-398, a novel non-steroidal anti-inflammatory drug with potent analgesic and antipyretic effects, which causes minimal stomach lesions. Gen Pharmacol, 1993,24∶105
收稿日期: 1998-07-07, http://www.100md.com
单位：原田芳照， 鹿取信(首都医科大学药理学教研室， 北京 100054； 1日本北里医科大学药理学教研室
关键词：
药学学报990306 INDUCTION OF CYCLOOXYGENASE-2 IN RAT CARRAGEENIN-INDUCED
PLEURISY AND ITS SELECTIVE INHIBITION BY NS-398
Yang Qiusheng(Yang QS), Harada Yoshiteru， Katori Makoto
(Capital University of Medical Science, Beijing 100054; 1Kitasato University, Japan)
, 百拇医药
ABSTRACT AIM: To detect cyclooxygenase-2(COX-2)/prostaglandin H synthase-2(PGHS-2) in cells of pleural exudate and investigate the effect of NS-398 on its activity. METHODS: COX-2 was tested by SDS-PAGE and Western blot in cells of the pleural exudate induced in rats by intrapleural injection of 0.2 ml of 2% carrageenin. TLC was used to analyze the activity of COX-2. RESULTS: The examination using PGHS-1 or PGHS-2 antiserum showed that PGHS-2 appeared at the 5th hour after carrageenin injection, and vanished at the 19th hour. While, PGHS-1 appeared in cells before and after carrageenin injection. Furthermore, only PGHS-1, but not PGHS-2, was detected in the microsomal fraction of the lung, stomach and kidney of pleurisy-affected and normal control rats. NS-398, a novel nonsteroidal anti-inflammatory agent, suppressed the activity of COX-2 with IC50=4.5 μmol.L-1. CONCLUSION: COX-2 is only present in inflammatory site induced by carrageenin. NS-398 may selectively inhibit COX-2 activity in a dose-dependent manner.
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KEY WORDS cyclooxygenase-2(prostaglandin H synthase-2)； pleurisy； Western blot; N-(2-cyclohexyloxy-4-nitrophenyl) methane sulfonamide
摘要 目的：检测角叉菜诱导的大鼠胸膜炎渗出细胞中COX-2的存在并观察NS-398对其活性的影响。方法：用SDS-PAGE和Western blot分析及PGHS-1和PGHS-2抗血清，识别并检测胸膜炎渗出细胞中的COX-2。酶活性用TLC法测定。结果：致炎后5 h, PGHS-2出现, 19 h时消失，而PGHS-1在注射角叉菜前后均出现。此外，在胸膜炎大鼠和正常大鼠的肺、胃、肾微粒体中，只检测到PGHS-1, 未检测到PGHS-2。新的非甾体抗炎药NS-398,可明显抑制COX-2活性(IC50=4.5 μmol.L-1 )。 结论：COX-2仅存在于角叉菜诱导的炎症部位；NS-398可选择性抑制COX-2，并呈剂量依赖性。
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关键词 环氧酶-2(前列腺素H合成酶-2); 胸膜炎; 免疫印迹; NS-398[N-(2-环己氧-4-硝基苯)甲烷磺胺]
环氧酶(COX)或称前列腺素H合成酶(PGHS)是花生四烯酸(AA)代谢、前列腺素(PGs)和血栓素A2(TAX2)生物合成过程中重要的限速酶之一。最近的研究发现：COX有两种形式: COX-1，即通常所指的环氧酶，存在于大多数组织细胞中，而它的异构体COX-2，是一种被诱导的酶，仅存在于多种刺激因子如PMA,LPS和IL-1等引起的炎症组织中[1，2]，并在一些组织中证实有COX-2 mRNA的存在[3，4],然而在实验动物炎症模型上证据极少。因此为了证实炎症组织中COX-2的存在，我们以大鼠胸膜炎模型检测了COX-2的生成并在体外观察了NS-398对两种酶催化的AA代谢产物PGE2的影响。
材料和方法
, 百拇医药
1 大鼠胸膜炎渗出细胞、肺、胃、肾微粒体的制备及免疫印迹分析(Western blot analysis)
Sprague Dawley(SD)大鼠(♂，9～10周龄)，胸膜炎组胸膜腔内注射2%角叉菜0.2 ml，对照组注射等量生理盐水(n=6)。在一定时间内乙醚吸入麻醉断头处死, 收集胸腔渗出液，细胞分离后悬浮于20 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液(pH 7.4，含色氨酸5 mmol.L-1)中，经超声震荡5 min将细胞破碎，于700×g离心10 min，4℃。取上清液加入0.5% Tween 20， 140 000×g离心1 h,4℃,沉淀部分悬浮于20 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液于-20℃保存备用。
分离大鼠肺、胃及肾，分别用100 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液制成匀浆。在12 000×g离心20 min,取上清液于100 000×g离心1 h,4℃。沉淀部分按前述方法悬浮保存。所有操作均在4℃下进行。用Bio-Rad蛋白分析法(Bio-Rad Co.美国)测定制备样品中蛋白含量，分别加样10 μl(50～75 μg/lane),进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, 简称SDS-PAGE)[5 ]。开始电流10 mA, 30 min。当待测样品进入分离胶后将电流调至20 mA, 30 min。电泳展开后转移到Immobilon-P纤维膜(Millipore Co.日本)上，用Block Ace(大日本制药)封闭后，与PGHS-1和PGHS-2(Calyman Chem美国)抗血清反应。再与羊抗兔IgG作用。以70-ku分子标记蛋白(Molecular mark protein，LKB，瑞典)定位[6]，进行蛋白印迹分析[7]。免疫染色的具体步骤按厂家(Konica Co.日本)试剂说明书进行。
, 百拇医药
2 体外AA代谢产物的TLC分离和放射性强度测定
将COX-1和COX-2(Calyman Co.美国)分别加入50 mmol.L-1 Tris-HCl缓冲液中，其中含血红蛋白1 μmol.L-1和色氨酸5 mmol.L-1。在此反应系统中加入不同浓度吲哚美辛(Merck Co.)和NS-398[N-(2-cyclohexyloxy-4-nitrophenyl)methane sulfonamide, Taisho制药，日本]，以等量缓冲液为对照, 于37℃温育4 min。然后加入3H-AA(74 kBq*ml-1) 20 μl继续反应2 min。用1 mol.L-1 HCl终止反应，经乙酸乙酯提取2次。合并提取液经旋转蒸发后溶于乙酸乙酯中进行TLC分离(20 cm×20 cm硅胶板，Whatman Co.美国)。展开剂为乙酸乙酯—异辛烷—乙酸—水(90∶50∶20∶100)。经γ-放射色谱摄影仪定位后将样品分别刮下,加入ASC-II闪烁液6 ml进行放射性强度测定。以产物PGE2生成量，计算药物对COX-1和COX-2活性的抑制作用。抑制率(%)=(对照放射性计数-给药放射性计数)/对照放射性计数×100%。
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实验数据经统计学t-检验处理。
实验结果
1 大鼠胸腔渗出细胞及肺、胃、肾微粒体的免疫印迹分析
胸腔渗出细胞免疫印迹图谱如图1所示。按文献[6]报道, 70 ku标准分子量蛋白质，与人的PGHS-1和PGHS-2的分子量相似。本实验中，正常大鼠胸腔渗出细胞中只有PGHS-1蛋白染色区带,其存留在5 h和19 h保持于同一水平。而在角叉菜诱导的大鼠胸膜炎渗出细胞(92%为多形核白细胞，少量单核细胞)，致炎前无PGHS-2区带, 致炎后5 h出现, 19 h消失。这与培养的人脐索静脉内皮细胞中所测结果[8]相一致。以前的实验[9]证实：角叉菜致胸膜炎1～7 h, PGE2和TXB2明显升高并可被阿斯匹林抑制。PGHS-2印迹的时间过程与胸膜炎渗出细胞中PGs水平相吻合。图2显示：PGHS-1染色区带存在于正常大鼠和胸膜炎5 h后大鼠的肺、胃、肾中，而在这些组织中PGHS-2区带均未出现，明显低于检测水平，这表明即使动物有炎症感染时,PGHS-2(COX-2)也仅存在于炎症部位，而不存在于感染动物的其它组织。
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Fig 1 Immunoblot analysis of pleural cells. lane 1: pleural lavage cells from normal rats; lane 2: pleural exudate cells at 5 h of pleurisy; lane 3: pleural exudate cells at 19 h of pleurisy. The position of 70-ku molecular marker protein is indicated.
Fig 2 Immunoblot analysis of microsomal fractions of the lung(lane 1), stomach(lane 2) and kidney(lane 3). Panel A, from normal control rats; panel B, from rats of 5 h of pleurisy. The position of 70-ku molecular marker protein is indicated.
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2 NS-398对AA代谢产物的影响
在环氧酶作用下，AA代谢产物主要为6-keto-PGF1α, PGE2和PGD2。给药后3种产物的生成都受到不同程度抑制，仅以与炎症密切相关的PGE2作图(图3)。结果表明：在体外NS-398可明显抑制COX-2，并呈剂量依赖性，IC50=4.5 μmol.L-1。 相同剂量对COX-1的影响很小, 剂量增至100 μmol.L-1时，对COX-1的抑制率约为30%。在本实验剂量范围内，未得出IC50。说明NS-398对COX-2的抑制作用具有较强选择性。 吲哚美辛对COX-1和COX-2活性的抑制程度近似, IC50分别为0.75 μmol.L-1和1 μmol.L-1。
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Fig 3 Effects of NS-398 (○) and indomethacin (●) on COX-1 and COX-2 activity (±s, n=6. *P<0.05, **P<0.01 vs control).讨论
COX(PGHS)催化AA转变成PGs，是阿斯匹林及其它非甾体抗炎药(NSAIDs)作用的靶位。许多炎症介质可以使COX-2 mRNA和酶蛋白含量升高，而对COX-1无影响。目前，很多环氧酶抑制剂如阿司匹林、吲哚美辛正广泛用于临床。由于其对各部位选择性不高，在发挥抗炎作用的同时，对抗了PGE2对胃粘膜的保护作用，引起胃粘膜及其它组织严重不良反应。本文的研究表明：角叉菜所致胸膜炎5 h时确有COX-2的检出。研究组其他学者的测定证实：地塞米松(3～30 mg.kg-1 ip), NS-398(3 mg.kg-1 ip)可以抑制COX-2和PGE2的生成及炎性渗出[10]，这表明COX-2参与了炎症部位PGs的生物合成。此外，近年的研究表明: COX-1和COX-2对各种抑制剂的敏感性不同[11]，大多数环氧酶抑制剂对COX-1的抑制作用比对COX-2的作用强[12]。本观察证实在胸膜炎大鼠的肺、胃、肾中只检测到COX-1，未检测出COX-2，这可为选择性COX-2抑制剂作为无胃、肾副作用的新抗炎药提供一个合理依据。
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据报道，新的非甾体抗炎药NS-398，0.3～5 mg.kg-1可以发挥抗炎止痛作用，一次口服给药1 000 mg.kg-1对胃肠道无明显损害[13]。本实验在体外直接检测了NS-398对COX-1和COX-2催化的AA代谢主要产物PGE2生成的影响, 可以合理解释NS-398与炎症有关的选择性抑制作用机制。
致谢 本工作得到日本内藤纪念科学振兴财团奖学金资助。
*Tel:(010)63051452,E-mail:ZhuJuny@publica.bj.CN info.net)
参考文献
1 O′Sullivan MG, Huggins EM, Meade EA, et al. Lipopolysaccharide induces prostaglandin H synthase-2 in alveolar macrophages. Biochem Biophys Res Commun, 1992,187∶1123
, http://www.100md.com
2 Jones DA, Carlton DP, McIntyre TM, et al. Molecular cloning of human prostaglandin endoperoxide synthase type II and demonstration of expression in response to cytokines. J Biol Chem, 1993,268∶9049
3 Kujubu DA, Fletcher BS, Varnum BC, et al. TIS10, a phorbol ester tumor promoter-inducible mRNA from Swiss 3T3 cells, encodes a novel prostaglandin synthase/cyclooxygenase homologue. J Biol Chem, 1991,266∶12866
4 O′Banion MK, Sadowski HB, Winn V, et al. A serum-and glucocorticoids-regulated 4-kilobase mRNA encodes a cyclooxygenase related protein. J Biol Chem, 1991,266∶23261
, 百拇医药
5 东京大学医学研究所癌研究部编. 细胞工学实验プロトコル. 东京: 秀润出版(株), 1992.161
6 Ishimura K, Suzuki T, Fukui K, et al. Immunocytochemical localization of prostaglandin endoperoxide synthase in the bovine intestine. Histochemistry, 1993,99∶485
7 Mitchell JA, Belvisi MG. Induction of cyclooxygenase-2 by cytokines in human pulmonary epithelial cells: regulation by dexamethasone. Br J Pharmacol, 1994,113∶1008
8 Hla T, Neilson K. Human cyclooxygenase-2 cDNA. Proc Natl Acad Sci USA, 1992,89∶7384
, http://www.100md.com
9 Harada Y, Tanaka K, Uchida Y, et al. Changes in the levels of prostaglandins and thromboxane and their roles in the accumulation of exudate in rat carrageenin-induced pleurisy-A profile analysis using gas chromatography-mass spectrometry. Prostaglandins, 1982,23∶881
10 Katori M, Harada Y, Hatanaka K, et al. Induction of prostaglandin H synthase-2 in rat carrageenin-induced pleurisy and effect of a selective COX-2 inhibitor. Adv Prostaglandin Thromboxane Leukotriene Res, 1995,23∶345
, 百拇医药
11 Meade E, Smith WL, Dewitt DL, et al. Differential inhibition of prostaglandin endoperoxide synthase (cyclooxygenase) isozymes by aspirin and other non-steroidal anti-inflammatory drugs. J Biol Chem, 1993,268∶6610
12 Mitchell JA. Selectivity of non-steroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase. Proc Natl Acad Sci USA, 1993,90∶11693
13 Futaki N, Yoshikawa K, Hamasaka Y, et al. NS-398, a novel non-steroidal anti-inflammatory drug with potent analgesic and antipyretic effects, which causes minimal stomach lesions. Gen Pharmacol, 1993,24∶105
收稿日期: 1998-07-07, http://www.100md.com