牙周炎龈组织中IL-1β的表达
作者：赵晶 金志巍
单位：赵晶 北京中日友好医院口腔科；金志巍 吉林省肿瘤医院头颈外科
关键词：
首都医科大学学报/990330 白细胞介素1(IL-1)是1种单核细胞因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生。IL-1分为IL-1α和IL-1β 2种。目前，研究认为白细胞介素1能诱导破骨细胞形成，增强其活性，促进骨吸收[1]。1998年9月至1999年2月，我们采用免疫组织化学方法，观察牙周组织中IL-1β的存在和分布，进一步揭示牙周炎的免疫病理过程。
1 材料和方法
11例正常牙龈组织标本(正常组)取自我院18～30岁颌面外科拔阻生齿患者的正常龈组织。
23例牙周炎(牙周袋≥5 mm，X线显示牙槽骨吸收Ⅰ～Ⅱ度)标本采用龈切除术取自牙龈内侧的游离龈部位，其中成人牙周炎(成人组)11例，青少年牙周炎(青少年组)12例。2组的区别为青少年组患者较年轻，牙石等刺激物不多，牙龈炎症不明显，且病变多在切牙和第1磨牙，X线显示有明显的牙槽骨垂直型吸收。光镜下可见青少年组多形核巨细胞数目明显多于成人组。受试者无明显全身系统性疾病，3个月内未服用过消炎止痛剂和激素类药，1年内无牙周病治疗史。
, 百拇医药
IL-1β单克隆抗体购于军事医学科学院生物制品研究所。ABC药盒和DAB发色剂购于北京中山生物技术有限公司。
方法：①标本取下后立即固定于10%甲醛液中，常规脱水透明、石蜡切片、HE染色。②0.3%甲醇过氧化氢阻断5 min，PBS洗。③室温加羊血清孵育10 min。④滴加1∶200 IL-1β-I抗血清，37 ℃湿盒孵育60 min，PBS洗。⑤滴加生物素标记Ⅱ抗，常温湿盒孵育30 min，PBS洗。⑥ABC试剂常温湿盒孵育30 min，PBS洗。⑦脱水、透明、封片，光镜下观察结果，阴性对照以PBS代替I抗。
判断标准： IL-1β以细胞膜和细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞占50%以上为强阳性(3+)，20%～49%为中度阳性(2+)，20%以下为弱阳性(+)，光镜下观察阳性细胞的分布，用接目测微器计数单位面积。光镜下(1×400)接目镜网格100点81格，每小格边长α=0.04 mm，每张切片任选10个视野，计数结果求平均值，应用卡方检验、四格表确切概率法分析各病例间IL-1β表达情况。
, 百拇医药
2 结果和讨论
IL-1β阳性细胞位于炎性浸润区，主要阳性细胞是淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞(见图1、2)。各组病例IL-1β表达情况见表1。
图1 青少年组牙周炎牙龈组织 IL-1β阳性细胞分布在淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞
图2 成人组牙周炎牙龈组织 IL-1β阳性细胞分布在淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞
表1 3组IL-1β表达的比较 分组
阳性
阴性
合计
阳性率
, 百拇医药
+
2+
3+
正常组
0
0
0
11
11
0
青少年组
1
3
3
, http://www.100md.com
5
12
58.3
成人组
1
3
4
3
11
72.7
**与正常组比较P<0.01
IL-1具有广泛的生物学效应，能提高中性粒细胞的趋化性，使病损部位炎细胞聚集，IL-1通过诱导胶原酶纤溶蛋白酶的合成，降解胶原纤维和基质，从而造成牙周组织的损伤[2]。Masada等用ELISA法在15例进行性牙周炎患者的龈沟液中均检出IL-1[3]，其中以IL-1β检出率最高；经有效治疗后，患者龈沟液中IL-1含量明显降低。Charton等利用免疫荧光技术在正常牙龈乳头及中度至重度牙周炎龈乳头的固有层中均可发现IL-1β[4]，但牙周炎组织中强荧光染色细胞量是正常组织的3倍，提示IL-1β阳性细胞数与牙周组织炎症破坏有关。
, 百拇医药
本实验结果表明，正常牙龈中没有见到IL-1β阳性细胞，说明如无细菌、病毒等刺激的情况下，IL-1β产生细胞处于静止状态，没有IL-1β的产生。牙周炎中可见IL-1β阳性染色细胞，说明牙周炎中有IL-1β的存在，说明只有抗原侵入时才触发巨噬细胞、单核细胞产生IL-1β。本实验中IL-1β阳性细胞数在正常牙龈与青少年牙周炎及正常牙龈与成人牙周炎中有显著性差别(P<0.01)，说明IL-1β在牙周炎症中发挥作用。在炎症过程中，细胞抗原的持续性大量侵入刺激诱导免疫系统中T淋巴细胞和B淋巴细胞分化增殖，导致巨噬细胞大量活化，从而产生大量IL-1β。牙周炎症不仅有牙龈出血，且伴有牙槽骨的破坏及牙周袋形成，因此我们认为IL-1β不仅参与牙龈的炎症过程，也参与牙槽骨的破坏吸收过程。
参考文献
1.Offenbacher S,Pinnix K,Odl B.The measurement of interleukin l beta in inflamed periodontul tissues.J Dent Res,1988，67∶156
, http://www.100md.com
2.Wilton J M A,Bampton J L M,Griffith S,et al.Interleukin l beta levels in gingival crevicular fluid from adults with previous evidence of destructive periodontitis.J Clin Periodontol,1992，53∶57
3.Masada M P，Persson R,Kenney Js,et al.Measuremenl of interleukin l and 1β in gingival crevi-cular fluid:Implication for the poathogenesis of periodenfol disease.J Periodont Res,1990，25∶156
4.Charton J A,Lufer T A,Mergenhagen S E,et al.Increased thymocyte activating factor in human gingival crevicular fluid during gingival inflammation.Infect Immunol,1982，38∶1190
收稿日期:1999-04-19
, http://www.100md.com
单位：赵晶 北京中日友好医院口腔科；金志巍 吉林省肿瘤医院头颈外科
关键词：
首都医科大学学报/990330 白细胞介素1(IL-1)是1种单核细胞因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生。IL-1分为IL-1α和IL-1β 2种。目前，研究认为白细胞介素1能诱导破骨细胞形成，增强其活性，促进骨吸收[1]。1998年9月至1999年2月，我们采用免疫组织化学方法，观察牙周组织中IL-1β的存在和分布，进一步揭示牙周炎的免疫病理过程。
1 材料和方法
11例正常牙龈组织标本(正常组)取自我院18～30岁颌面外科拔阻生齿患者的正常龈组织。
23例牙周炎(牙周袋≥5 mm，X线显示牙槽骨吸收Ⅰ～Ⅱ度)标本采用龈切除术取自牙龈内侧的游离龈部位，其中成人牙周炎(成人组)11例，青少年牙周炎(青少年组)12例。2组的区别为青少年组患者较年轻，牙石等刺激物不多，牙龈炎症不明显，且病变多在切牙和第1磨牙，X线显示有明显的牙槽骨垂直型吸收。光镜下可见青少年组多形核巨细胞数目明显多于成人组。受试者无明显全身系统性疾病，3个月内未服用过消炎止痛剂和激素类药，1年内无牙周病治疗史。
, 百拇医药
IL-1β单克隆抗体购于军事医学科学院生物制品研究所。ABC药盒和DAB发色剂购于北京中山生物技术有限公司。
方法：①标本取下后立即固定于10%甲醛液中，常规脱水透明、石蜡切片、HE染色。②0.3%甲醇过氧化氢阻断5 min，PBS洗。③室温加羊血清孵育10 min。④滴加1∶200 IL-1β-I抗血清，37 ℃湿盒孵育60 min，PBS洗。⑤滴加生物素标记Ⅱ抗，常温湿盒孵育30 min，PBS洗。⑥ABC试剂常温湿盒孵育30 min，PBS洗。⑦脱水、透明、封片，光镜下观察结果，阴性对照以PBS代替I抗。
判断标准： IL-1β以细胞膜和细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞占50%以上为强阳性(3+)，20%～49%为中度阳性(2+)，20%以下为弱阳性(+)，光镜下观察阳性细胞的分布，用接目测微器计数单位面积。光镜下(1×400)接目镜网格100点81格，每小格边长α=0.04 mm，每张切片任选10个视野，计数结果求平均值，应用卡方检验、四格表确切概率法分析各病例间IL-1β表达情况。
, 百拇医药
2 结果和讨论
IL-1β阳性细胞位于炎性浸润区，主要阳性细胞是淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞(见图1、2)。各组病例IL-1β表达情况见表1。
图1 青少年组牙周炎牙龈组织 IL-1β阳性细胞分布在淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞
图2 成人组牙周炎牙龈组织 IL-1β阳性细胞分布在淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞
表1 3组IL-1β表达的比较 分组
阳性
阴性
合计
阳性率
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+
2+
3+
正常组
0
0
0
11
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青少年组
1
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12
58.3
成人组
1
3
4
3
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72.7
**与正常组比较P<0.01
IL-1具有广泛的生物学效应，能提高中性粒细胞的趋化性，使病损部位炎细胞聚集，IL-1通过诱导胶原酶纤溶蛋白酶的合成，降解胶原纤维和基质，从而造成牙周组织的损伤[2]。Masada等用ELISA法在15例进行性牙周炎患者的龈沟液中均检出IL-1[3]，其中以IL-1β检出率最高；经有效治疗后，患者龈沟液中IL-1含量明显降低。Charton等利用免疫荧光技术在正常牙龈乳头及中度至重度牙周炎龈乳头的固有层中均可发现IL-1β[4]，但牙周炎组织中强荧光染色细胞量是正常组织的3倍，提示IL-1β阳性细胞数与牙周组织炎症破坏有关。
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本实验结果表明，正常牙龈中没有见到IL-1β阳性细胞，说明如无细菌、病毒等刺激的情况下，IL-1β产生细胞处于静止状态，没有IL-1β的产生。牙周炎中可见IL-1β阳性染色细胞，说明牙周炎中有IL-1β的存在，说明只有抗原侵入时才触发巨噬细胞、单核细胞产生IL-1β。本实验中IL-1β阳性细胞数在正常牙龈与青少年牙周炎及正常牙龈与成人牙周炎中有显著性差别(P<0.01)，说明IL-1β在牙周炎症中发挥作用。在炎症过程中，细胞抗原的持续性大量侵入刺激诱导免疫系统中T淋巴细胞和B淋巴细胞分化增殖，导致巨噬细胞大量活化，从而产生大量IL-1β。牙周炎症不仅有牙龈出血，且伴有牙槽骨的破坏及牙周袋形成，因此我们认为IL-1β不仅参与牙龈的炎症过程，也参与牙槽骨的破坏吸收过程。
参考文献
1.Offenbacher S,Pinnix K,Odl B.The measurement of interleukin l beta in inflamed periodontul tissues.J Dent Res,1988，67∶156
, http://www.100md.com
2.Wilton J M A,Bampton J L M,Griffith S,et al.Interleukin l beta levels in gingival crevicular fluid from adults with previous evidence of destructive periodontitis.J Clin Periodontol,1992，53∶57
3.Masada M P，Persson R,Kenney Js,et al.Measuremenl of interleukin l and 1β in gingival crevi-cular fluid:Implication for the poathogenesis of periodenfol disease.J Periodont Res,1990，25∶156
4.Charton J A,Lufer T A,Mergenhagen S E,et al.Increased thymocyte activating factor in human gingival crevicular fluid during gingival inflammation.Infect Immunol,1982，38∶1190
收稿日期:1999-04-19
, http://www.100md.com