097 纺锤体毒物检测实验*
作者：王琼 高沛永 楼铁柱
单位：军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室(北京 100850)
关键词：
现行致突变试验是针对遗传毒致癌物的检测而设计的 现行致突变试验是针对遗传毒致癌物的检测而设计的，细胞有丝分裂纺锤体毒物(spindle poison,SP)的初始作用终点，是微管蛋白构成的纺锤丝等有丝分裂装置，并不是DNA和染色体，因此会被漏检。SP损伤纺锤体后使染色体丢失，诱发子细胞染色体数目改变，如产生多倍体(pol)、非整倍体，使遗传物质在子细胞中分配不平衡，引发癌症等严重后果。到1997年第4届人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH4)推荐的标准试验组合中，仍没有包含1个专门检测SP的独立试验。我们对SP检测的实验研究分为两部分，一是对纺锤体形态损伤的直接观察；二是对SP诱发的非整倍体、微核的检查，并用流式细胞术做了DAN含量的测试。我们选用的诱变剂都是国际权威机构认可的非遗传毒致癌物，如石棉、糖精、雌二醇、利血平、偏二甲基肼等。对偏二甲基肼、雌二醇、利血平、糖精、石棉等的实验研究说明，这些非遗传毒致癌物均可被完整中期细胞染色体计数实验方法检查出它们诱发的染色体数目异常。CBMN实验也获阳性结果。流式细胞术虽然也能检出非整倍体的发生，但不如前两种实验方法灵敏。因此我们建议，将相对简便的完整中期细胞染色体计数，作为检测SP的试验方法。这种试验在一般实验室均可进行。其技术关键是减弱低渗处理(0.7%KCl，2～3min)，要确保在完整细胞中计数染色体，避免人为因素的影响。
*国家自然科学基金资助项目(39570847), 百拇医药
单位：军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室(北京 100850)
关键词：
现行致突变试验是针对遗传毒致癌物的检测而设计的 现行致突变试验是针对遗传毒致癌物的检测而设计的，细胞有丝分裂纺锤体毒物(spindle poison,SP)的初始作用终点，是微管蛋白构成的纺锤丝等有丝分裂装置，并不是DNA和染色体，因此会被漏检。SP损伤纺锤体后使染色体丢失，诱发子细胞染色体数目改变，如产生多倍体(pol)、非整倍体，使遗传物质在子细胞中分配不平衡，引发癌症等严重后果。到1997年第4届人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH4)推荐的标准试验组合中，仍没有包含1个专门检测SP的独立试验。我们对SP检测的实验研究分为两部分，一是对纺锤体形态损伤的直接观察；二是对SP诱发的非整倍体、微核的检查，并用流式细胞术做了DAN含量的测试。我们选用的诱变剂都是国际权威机构认可的非遗传毒致癌物，如石棉、糖精、雌二醇、利血平、偏二甲基肼等。对偏二甲基肼、雌二醇、利血平、糖精、石棉等的实验研究说明，这些非遗传毒致癌物均可被完整中期细胞染色体计数实验方法检查出它们诱发的染色体数目异常。CBMN实验也获阳性结果。流式细胞术虽然也能检出非整倍体的发生，但不如前两种实验方法灵敏。因此我们建议，将相对简便的完整中期细胞染色体计数，作为检测SP的试验方法。这种试验在一般实验室均可进行。其技术关键是减弱低渗处理(0.7%KCl，2～3min)，要确保在完整细胞中计数染色体，避免人为因素的影响。
*国家自然科学基金资助项目(39570847), 百拇医药