复方葆春袋泡茶质量标准研究
作者：熊龙花 黄慧成
单位：南昌 330003 南昌市药品检验所
关键词：五味子乙素；淫羊藿；五味子；女贞子；薄层色谱鉴别
中国现代应用药学990419 摘要 目的：制订复方葆春袋泡茶质量标准。方法：双波长薄层扫描法测定了五味子乙素的含量，对淫羊藿、五味子、女贞子进行了薄层色谱鉴别。结果：加样回收率平均为97.15%(RSD=1.2%,n=5)，标准曲线r=0.9991，重复性RSD=1.4%(n=6)，精密度RSD=2.3%(n=6)。结论：方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法之一。
Study of the quality standard of Fufang baochun daipaocha
Xiong Longhua(Xiong LH),Huang Huicheng(Huang HC)(Nanchang Institute for Drug Control,Nanchang 330003 )
, 百拇医药
ABSTRACT OBJECTIVE：To make the quality standard of Fufang baochun daipaocha.METHODS:The content of γ-Schixandrin in fufang baochun daipaocha was determined by TLC.The Longspur epimedium and fruit of chinese was identified by TLC.RESULTS:The average recovery is 97.15%(RSD=1.2%,n=5).The procedure had good linear relationship(r=0.9991),reproducibility(RSD=1.4%,n=6) and precision(RSD=2.3%,n=6).CONCLUSION:The method is accurate,reliable,and can be used for quality control of the preparation.
, 百拇医药
KEY WORDS γ-schixandrin,longspur,epimedium,fruit of chinese,TLC
复方葆春袋泡茶为中药保健制剂，收载于江西省药品标准内，由淫羊藿、五味子、女贞子、茶叶等多味中药组成，具有补肾壮阳，益阴固精的功效，临床主治由于肾亏引起的腰腿酸软、精神疲倦、头晕目眩、失眠健忘、阳萎、遗精、早泄。为了有效地控制其质量，我们对淫羊藿、五味子、女贞子进行了薄层色谱鉴别，用薄层扫描法测定了五味子乙素的含量。
1 仪器与试药
CS-930双波长薄层扫描仪、SPU-Ⅰ自动喷雾仪(日本岛津)；PBQ-Ⅰ薄层自动铺板器(重庆)；微量毛细管(美国Drummond公司)。
淫羊藿苷、五味子乙素、甲素、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。复方葆春袋泡茶为市售品，硅胶(青岛海洋化工厂)，其它均为分析纯。
, 百拇医药
2 薄层鉴别
2.1 淫羊藿的薄层色谱鉴别：取本品6g,置圆底烧瓶中，加乙醇50ml回流提取30min,滤过，滤液在水浴上蒸干，残渣加水20ml使溶解，置分液漏斗中，加氯仿振摇提取2次(15和15ml), 弃去氯仿液，再用水饱和的正丁醇提取3次(10,10和10ml),合并正丁醇，用0.5%氢氧化钠溶液洗涤2次(20和20ml),再用水洗至中性，正丁醇置水浴上蒸干，残渣用1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方取不含淫羊藿的其它药材，按本品制备工艺和上述供试品制备方法制成阴性对照液，吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一用0.5% CMC铺制的硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色荧光斑点；喷以三氯化铝试液，显相同的橙红色荧光斑点，而阴性对照无干扰，最低检测量为0.5μg。
, 百拇医药
2.2 五味子的薄层色谱鉴别：取本品6g,加氯仿30ml置水浴上回流提取1h,滤过，滤液用水洗涤3次(10,10和10ml),弃去水液，氯仿在水浴上蒸至约1ml,作为供试品溶液。另取五味子乙素、甲素对照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。再按处方取不含五味子的其它药材，照本品制备工艺和上述供试品的制备方法，制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各3μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗斑，而阴性对照无干扰，最低检测量为0.3μg。
2.3 女贞子的薄层色谱鉴别：取鉴别2.2项下的供试品溶液作供试品溶液；取齐墩果酸对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方取不含女贞子的其它药材，照本品制备工艺和鉴别2.2项下供试品溶液的制备方法，制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-醋酸(10∶20∶7∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓硫酸醋酐无水乙醇溶液(1∶1∶10)，在105℃烘约10min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而阴性对照无干扰，最低检测量为0.2μg。
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3 五味子乙素的薄层扫描测定
3.1 实验条件的选择：五味子乙素为脂溶性成分，文献[1]载其能溶于乙醇、甲醇，极易溶于苯、氯仿，故我们采用氯仿提取至无色。由于本品为复方制剂，干扰成分较多，分别参照文献[1]以苯-醋酸乙酯(7∶3)、甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶4∶0.4)、石油醚(30～60℃)-甲酸乙醋-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂分离，结果以硅胶GF254板和石油醚(30～60℃)-甲酸乙醋-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液分离效果较好，紫外灯(254nm)下定位。
五味子乙素对照品及样品200～370nm范围内扫描，测定波长λ=260nm，参比波长λ=250nm，狭缝1.2×1.2nm,SX=3。
3.2 空白试验：按处方取不含五味子的其它药材，照本品制备工艺和含量测定项下提取、分离、扫描，在五味子乙素相同的位置未见暗斑，按上述条件扫描也无吸收，结果见图1，2。
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图1 复方葆春袋泡茶TLC图
1-阴性对照；2-供试品；3-对照品
3.3 线性范围的考察：精密称取五味子乙素对照品5.09mg,加乙醇制成每1ml含1.018mg的溶液。吸取上述溶液2,4,6,8和10μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，照上述条件展开，扫描，测得各斑点峰面积，以点样量和峰面积进行回归处理，得回归方程：Y=0.4661X+0.0093,r=0.9991,点样量在2～10μg内与峰面积呈良好的线性关系。
图2 五味子乙素光谱图
1-阴性对照；2-供试品；3-对照品
3.4 稳定性试验：吸取供试品溶液5μl,点于同硅胶GF254薄层板上，展开，晾干，扫描测定峰面积，然后隔0.5,1,2,3和4h测定一次，将不同时间测得的峰面积经数据处理,RSD=0.67%,说明本品在4h基本稳定。
, 百拇医药
3.5 精密度试验：吸取供试品溶液分别点6个于同一薄层板上，各点均为5μl,展开，扫描测定斑点峰面积,RSD=1.4%。取供试品溶液分别点于6块薄层板上，各点均为5μl,分别展开，扫描测定斑点峰面积，结果RSD=2.3%。
3.6 重复性试验：精密称取同一批号样品6份各约6g,按3.7含量测定项下试验，分别测定其含量，测定结果经数据处理,RSD为2.3%。
3.7 样品含量测定：取本品6g,精密称定，置索氏提取器中，加氯仿60ml回流提取至无色。氯仿转移至分液漏斗中，用水洗涤3次(10,10和10ml)弃去水液，氯仿蒸干，残渣加氯仿使溶解，定容至5ml,作为供试品溶液。另取五味子乙素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液2和4μl,供试品溶液5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，照上述条件展开、取出、晾干，置紫外光灯下检视定位，扫扫描测定对照品和供试品斑点峰面积，计算含量，结果见表1。
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表1 复方葆春袋泡茶中五味子乙素测定结果(%) 批号
1
2
3
平均含量
RSD
960321
0.065
0.063
0.062
0.063
1.97
960407
, 百拇医药
0.061
0.060
0.062
0.061
1.34
960429
0.068
0.067
0.065
0.067
1.87
3.8 回收率试验：取已知含量的样品5份，加入一定量的五味子乙素对照品，照样品含量测定方法测定，结果见表2。表2 加样回收率测定结果 样品量
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(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
3.2450
2.04
1.8
3.77
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96.11
3.5449
2.23
1.6
3.80
98.13
3.3488
2.11
1.8
3.89
98.89
4.1025
2.59
, 百拇医药
1.3
3.85
96.62
4.0952
2.58
1.5
4.02
96.00
注：平均回收率97.15%，RSD=1.2%
4 讨 论
由于本品为复方制剂，干扰成分较多，薄层鉴别
(1)据淫羊藿苷不溶于氯仿[2]原理，用氯仿振摇提取除去大部分脂溶性成分。正丁醇提取后用稀碱水除去大部分水溶性及酸性成分，使鉴别1淫羊藿苷斑点清晰，无干扰，尽管上述处理使淫羊藿斑点清晰可见，但采用薄层扫描测定含量，背景上的一条色带对含量测定有明显影响，所以我们改用测定五味子乙素。由于本品原标准未制定薄层鉴别和含量测定，本研究建立的三个薄层鉴别和五味子乙素的含量测定方法，为控制其质量提供了有效的方法。
参考文献
[1] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别.北京：人民卫生出版社，1997∶120.
[2] 中国药典.一部.1995∶51.
收稿日期：1998-07-06, http://www.100md.com
单位：南昌 330003 南昌市药品检验所
关键词：五味子乙素；淫羊藿；五味子；女贞子；薄层色谱鉴别
中国现代应用药学990419 摘要 目的：制订复方葆春袋泡茶质量标准。方法：双波长薄层扫描法测定了五味子乙素的含量，对淫羊藿、五味子、女贞子进行了薄层色谱鉴别。结果：加样回收率平均为97.15%(RSD=1.2%,n=5)，标准曲线r=0.9991，重复性RSD=1.4%(n=6)，精密度RSD=2.3%(n=6)。结论：方法稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制方法之一。
Study of the quality standard of Fufang baochun daipaocha
Xiong Longhua(Xiong LH),Huang Huicheng(Huang HC)(Nanchang Institute for Drug Control,Nanchang 330003 )
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ABSTRACT OBJECTIVE：To make the quality standard of Fufang baochun daipaocha.METHODS:The content of γ-Schixandrin in fufang baochun daipaocha was determined by TLC.The Longspur epimedium and fruit of chinese was identified by TLC.RESULTS:The average recovery is 97.15%(RSD=1.2%,n=5).The procedure had good linear relationship(r=0.9991),reproducibility(RSD=1.4%,n=6) and precision(RSD=2.3%,n=6).CONCLUSION:The method is accurate,reliable,and can be used for quality control of the preparation.
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KEY WORDS γ-schixandrin,longspur,epimedium,fruit of chinese,TLC
复方葆春袋泡茶为中药保健制剂，收载于江西省药品标准内，由淫羊藿、五味子、女贞子、茶叶等多味中药组成，具有补肾壮阳，益阴固精的功效，临床主治由于肾亏引起的腰腿酸软、精神疲倦、头晕目眩、失眠健忘、阳萎、遗精、早泄。为了有效地控制其质量，我们对淫羊藿、五味子、女贞子进行了薄层色谱鉴别，用薄层扫描法测定了五味子乙素的含量。
1 仪器与试药
CS-930双波长薄层扫描仪、SPU-Ⅰ自动喷雾仪(日本岛津)；PBQ-Ⅰ薄层自动铺板器(重庆)；微量毛细管(美国Drummond公司)。
淫羊藿苷、五味子乙素、甲素、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。复方葆春袋泡茶为市售品，硅胶(青岛海洋化工厂)，其它均为分析纯。
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2 薄层鉴别
2.1 淫羊藿的薄层色谱鉴别：取本品6g,置圆底烧瓶中，加乙醇50ml回流提取30min,滤过，滤液在水浴上蒸干，残渣加水20ml使溶解，置分液漏斗中，加氯仿振摇提取2次(15和15ml), 弃去氯仿液，再用水饱和的正丁醇提取3次(10,10和10ml),合并正丁醇，用0.5%氢氧化钠溶液洗涤2次(20和20ml),再用水洗至中性，正丁醇置水浴上蒸干，残渣用1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方取不含淫羊藿的其它药材，按本品制备工艺和上述供试品制备方法制成阴性对照液，吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一用0.5% CMC铺制的硅胶H薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色荧光斑点；喷以三氯化铝试液，显相同的橙红色荧光斑点，而阴性对照无干扰，最低检测量为0.5μg。
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2.2 五味子的薄层色谱鉴别：取本品6g,加氯仿30ml置水浴上回流提取1h,滤过，滤液用水洗涤3次(10,10和10ml),弃去水液，氯仿在水浴上蒸至约1ml,作为供试品溶液。另取五味子乙素、甲素对照品，加氯仿制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。再按处方取不含五味子的其它药材，照本品制备工艺和上述供试品的制备方法，制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各3μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗斑，而阴性对照无干扰，最低检测量为0.3μg。
2.3 女贞子的薄层色谱鉴别：取鉴别2.2项下的供试品溶液作供试品溶液；取齐墩果酸对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方取不含女贞子的其它药材，照本品制备工艺和鉴别2.2项下供试品溶液的制备方法，制成阴性对照液。吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯-醋酸(10∶20∶7∶0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓硫酸醋酐无水乙醇溶液(1∶1∶10)，在105℃烘约10min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。而阴性对照无干扰，最低检测量为0.2μg。
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3 五味子乙素的薄层扫描测定
3.1 实验条件的选择：五味子乙素为脂溶性成分，文献[1]载其能溶于乙醇、甲醇，极易溶于苯、氯仿，故我们采用氯仿提取至无色。由于本品为复方制剂，干扰成分较多，分别参照文献[1]以苯-醋酸乙酯(7∶3)、甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶4∶0.4)、石油醚(30～60℃)-甲酸乙醋-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂分离，结果以硅胶GF254板和石油醚(30～60℃)-甲酸乙醋-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液分离效果较好，紫外灯(254nm)下定位。
五味子乙素对照品及样品200～370nm范围内扫描，测定波长λ=260nm，参比波长λ=250nm，狭缝1.2×1.2nm,SX=3。
3.2 空白试验：按处方取不含五味子的其它药材，照本品制备工艺和含量测定项下提取、分离、扫描，在五味子乙素相同的位置未见暗斑，按上述条件扫描也无吸收，结果见图1，2。
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图1 复方葆春袋泡茶TLC图
1-阴性对照；2-供试品；3-对照品
3.3 线性范围的考察：精密称取五味子乙素对照品5.09mg,加乙醇制成每1ml含1.018mg的溶液。吸取上述溶液2,4,6,8和10μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，照上述条件展开，扫描，测得各斑点峰面积，以点样量和峰面积进行回归处理，得回归方程：Y=0.4661X+0.0093,r=0.9991,点样量在2～10μg内与峰面积呈良好的线性关系。
图2 五味子乙素光谱图
1-阴性对照；2-供试品；3-对照品
3.4 稳定性试验：吸取供试品溶液5μl,点于同硅胶GF254薄层板上，展开，晾干，扫描测定峰面积，然后隔0.5,1,2,3和4h测定一次，将不同时间测得的峰面积经数据处理,RSD=0.67%,说明本品在4h基本稳定。
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3.5 精密度试验：吸取供试品溶液分别点6个于同一薄层板上，各点均为5μl,展开，扫描测定斑点峰面积,RSD=1.4%。取供试品溶液分别点于6块薄层板上，各点均为5μl,分别展开，扫描测定斑点峰面积，结果RSD=2.3%。
3.6 重复性试验：精密称取同一批号样品6份各约6g,按3.7含量测定项下试验，分别测定其含量，测定结果经数据处理,RSD为2.3%。
3.7 样品含量测定：取本品6g,精密称定，置索氏提取器中，加氯仿60ml回流提取至无色。氯仿转移至分液漏斗中，用水洗涤3次(10,10和10ml)弃去水液，氯仿蒸干，残渣加氯仿使溶解，定容至5ml,作为供试品溶液。另取五味子乙素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液2和4μl,供试品溶液5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，照上述条件展开、取出、晾干，置紫外光灯下检视定位，扫扫描测定对照品和供试品斑点峰面积，计算含量，结果见表1。
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表1 复方葆春袋泡茶中五味子乙素测定结果(%) 批号
1
2
3
平均含量
RSD
960321
0.065
0.063
0.062
0.063
1.97
960407
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0.061
0.060
0.062
0.061
1.34
960429
0.068
0.067
0.065
0.067
1.87
3.8 回收率试验：取已知含量的样品5份，加入一定量的五味子乙素对照品，照样品含量测定方法测定，结果见表2。表2 加样回收率测定结果 样品量
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(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
3.2450
2.04
1.8
3.77
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96.11
3.5449
2.23
1.6
3.80
98.13
3.3488
2.11
1.8
3.89
98.89
4.1025
2.59
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1.3
3.85
96.62
4.0952
2.58
1.5
4.02
96.00
注：平均回收率97.15%，RSD=1.2%
4 讨 论
由于本品为复方制剂，干扰成分较多，薄层鉴别
(1)据淫羊藿苷不溶于氯仿[2]原理，用氯仿振摇提取除去大部分脂溶性成分。正丁醇提取后用稀碱水除去大部分水溶性及酸性成分，使鉴别1淫羊藿苷斑点清晰，无干扰，尽管上述处理使淫羊藿斑点清晰可见，但采用薄层扫描测定含量，背景上的一条色带对含量测定有明显影响，所以我们改用测定五味子乙素。由于本品原标准未制定薄层鉴别和含量测定，本研究建立的三个薄层鉴别和五味子乙素的含量测定方法，为控制其质量提供了有效的方法。
参考文献
[1] 吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别.北京：人民卫生出版社，1997∶120.
[2] 中国药典.一部.1995∶51.
收稿日期：1998-07-06, http://www.100md.com