中药鳖甲品种鉴别的研究
作者：徐玲玲 胡蓓莉
单位：徐玲玲(上海 200437 上海中医药大学附属岳阳医院)；胡蓓莉(上海 200332 上海中医药大学)
关键词：鳖甲；生药形态鉴别；蛋白电泳
中国现代应用药学990411 摘要 目的：为了探索不同种源中药鳖甲的鉴别方法。方法：应用生药形态学和蛋白电泳实验方法对不同种源鳖甲进行鉴别。结果：5种不同种源的鳖甲在生药形态学上有明显的区别。蛋白电泳实验表明不同种源的鳖甲具有不同的特征，其结果与形态学上区别相吻合。结论：生药形态学结合蛋白电泳实验可作为鉴别鳖甲品种的鉴定方法。
Identification study of different breed of turtle(A Chimese traditional medicine)
, 百拇医药 Xu Lingling(Xu LL),Hu Peili(Hu PL)(Yue Yang Hospital,Shanghai College of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200043)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the differential method of different breed of turtle.METHOD:Pharmacognosy morphology and electrophoresis were used to identify different breed of turtle.RESULTS:There were significant morphological difference between five breed of turtle.Electrophoresis of protein indicated that different breed of turtle had different characteristic.The result was similar to the morphological difference.CONCLUSION:Pharmacognosy morphology,as well as the electrophoresis of protein,can be used to identify differcnt breed of turtle.
, 百拇医药
KEY WORDS turtle,pharmacognosy morphology identification,electrophoresis of protein
鳖甲为常用中药之一，除临床的配方使用外，尚在人参鳖甲煎丸、参桂鹿茸丸等数种中成药中应用。其动物来源：中国药典95版明确规定为鳖科动物鳖Trionyx sinensis Witgmam的背甲[1]。但商品鳖甲中带有非中国药典规定的品种鳖的背甲混杂其中。为保证药品质量，我们对商品鳖甲中混入的非中国药典品种鳖背甲进行收集，共收集到非中华鳖的背甲样品10份。经鉴定分属4种，本文对上述样品进行生药学研究和蛋白电泳实验，现总结如下。
1 实验材料
1.1 药品及试剂
丙烯酰胺(Acr)(上海生化所西巴斯生物技术开发公司)；甲叉双丙烯酰胺(Bis)(Flukachenic AG CH-9470 Buchs)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)(上海复旦大学科教器材公司)；过硫酸铵(AP)(华美生物公司)；四甲基乙二胺(TEMED)(Pormga Corporration 608-274-4330 malison WL 53711-5399 USA)；甘氨酸、溴酚蓝、盐酸、无水乙醇、乙酸均为分析纯。考马斯亮蓝R250，上海试剂站，Fluka进口分装。
, http://www.100md.com
1.2 仪器
DY-A电泳仪(上海生化所西巴斯生物技术开发公司)；V16-夹心式垂直电泳槽(上海精益有机玻璃制品厂)。80-1离心机(上海手术器械厂)。
1.3 实验样品
中华鳖甲：鳖科动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann的背甲共10份样品。
缘板鳖甲：鳖科动物缘板鳖Lissemys punctata Scutata(sohoepff)的背甲共4份。
鼋甲：鳖科动物鼋Pelochlys bibroni(owen)的背甲，共1份样品。
软鳖甲：鳖科动物软鳖甲Trionyx catilaginens(Bod-daert)的背甲，共2份样品。
, 百拇医药
宏鳖甲：鳖科动物宏鳖Trionyx hurum Gray共3份样品。
上述材料均由市场商品鳖背甲收购时拣出，经上海自然博物馆马积藩教授鉴定。
2 实验方法
2.1 生药形态鉴别
根据中国药典95版附录记载的药材性状鉴别规定要求进行生药形态鉴别。
2.2 蛋白电泳(PAGE)法鉴别
2.2.1 样品液的制备：将上述样品分别打成细粉，以3种不同的方式处理样品：①缓冲液提取：各取鳖甲粉1g加3ml稀释2倍的电极缓冲液；电极缓冲液:Tris 6g甘氨酸28.8 g,加水至1 000 ml,pH为8.3。②酸性蛋白液提取：各取鳖甲粉1g加3ml酸性蛋白提取液；酸性蛋白提取液：柠檬酸80mmol/L,Na2HPO4 32mmol/L,抗坏血酸液5mmol/L,巯基乙醇10mmol/L pH为2.8。③碱性蛋白提取液：各取鳖甲粉1g加3ml碱性蛋白提取液；碱性蛋白提取液:Tris HCl 0.1mol/L,蔗糖0.5mol/L,抗坏血酸0.1mol/L巯基乙醇10mmol/L,pH为8.0。以上各样品，分别置乳钵中研磨成匀浆，倒入5ml离心管中超声提取30min,离心15min(3 000 r/min)，取上清液与40%蔗糖溶液等比例混匀，置冰箱中备用。
, 百拇医药
2.2.2 电泳操作：本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamide-gelectrep Horesis简称PAGE)。
3 实验结果
3.1 生药形态鉴定结果
3.1.1 鳖甲：背甲椭圆形，长10～20cm,宽7～14cm。表面有不规则微凹的网纹，前端颈板两侧各有骨刺1～5个，颈板与第一对肋板间有的样品可见两个圆形空洞，第一对肋板间椎板1块，长大于宽，第一对肋板外缘小于中缝，肋板发达，最后一对肋板相接成中逢，肋骨伸出肋板缘。
3.1.2 缘板鳖甲：背甲倒卵圆形，上宽下窄，边缘微波状，长15～23cm,宽5～17cm,表面密布颗粒状突起，颈板比任何一个后缘板都大，颈板两侧无骨刺，第一对肋板间椎板两块，宽大于长。肋板8对，最后2对肋板披此相接。以最后一对中缝最长，肋骨8条不伸出肋板之外或微伸出。
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3.1.3 鼋甲：背甲近圆形，长24～129cm,宽22～74cm,整个背盘表面粗糙，有小凹沟和蠕虫纹。第一对肋板间仅有一块椎板，椎板7～8块，肋板8对，最后一对彼此相接成中缝。
3.1.4 宏鳖甲：背甲卵圆形，或椭圆形，长14～40cm,宽12～36cm,表面布满长短不一的纵棱和细沟纹，第一对肋板间常有二枚椎板。第一对肋骨呈浆状伸出板缘，第8对肋骨极细小。
3.1.5 软鳖甲：背甲卵圆形或椭圆形，长20～60cm,宽28～56cm,浅黑褐色，布满黑褐色网纹和蠕虫纹，前端圆后端平切，侧缘波状，颈板新月形，第一对肋板仅一枚椎板，第8对肋板后半部彼此相连于中缝，肋骨粗大，略超出肋板缘。
五种鳖甲的形态检索表
1 第一对肋板板间有二枚椎板
2 背甲呈倒卵形，上宽下窄，肋骨不伸出肋板外................................缘板鳖甲
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2 卵圆形，长卵圆形，第一对肋骨呈浆状伸出板缘，第8对肋骨极细小...............宏鳖甲
1 第一对肋板间有一枚椎板
2椭圆形，表面有不规则的网纹，第一对肋板外缘小于中缝，最后一对肋板相接成中缝，肋骨伸出肋板缘
3背甲椭圆形，小型，长14～24cm,宽7～10cm表面有不规则的微凹的网纹..............鳖甲
3背甲近圆形，大型，长大于24cm，整个背盘粗糙，表面有小凹沟和蠕虫纹............鼋甲
2 卵圆形，前端圆后端平切，肋骨粗大，略超过肋板缘............................软鳖甲
, http://www.100md.com
3.2 蛋白电泳(PAGE)分析结果
从电泳图谱可见，样品经3种不同方法处理后所得的电泳图谱均有差异，可根据电泳谱带的数目、分布区域、着色程度及泳动率等方面来加以区别不同的鳖甲。
4 小结与讨论
4.1 本次实验共收集中华鳖背甲10份，非中华鳖类背甲4种样品共10份，并对非中华鳖类的背甲进行了生药学鉴定，共有以下4个品种：①缘板鳖甲Lissemys punctata scutata(Schoepff)；②鼋鳖甲Pelochelys bibroni(Owen)；③软鳖甲Trionys cartilagines(Boddaert)；④宏鳖甲Trionys hurum(Gray)。
4.2 5种不同品种的样品从性状特征看，除表面的色泽厚薄有时略有变化外，其肋板、椎板、肋骨的数目、形态、相对大小及排列位置均有较为明显的区别且稳定，依据形态研究的情况，本实验列出了鉴别5种不同鳖的背甲的药材检索表。
, 百拇医药
4.3 对5种不同品种的鳖甲样品以聚丙烯酰胺凝胶电泳法试验表明，各种不同种源的鳖甲含有相同的蛋白质，但其含量不尽相同。另外，不同种源的鳖甲也具有不同的蛋白质成分，本实验也证明，动物种间所含蛋白质种类是稳定的，因而本次蛋白质电泳的结果与形态学上的区别相吻合，可作为鉴别鳖甲品种真伪的鉴定方法。
4.4 鳖甲是常用中药之一，早记戴于《神农本草经》，列为中品。《中国药典》95年版仅收载鳖种动物鳖Trongxinem Witgmau的背甲作鳖甲用。历代本草对鳖甲早有论述，李时珍《本草纲目》则博采诸家学说加以论述，指出鳖有鳖、纳鳖、能鳖、珠鳖、朱鳖、鼋等数种，并对纳鳖、能鳖都指出有毒，与鳖甲不同[2]。《本草逢源》：鼋甲功同鳖甲，但鳖走肝而鼋走脾，故治疗上稍有不同。由于当时缺乏系统的动物分类学知识，因此描述和分类尚不明确。鳖甲由于医疗市场需求量日趋增加，因此来源也日趋复杂，所以对鳖甲的研究是十分必要的，这些都需要生物学、生物化学、化学、药理学、临床医学等各门学科加以研究，希望能引起有关部门的重视。
参考文献
[1] 中国药典.一部.1995∶341.
[2] 李明珍.本草纲目.第一版.第四册.北京：人民卫生出版社，1981∶2507.
收稿日期：1998-05-17, http://www.100md.com
单位：徐玲玲(上海 200437 上海中医药大学附属岳阳医院)；胡蓓莉(上海 200332 上海中医药大学)
关键词：鳖甲；生药形态鉴别；蛋白电泳
中国现代应用药学990411 摘要 目的：为了探索不同种源中药鳖甲的鉴别方法。方法：应用生药形态学和蛋白电泳实验方法对不同种源鳖甲进行鉴别。结果：5种不同种源的鳖甲在生药形态学上有明显的区别。蛋白电泳实验表明不同种源的鳖甲具有不同的特征，其结果与形态学上区别相吻合。结论：生药形态学结合蛋白电泳实验可作为鉴别鳖甲品种的鉴定方法。
Identification study of different breed of turtle(A Chimese traditional medicine)
, 百拇医药 Xu Lingling(Xu LL),Hu Peili(Hu PL)(Yue Yang Hospital,Shanghai College of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200043)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the differential method of different breed of turtle.METHOD:Pharmacognosy morphology and electrophoresis were used to identify different breed of turtle.RESULTS:There were significant morphological difference between five breed of turtle.Electrophoresis of protein indicated that different breed of turtle had different characteristic.The result was similar to the morphological difference.CONCLUSION:Pharmacognosy morphology,as well as the electrophoresis of protein,can be used to identify differcnt breed of turtle.
, 百拇医药
KEY WORDS turtle,pharmacognosy morphology identification,electrophoresis of protein
鳖甲为常用中药之一，除临床的配方使用外，尚在人参鳖甲煎丸、参桂鹿茸丸等数种中成药中应用。其动物来源：中国药典95版明确规定为鳖科动物鳖Trionyx sinensis Witgmam的背甲[1]。但商品鳖甲中带有非中国药典规定的品种鳖的背甲混杂其中。为保证药品质量，我们对商品鳖甲中混入的非中国药典品种鳖背甲进行收集，共收集到非中华鳖的背甲样品10份。经鉴定分属4种，本文对上述样品进行生药学研究和蛋白电泳实验，现总结如下。
1 实验材料
1.1 药品及试剂
丙烯酰胺(Acr)(上海生化所西巴斯生物技术开发公司)；甲叉双丙烯酰胺(Bis)(Flukachenic AG CH-9470 Buchs)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)(上海复旦大学科教器材公司)；过硫酸铵(AP)(华美生物公司)；四甲基乙二胺(TEMED)(Pormga Corporration 608-274-4330 malison WL 53711-5399 USA)；甘氨酸、溴酚蓝、盐酸、无水乙醇、乙酸均为分析纯。考马斯亮蓝R250，上海试剂站，Fluka进口分装。
, http://www.100md.com
1.2 仪器
DY-A电泳仪(上海生化所西巴斯生物技术开发公司)；V16-夹心式垂直电泳槽(上海精益有机玻璃制品厂)。80-1离心机(上海手术器械厂)。
1.3 实验样品
中华鳖甲：鳖科动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann的背甲共10份样品。
缘板鳖甲：鳖科动物缘板鳖Lissemys punctata Scutata(sohoepff)的背甲共4份。
鼋甲：鳖科动物鼋Pelochlys bibroni(owen)的背甲，共1份样品。
软鳖甲：鳖科动物软鳖甲Trionyx catilaginens(Bod-daert)的背甲，共2份样品。
, 百拇医药
宏鳖甲：鳖科动物宏鳖Trionyx hurum Gray共3份样品。
上述材料均由市场商品鳖背甲收购时拣出，经上海自然博物馆马积藩教授鉴定。
2 实验方法
2.1 生药形态鉴别
根据中国药典95版附录记载的药材性状鉴别规定要求进行生药形态鉴别。
2.2 蛋白电泳(PAGE)法鉴别
2.2.1 样品液的制备：将上述样品分别打成细粉，以3种不同的方式处理样品：①缓冲液提取：各取鳖甲粉1g加3ml稀释2倍的电极缓冲液；电极缓冲液:Tris 6g甘氨酸28.8 g,加水至1 000 ml,pH为8.3。②酸性蛋白液提取：各取鳖甲粉1g加3ml酸性蛋白提取液；酸性蛋白提取液：柠檬酸80mmol/L,Na2HPO4 32mmol/L,抗坏血酸液5mmol/L,巯基乙醇10mmol/L pH为2.8。③碱性蛋白提取液：各取鳖甲粉1g加3ml碱性蛋白提取液；碱性蛋白提取液:Tris HCl 0.1mol/L,蔗糖0.5mol/L,抗坏血酸0.1mol/L巯基乙醇10mmol/L,pH为8.0。以上各样品，分别置乳钵中研磨成匀浆，倒入5ml离心管中超声提取30min,离心15min(3 000 r/min)，取上清液与40%蔗糖溶液等比例混匀，置冰箱中备用。
, 百拇医药
2.2.2 电泳操作：本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamide-gelectrep Horesis简称PAGE)。
3 实验结果
3.1 生药形态鉴定结果
3.1.1 鳖甲：背甲椭圆形，长10～20cm,宽7～14cm。表面有不规则微凹的网纹，前端颈板两侧各有骨刺1～5个，颈板与第一对肋板间有的样品可见两个圆形空洞，第一对肋板间椎板1块，长大于宽，第一对肋板外缘小于中缝，肋板发达，最后一对肋板相接成中逢，肋骨伸出肋板缘。
3.1.2 缘板鳖甲：背甲倒卵圆形，上宽下窄，边缘微波状，长15～23cm,宽5～17cm,表面密布颗粒状突起，颈板比任何一个后缘板都大，颈板两侧无骨刺，第一对肋板间椎板两块，宽大于长。肋板8对，最后2对肋板披此相接。以最后一对中缝最长，肋骨8条不伸出肋板之外或微伸出。
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3.1.3 鼋甲：背甲近圆形，长24～129cm,宽22～74cm,整个背盘表面粗糙，有小凹沟和蠕虫纹。第一对肋板间仅有一块椎板，椎板7～8块，肋板8对，最后一对彼此相接成中缝。
3.1.4 宏鳖甲：背甲卵圆形，或椭圆形，长14～40cm,宽12～36cm,表面布满长短不一的纵棱和细沟纹，第一对肋板间常有二枚椎板。第一对肋骨呈浆状伸出板缘，第8对肋骨极细小。
3.1.5 软鳖甲：背甲卵圆形或椭圆形，长20～60cm,宽28～56cm,浅黑褐色，布满黑褐色网纹和蠕虫纹，前端圆后端平切，侧缘波状，颈板新月形，第一对肋板仅一枚椎板，第8对肋板后半部彼此相连于中缝，肋骨粗大，略超出肋板缘。
五种鳖甲的形态检索表
1 第一对肋板板间有二枚椎板
2 背甲呈倒卵形，上宽下窄，肋骨不伸出肋板外................................缘板鳖甲
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2 卵圆形，长卵圆形，第一对肋骨呈浆状伸出板缘，第8对肋骨极细小...............宏鳖甲
1 第一对肋板间有一枚椎板
2椭圆形，表面有不规则的网纹，第一对肋板外缘小于中缝，最后一对肋板相接成中缝，肋骨伸出肋板缘
3背甲椭圆形，小型，长14～24cm,宽7～10cm表面有不规则的微凹的网纹..............鳖甲
3背甲近圆形，大型，长大于24cm，整个背盘粗糙，表面有小凹沟和蠕虫纹............鼋甲
2 卵圆形，前端圆后端平切，肋骨粗大，略超过肋板缘............................软鳖甲
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3.2 蛋白电泳(PAGE)分析结果
从电泳图谱可见，样品经3种不同方法处理后所得的电泳图谱均有差异，可根据电泳谱带的数目、分布区域、着色程度及泳动率等方面来加以区别不同的鳖甲。
4 小结与讨论
4.1 本次实验共收集中华鳖背甲10份，非中华鳖类背甲4种样品共10份，并对非中华鳖类的背甲进行了生药学鉴定，共有以下4个品种：①缘板鳖甲Lissemys punctata scutata(Schoepff)；②鼋鳖甲Pelochelys bibroni(Owen)；③软鳖甲Trionys cartilagines(Boddaert)；④宏鳖甲Trionys hurum(Gray)。
4.2 5种不同品种的样品从性状特征看，除表面的色泽厚薄有时略有变化外，其肋板、椎板、肋骨的数目、形态、相对大小及排列位置均有较为明显的区别且稳定，依据形态研究的情况，本实验列出了鉴别5种不同鳖的背甲的药材检索表。
, 百拇医药
4.3 对5种不同品种的鳖甲样品以聚丙烯酰胺凝胶电泳法试验表明，各种不同种源的鳖甲含有相同的蛋白质，但其含量不尽相同。另外，不同种源的鳖甲也具有不同的蛋白质成分，本实验也证明，动物种间所含蛋白质种类是稳定的，因而本次蛋白质电泳的结果与形态学上的区别相吻合，可作为鉴别鳖甲品种真伪的鉴定方法。
4.4 鳖甲是常用中药之一，早记戴于《神农本草经》，列为中品。《中国药典》95年版仅收载鳖种动物鳖Trongxinem Witgmau的背甲作鳖甲用。历代本草对鳖甲早有论述，李时珍《本草纲目》则博采诸家学说加以论述，指出鳖有鳖、纳鳖、能鳖、珠鳖、朱鳖、鼋等数种，并对纳鳖、能鳖都指出有毒，与鳖甲不同[2]。《本草逢源》：鼋甲功同鳖甲，但鳖走肝而鼋走脾，故治疗上稍有不同。由于当时缺乏系统的动物分类学知识，因此描述和分类尚不明确。鳖甲由于医疗市场需求量日趋增加，因此来源也日趋复杂，所以对鳖甲的研究是十分必要的，这些都需要生物学、生物化学、化学、药理学、临床医学等各门学科加以研究，希望能引起有关部门的重视。
参考文献
[1] 中国药典.一部.1995∶341.
[2] 李明珍.本草纲目.第一版.第四册.北京：人民卫生出版社，1981∶2507.
收稿日期：1998-05-17, http://www.100md.com