清脑片对大鼠记忆力和抗氧化酶、游离氨基酸的影响
作者：温仲民 包仕尧
单位：苏州医学院附属二院神经内科，苏州，215004
关键词：清脑片；记忆力；抗衰老
苏州医学院学报ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SUZHOU1999年 第19卷 第8期 Vol 摘要 用D-半乳糖皮下注射3月龄大鼠制成衰老模型，用清脑片进行治疗，同正常3月龄大鼠和未经治疗致衰老大鼠作对照，结果清脑片能使大鼠记忆力明显提高，明显拮抗D-半乳糖引起的不同脑区SOD、环氧化酶活性的下降，不同程度地增加衰老模型大鼠脑谷氨酸、天门冬氨酸的含量，降低大鼠纹状体中γ氨基丁酸含量。治疗组同正常对照组比较差异无显著性，同致衰老组比较差异显著(P<0.05)。结论：清脑片具有增加大鼠记忆力和抗衰老作用。
中图法分类 R977.9
, http://www.100md.com The Effect of “ Qin Niao Pian” on the Memory and Brain Antioxidase Free Amino Acid in Rats
Wen Zhongming, Bao Shiyao
Department of Neurology, the Second Hospital Affiliated to Suzhou Medical College, Suzhou,215004
Abstract Purpose To study the effect and mechanism of “QinNaoPian” (QNP) on improving memory and preventing senility. Methods The aging model was induced by SC D-galactose in 3-month old rats, and was treated with QNP, The 3-month old rats and the aging-model without treatment were used as the control. The memory of rats and superoxide dismutase (SOD)、 catalase (CAT)、 aspartic (Asp)、 glutamic (Glu)、γ-aminobutyric acid in five regions of rats brains were measured. Results QNP improved memory,increased SOD、CAT、Asp、Glu, decreased GABA in different brain regions. There was a significant difference between the aging model group with treatment and the aging model without treatment, however, there was no significant difference between aging model with treatment and the normal group. Conclusions QNP can benifit the brain by improving memory and preventing senility.
, 百拇医药
Key words QinNaoPian; memory; antioxidase; free amino acid
清脑片(QNP)是应用于临床多年的经验方，对于老年性痴呆、脑动脉硬化引起的记忆力减退、认知障碍及智能减退等症状有显著效果。为了进一步验证其疗效，我们于1998年3～7月，用皮下注射D-半乳糖诱导成大鼠衰老模型，用清脑片进行治疗，检测大鼠记忆力，测定脑内皮层、小脑、海马、下丘脑、纹状体内超氧化物岐化酶(SOD)、环氧化酶(CAT)活性以及谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)含量，探讨清脑片的益智、抗衰老作用。
1 实验资料1.1 动物模型：Wistar大鼠由苏州医学院实验动物中心提供40只3月龄，均为雄性，体重130～165g。分为4组：①青龄对照组：10只。②青龄衰老模型对照组：10只，皮下注射D-半乳糖50mg/kg*d-1×7周。③青龄衰老模型灌服小剂量清脑片组：10只，皮下注射D-半乳糖50mg/kg*d-1×7周，同时灌服清脑片0.17g/kg*d-1×7周。④青龄衰老模型灌服大剂量清脑片组：10只，SCD-半乳糖50mg/kg*d-1×7周。
, http://www.100md.com
1.2 实验方法：利用Y型电迷宫，参照文献[1]方法训练。参照大鼠脑立体定位图谱[2]分离大鼠大脑皮层、小脑、纹状体、海马、下丘脑，测定各组织匀浆中SOD和CAT活性，按试剂盒说明书操作(试剂盒由南京建成生物工程研究所提供)。脑组织中Asp、Glu和GABA参照蒋滢[3]等的方法测定。
1.3 结果
1.3.1 清脑片对致衰老大鼠记忆力的影响：结果表明，致衰老大鼠记忆力明显下降，在迷宫中表现结果见表1。
1.3.2 清脑片对致衰老大鼠各脑区抗氧化酶的影响：见表2。
1.3.3 清脑片对致衰老大鼠各脑区游离氨基酸(FAA)的影响见表3。
表1 大鼠迷宫试验测定结果(n=10,
±s) 组 别
, 百拇医药
正确次数
正确率(%)
跑至安全区所用时间(s)
青龄组
10.41±1.12*
68.31±8.31*
8.81±1.42**
青龄致衰老组
9.20±1.53
60.21±9.34
12.44±2.53
清脑片小剂量组
, http://www.100md.com
11.00±2.00*
74.08±11.37*
9.31±1.64**
清脑片大剂量组
11.52±1.53**
76.55±10.55**
8.60±1.53**
*P<0.05，**P<0.01表2 清脑片对大鼠不同脑区SOD、CAT(U/mg.protein)的影响(±s，n=10)
皮层
, http://www.100md.com
小脑
海马
纹状体
下丘脑
CAT
青龄组
6.50±0.62*
11.40±0.32
5.80±0.42*
7.03±0.45**
10.24±0.28**
青龄致衰老组
, 百拇医药
5.10±0.58
11.20±0.28
4.30±0.37
4.12±0.33
6.28±0.31
清脑片小剂量组
6.30±0.58*
10.90±0.34
5.40±0.36*
6.90±0.53**
10.20±0.30**
, http://www.100md.com 清脑片大剂量组
6.49±0.44*
11.20±0.38
5.50±0.48*
7.05±0.58**
10.50±0.38**
青龄组
68.00±7.34*
70.38±5.34
83.34±5.47**
90.21±7.43**
80.21±4.34*
, 百拇医药
SOD
青龄致衰老组
56.63±4.30
68.45±3.24
67.38±4.33
63.34±6.51
68.28±5.36
清脑片小剂量组
65.00±7.35*
69.45±4.31
78.34±5.40**
88.20±7.31**
, http://www.100md.com
76.33±5.47*
清脑片大剂量组
68.32±7.43*
70.34±5.50
82.44±5.40**
90.20±6.44**
78.31±4.80*
*P<0.05；**P<0.01表3 清脑片对大鼠各脑区游离氨基酸的影响(μmol/g组织湿重，±s)
皮层
, 百拇医药 小脑
海马
纹状体
下丘脑
Asp
青龄组
3.14±0.67
2.40±0.58
2.70±0.48*
2.40±0.44*
3.17±0.53
青龄致衰老组
2.94±0.58
, 百拇医药
1.87±0.55
1.48±0.44
1.70±0.38
2.48±0.50
清脑片小剂量组
2.90±0.55
2.10±0.53
2.50±0.43*
2.30±0.41*
2.45±0.30
清脑片大剂量组
3.10±0.43
, 百拇医药
2.00±0.48
2.60±0.55*
2.45±0.48*
2.80±0.70
Glu
青龄组
8.30±0.45**
6.30±0.55
7.28±0.41**
5.22±0.58*
5.60±0.52
青龄致衰老组
, 百拇医药
7.10±0.47
5.59±0.43
6.10±0.40
4.39±0.45
5.38±0.72
清脑片小剂量组
8.20±0.30*
5.60±0.44
6.99±0.43*
5.10±0.58*
5.28±0.53
清脑片大剂量组
, 百拇医药
8.39±0.44**
5.94±0.70
7.19±0.41*
5.23±0.44*
5.40±0.72
GABA
青龄组
3.80±0.34
1.12±0.34
3.30±0.26
3.97±0.38*
4.58±0.48
, http://www.100md.com
青龄致衰老组
3.60±0.25
1.17±0.40
3.41±0.33
4.42±0.31
5.03±0.33
清脑片小剂量组
3.58±0.24
1.34±0.50
2.89±0.38
4.74±0.35*
4.88±0.33
, 百拇医药
清脑片大剂量组
3.60±0.44
1.30±0.40
3.11±0.44
4.88±0.31*
4.90±0.31
*P<0.05；**P<0.012 讨论
清脑片主要成份有吡硫醇、珍珠粉和硫酸软骨素等多种成份，长期临床应用证实其改善智能和延缓抗衰老有显效。我们曾用东莨菪碱、亚硝酸钠和30%乙醇分成制成小鼠记忆获得障碍、记忆巩固障碍和记忆再现障碍模型，经灌服清脑片后，小鼠记忆获得、巩固和再现功能均能得到改善。
衰老的自由基学说[4]认为，随着机体的衰老，体内出现自由基产生过多和清除自由基能力的下降，而应用自由基消除剂能达到延缓衰老的作用[5]。本实验结果表明，清脑片能明显提高衰老模型大鼠中不同脑区的SOD和CAT活性。说明清脑片能增加抗氧化酶对自由基的清除能力，从而减轻或阻断脂质过氧化反应，防止自由基对细胞的损伤。衰老机体中脑内兴奋性氨基酸水平降低，而抑制性氨基酸升高[6]，结果还表明，清脑片能增加衰老模型大鼠海马、纹状体中Asp和皮层、海马、纹状体中Glu水平，降低纹状体GABA水平，提示清脑片能调节中枢兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸含量。谷氨酸和天门冬氨酸是两种主要的兴奋性氨基酸，中枢神经内有特异性受体，统称谷氨酸受体(Glu-R)。这两种氨基酸均可选择性地与递质受体结合，激活N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDA-R)，使钙通道开放，钙离子内流增加，调节着兴奋性突触的传递和发育过程中突触的可塑性，参与学习和记忆的形成[7]。GABA是中枢神经系统的一种抑制性递质，采用γ-氨基丁酸受体(GAR)拮抗剂，可以改善由亚硝酸钠所致的记忆巩固障碍和乙醇引起的记忆再现障碍，清脑片通过调节脑内氨基酸类递质水平，从而起到易化突触传导，促进信息获得和记忆巩固的作用，特别是海马区Glu和Asp含量的增加，对于促进学习和记忆具有重要作用。我们发现，大小两种剂量的清脑片治疗致衰老大鼠，其改善大鼠记忆力，对SOD、CAT及游离氨基酸的影响作用差别无显著性(P>0.05)，说明用较小剂量的清脑片治疗，就能达到良好的改善脑功能作用。
, 百拇医药
参考文献
1 李仪奎，主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：171～73
2 包新民，舒斯云.大鼠脑立体定位图谱.北京：人民卫生出版社，1991
3 蒋 滢，黄美英.人体游离氨基酸的超微量分析方法.氨基酸杂志，1986，18(2)∶151
4 Butterfield DA, et al. Free radical oxidation of brain proteins in accelerated serescence and its modulation by N-tert-butyl-alpha-plenylnitron. Proc Natl Acad Sci U S A， 1997，94(2)∶674
5 Yu Bp, et al. Can antioxidant supplementation slow the aging process? Biofactors, 1998，7(1-2)∶93
6 Robert Katzman. The aging brain. Arch Neurol,1997， 54∶1201
7 裴印权，苏 丹.NMDA受体和其拮抗剂的药理.中国药理学通报，1996，12∶303
(1998年11月25日收稿), http://www.100md.com
单位：苏州医学院附属二院神经内科，苏州，215004
关键词：清脑片；记忆力；抗衰老
苏州医学院学报ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SUZHOU1999年 第19卷 第8期 Vol 摘要 用D-半乳糖皮下注射3月龄大鼠制成衰老模型，用清脑片进行治疗，同正常3月龄大鼠和未经治疗致衰老大鼠作对照，结果清脑片能使大鼠记忆力明显提高，明显拮抗D-半乳糖引起的不同脑区SOD、环氧化酶活性的下降，不同程度地增加衰老模型大鼠脑谷氨酸、天门冬氨酸的含量，降低大鼠纹状体中γ氨基丁酸含量。治疗组同正常对照组比较差异无显著性，同致衰老组比较差异显著(P<0.05)。结论：清脑片具有增加大鼠记忆力和抗衰老作用。
中图法分类 R977.9
, http://www.100md.com The Effect of “ Qin Niao Pian” on the Memory and Brain Antioxidase Free Amino Acid in Rats
Wen Zhongming, Bao Shiyao
Department of Neurology, the Second Hospital Affiliated to Suzhou Medical College, Suzhou,215004
Abstract Purpose To study the effect and mechanism of “QinNaoPian” (QNP) on improving memory and preventing senility. Methods The aging model was induced by SC D-galactose in 3-month old rats, and was treated with QNP, The 3-month old rats and the aging-model without treatment were used as the control. The memory of rats and superoxide dismutase (SOD)、 catalase (CAT)、 aspartic (Asp)、 glutamic (Glu)、γ-aminobutyric acid in five regions of rats brains were measured. Results QNP improved memory,increased SOD、CAT、Asp、Glu, decreased GABA in different brain regions. There was a significant difference between the aging model group with treatment and the aging model without treatment, however, there was no significant difference between aging model with treatment and the normal group. Conclusions QNP can benifit the brain by improving memory and preventing senility.
, 百拇医药
Key words QinNaoPian; memory; antioxidase; free amino acid
清脑片(QNP)是应用于临床多年的经验方，对于老年性痴呆、脑动脉硬化引起的记忆力减退、认知障碍及智能减退等症状有显著效果。为了进一步验证其疗效，我们于1998年3～7月，用皮下注射D-半乳糖诱导成大鼠衰老模型，用清脑片进行治疗，检测大鼠记忆力，测定脑内皮层、小脑、海马、下丘脑、纹状体内超氧化物岐化酶(SOD)、环氧化酶(CAT)活性以及谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)含量，探讨清脑片的益智、抗衰老作用。
1 实验资料1.1 动物模型：Wistar大鼠由苏州医学院实验动物中心提供40只3月龄，均为雄性，体重130～165g。分为4组：①青龄对照组：10只。②青龄衰老模型对照组：10只，皮下注射D-半乳糖50mg/kg*d-1×7周。③青龄衰老模型灌服小剂量清脑片组：10只，皮下注射D-半乳糖50mg/kg*d-1×7周，同时灌服清脑片0.17g/kg*d-1×7周。④青龄衰老模型灌服大剂量清脑片组：10只，SCD-半乳糖50mg/kg*d-1×7周。
, http://www.100md.com
1.2 实验方法：利用Y型电迷宫，参照文献[1]方法训练。参照大鼠脑立体定位图谱[2]分离大鼠大脑皮层、小脑、纹状体、海马、下丘脑，测定各组织匀浆中SOD和CAT活性，按试剂盒说明书操作(试剂盒由南京建成生物工程研究所提供)。脑组织中Asp、Glu和GABA参照蒋滢[3]等的方法测定。
1.3 结果
1.3.1 清脑片对致衰老大鼠记忆力的影响：结果表明，致衰老大鼠记忆力明显下降，在迷宫中表现结果见表1。
1.3.2 清脑片对致衰老大鼠各脑区抗氧化酶的影响：见表2。
1.3.3 清脑片对致衰老大鼠各脑区游离氨基酸(FAA)的影响见表3。
表1 大鼠迷宫试验测定结果(n=10,
±s) 组 别, 百拇医药
正确次数
正确率(%)
跑至安全区所用时间(s)
青龄组
10.41±1.12*
68.31±8.31*
8.81±1.42**
青龄致衰老组
9.20±1.53
60.21±9.34
12.44±2.53
清脑片小剂量组
, http://www.100md.com
11.00±2.00*
74.08±11.37*
9.31±1.64**
清脑片大剂量组
11.52±1.53**
76.55±10.55**
8.60±1.53**
*P<0.05，**P<0.01表2 清脑片对大鼠不同脑区SOD、CAT(U/mg.protein)的影响(
±s，n=10)皮层
, http://www.100md.com
小脑
海马
纹状体
下丘脑
CAT
青龄组
6.50±0.62*
11.40±0.32
5.80±0.42*
7.03±0.45**
10.24±0.28**
青龄致衰老组
, 百拇医药
5.10±0.58
11.20±0.28
4.30±0.37
4.12±0.33
6.28±0.31
清脑片小剂量组
6.30±0.58*
10.90±0.34
5.40±0.36*
6.90±0.53**
10.20±0.30**
, http://www.100md.com 清脑片大剂量组
6.49±0.44*
11.20±0.38
5.50±0.48*
7.05±0.58**
10.50±0.38**
青龄组
68.00±7.34*
70.38±5.34
83.34±5.47**
90.21±7.43**
80.21±4.34*
, 百拇医药
SOD
青龄致衰老组
56.63±4.30
68.45±3.24
67.38±4.33
63.34±6.51
68.28±5.36
清脑片小剂量组
65.00±7.35*
69.45±4.31
78.34±5.40**
88.20±7.31**
, http://www.100md.com
76.33±5.47*
清脑片大剂量组
68.32±7.43*
70.34±5.50
82.44±5.40**
90.20±6.44**
78.31±4.80*
*P<0.05；**P<0.01表3 清脑片对大鼠各脑区游离氨基酸的影响(μmol/g组织湿重，
±s)皮层
, 百拇医药 小脑
海马
纹状体
下丘脑
Asp
青龄组
3.14±0.67
2.40±0.58
2.70±0.48*
2.40±0.44*
3.17±0.53
青龄致衰老组
2.94±0.58
, 百拇医药
1.87±0.55
1.48±0.44
1.70±0.38
2.48±0.50
清脑片小剂量组
2.90±0.55
2.10±0.53
2.50±0.43*
2.30±0.41*
2.45±0.30
清脑片大剂量组
3.10±0.43
, 百拇医药
2.00±0.48
2.60±0.55*
2.45±0.48*
2.80±0.70
Glu
青龄组
8.30±0.45**
6.30±0.55
7.28±0.41**
5.22±0.58*
5.60±0.52
青龄致衰老组
, 百拇医药
7.10±0.47
5.59±0.43
6.10±0.40
4.39±0.45
5.38±0.72
清脑片小剂量组
8.20±0.30*
5.60±0.44
6.99±0.43*
5.10±0.58*
5.28±0.53
清脑片大剂量组
, 百拇医药
8.39±0.44**
5.94±0.70
7.19±0.41*
5.23±0.44*
5.40±0.72
GABA
青龄组
3.80±0.34
1.12±0.34
3.30±0.26
3.97±0.38*
4.58±0.48
, http://www.100md.com
青龄致衰老组
3.60±0.25
1.17±0.40
3.41±0.33
4.42±0.31
5.03±0.33
清脑片小剂量组
3.58±0.24
1.34±0.50
2.89±0.38
4.74±0.35*
4.88±0.33
, 百拇医药
清脑片大剂量组
3.60±0.44
1.30±0.40
3.11±0.44
4.88±0.31*
4.90±0.31
*P<0.05；**P<0.012 讨论
清脑片主要成份有吡硫醇、珍珠粉和硫酸软骨素等多种成份，长期临床应用证实其改善智能和延缓抗衰老有显效。我们曾用东莨菪碱、亚硝酸钠和30%乙醇分成制成小鼠记忆获得障碍、记忆巩固障碍和记忆再现障碍模型，经灌服清脑片后，小鼠记忆获得、巩固和再现功能均能得到改善。
衰老的自由基学说[4]认为，随着机体的衰老，体内出现自由基产生过多和清除自由基能力的下降，而应用自由基消除剂能达到延缓衰老的作用[5]。本实验结果表明，清脑片能明显提高衰老模型大鼠中不同脑区的SOD和CAT活性。说明清脑片能增加抗氧化酶对自由基的清除能力，从而减轻或阻断脂质过氧化反应，防止自由基对细胞的损伤。衰老机体中脑内兴奋性氨基酸水平降低，而抑制性氨基酸升高[6]，结果还表明，清脑片能增加衰老模型大鼠海马、纹状体中Asp和皮层、海马、纹状体中Glu水平，降低纹状体GABA水平，提示清脑片能调节中枢兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸含量。谷氨酸和天门冬氨酸是两种主要的兴奋性氨基酸，中枢神经内有特异性受体，统称谷氨酸受体(Glu-R)。这两种氨基酸均可选择性地与递质受体结合，激活N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDA-R)，使钙通道开放，钙离子内流增加，调节着兴奋性突触的传递和发育过程中突触的可塑性，参与学习和记忆的形成[7]。GABA是中枢神经系统的一种抑制性递质，采用γ-氨基丁酸受体(GAR)拮抗剂，可以改善由亚硝酸钠所致的记忆巩固障碍和乙醇引起的记忆再现障碍，清脑片通过调节脑内氨基酸类递质水平，从而起到易化突触传导，促进信息获得和记忆巩固的作用，特别是海马区Glu和Asp含量的增加，对于促进学习和记忆具有重要作用。我们发现，大小两种剂量的清脑片治疗致衰老大鼠，其改善大鼠记忆力，对SOD、CAT及游离氨基酸的影响作用差别无显著性(P>0.05)，说明用较小剂量的清脑片治疗，就能达到良好的改善脑功能作用。
, 百拇医药
参考文献
1 李仪奎，主编.中药药理实验方法学.上海：上海科学技术出版社，1991：171～73
2 包新民，舒斯云.大鼠脑立体定位图谱.北京：人民卫生出版社，1991
3 蒋 滢，黄美英.人体游离氨基酸的超微量分析方法.氨基酸杂志，1986，18(2)∶151
4 Butterfield DA, et al. Free radical oxidation of brain proteins in accelerated serescence and its modulation by N-tert-butyl-alpha-plenylnitron. Proc Natl Acad Sci U S A， 1997，94(2)∶674
5 Yu Bp, et al. Can antioxidant supplementation slow the aging process? Biofactors, 1998，7(1-2)∶93
6 Robert Katzman. The aging brain. Arch Neurol,1997， 54∶1201
7 裴印权，苏 丹.NMDA受体和其拮抗剂的药理.中国药理学通报，1996，12∶303
(1998年11月25日收稿), http://www.100md.com