中药水提液絮凝澄清工艺的合理性考查
作者：秦雪梅 漆小梅 秦霞 李芳
单位：山西医科大学药学系 太原 030001
关键词：中药，水提液，絮凝剂，澄清
中国医院药学杂志991208
摘要 目的:论证中药水提絮凝澄清工艺的合理性。方法:用正交试验筛选中药水提絮凝澄清工艺的最佳条件；从澄清效果、成分分析、生产过程等方面比较了3种工艺。结果:絮凝澄清技术澄清效果好、生产成本低、周期短、能更多地保留中药有效成分。结论:可替代水提醇沉工艺。
Study on cleaning technology of water extracts of
tranditional Chinese medicine by flocculating agents
, http://www.100md.com
Qin Xuemei Qi Xiaomei Qin Xia et al
Department of Pharmacy,Shanxi Medical Univesity,Taiyuan 030001
ABSTRACT OBJECTIVE：To study cleaning technology of water extracts of traditional Chinese medicine.METHODS：The best process that boiling water extracts of tranditional Chinese medicine cleaned by flocculating agents is selected by orthogonal design. Three technologies were compared from effectiveness of cleaning, analysis of active constituents and process of produce.RESULTS：The cleaning technology of flocculence is effective, cost is low,and it can keep more active constituents.CONCLUSION：The water alcohol extractive method can be replaced by cleaning technology of flocculence.
, 百拇医药
KEY WORDS tranditional medicine,boiling water extracst,flocculating agenst,clear
中药水提液的澄清，目前生产上多采用醇沉法除去杂质，该法存在一些不合理性[1]，一些醇不溶性有效成分，如多糖丢失，降低了药品疗效；有些高分子物质如鞣质因溶于乙醇不能被除去，影响药品的稳定性；耗醇量大、成本高、生产周期长。絮凝澄清工艺是在混浊的水提液中，加入一种天然絮凝剂，可使水提液迅速变澄清，经过滤达到精制目的。本文比较研究了宫瘀净处方3种除杂工艺过程及半成品质量，以期为絮凝澄清工艺的合理性提供科学依据。
1 仪器和药品
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)；UV-260自动分光光度计(日本岛津)；黄芪甲苷(供含量测定用)、芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；葡萄糖(成都制药四厂，批号980518)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；几丁质(食用级，上海试剂二厂)；其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法
2.1 处方及3种工艺路线 宫瘀净处方由黄芪、当归、白芍、牛膝、炮姜组成。按处方量称取药材共84g，加水煎2次，合并煎液，浓缩至1∶3生药浓度(相对密度1.02)时，计240ml，分别采用静置法、醇沉法、絮凝澄清法3种除杂技术，普通定性滤纸过滤，滤渣经蒸馏水(醇沉用45%乙醇)洗净、干燥，称量备用；洗液与滤液合并，干燥得干浸膏，各除杂工艺路线如下：
工艺Ⅰ(水提静置法)：浓缩液静置24h，过滤，滤渣干燥备用；水滤液浓缩干燥，得干浸膏Ⅰ。
工艺Ⅱ(水提醇沉法)：浓缩液加乙醇使含醇量达70%，静置48h，过滤，滤渣经洗涤干燥备用；醇水滤液减压回收乙醇，水溶液再浓缩干燥得干浸膏Ⅱ。
工艺Ⅲ(水提絮凝法，处理按2.2的最佳条件进行)：浓缩液加几丁质，静置15min，过滤，滤渣干燥备用；水滤液浓缩干燥得干浸膏Ⅲ。
, 百拇医药
2.2 絮凝澄清工艺的正交试验 澄清效果与加入絮凝剂的量及温度等因素有关[1]，为选择最佳条件和确定各因素影响的主次关系，故采用L9(33)正交试验[2]，分别见表1和表2。澄清效果以上层液的澄明度为主要指标，沉淀完全的沉降时间和上层液过滤时间为辅助指标。
表1 因素水平表 水平
A水提液温度/℃
B絮凝剂加入量/g
C放置时间
1
20
0.7
15min
, http://www.100md.com
2
60
0.9
6h
3
80
1.5
12h
表2 L9(33)计算表 编号
A
B
C
澄明度
, http://www.100md.com
沉降时间/h
过滤时间/h
1
1
1
1
-
24
>24
2
1
2
2
1
, 百拇医药
1.5
3
1
3
3
+
3.5
4
4
2
1
2
0.5
0.75
, http://www.100md.com
5
2
2
3
0.25
0.42
6
2
3
1
-
24
>24
7
, http://www.100md.com
3
1
3
0.25
0.42
8
3
2
1
0.05
0.17
9
3
3
, 百拇医药
2
-
24
>24
注：-混浊；+微清；较澄清；澄清；清澈透明
由表2可知，最优组合A3B2C1，即在80℃时，加入0.9g几丁质放置15min，可使水提液中的悬浮颗粒完全凝集沉降，上层液清澈透明，易过滤。因素主次关系为B→A→C，即加入絮凝剂的量为第一影响因素，水提液温度为第二因素，放置时间对澄清效果影响不大。
2.3 制备过程及单服剂量比较 用上述各工艺制备的干浸膏比总生药量得收率；以制得的干浸膏研成细粉装胶囊，每粒0.5g，依据文献[3]及临床试验，日服生药量30g，可达到治疗剂量，每日3次，计算各工艺单服剂量；再从制备难易度和周期(澄清、浓缩、干燥)，分析3种工艺，比较结果见表3。
, 百拇医药
表3 3种工艺过程分析 工艺
加澄清剂
过滤
滤液
周期/h
收率/%
单服量/粒
Ⅰ
无
难
混浊
45
33.3
, 百拇医药
7
Ⅱ
酒精(量大)
易
澄明
58
14.3
4
Ⅲ
几丁质(量小)
易
澄明
30
17.8
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4.5
由表3可见，工艺Ⅲ生产周期短，澄清剂用量小，操作简单，勿须回收乙醇，滤过液澄明，明显优于另两种工艺，且单服剂量较工艺Ⅰ小，易被患者接受。
2.4 3种工艺对有效成分保留效果的考查
2.4.1 黄芪甲苷的含量比较 方法学考查参考文献[4]，经试验，黄芪甲苷在1～6μl之间，浓度与峰面积呈线性关系，回归方程为：Y=3968.6X-3.077,r=0.9984。精密称取各工艺干浸膏粉6.0g，按文献[3]法制备供试品溶液，同法进行薄层层析，于CS-930薄层扫描仪测定样品含量，测定结果见表4，薄层图谱见图1。
图1 黄芪甲苷TLC比较
1，5：黄芪甲苷对照品(6μl,2μl)；2，3，4：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ干膏样品；6，7，8：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ滤渣样品
, 百拇医药
2.4.2 多糖的含量比较 方法学考查参见文献[5]，按酚-硫酸法于UV-260紫外分光光度计上测定葡萄糖的吸收值，计算标准曲线方程：A=0.0295+0.068C,r=0.9978。精密称取各工艺干浸膏5.0g，加水溶解，其余按文献[5]制备样品液，经测定计算多糖含量(以葡萄糖计)，结果见表4。
表4 不同工艺干浸膏有效成分含量 工艺
黄芪甲苷/mg.g-1
多糖/mg.g-1
收率/%
Ⅰ
0.29
, 百拇医药
2.99
33.3
Ⅱ
0.11
1.53
14.3
Ⅲ
0.22
2.60
17.8
由表4可见，工艺Ⅲ的黄芪甲苷和多糖含量明显高于工艺Ⅱ。
2.4.3 芍药苷的薄层层析 分别取各工艺干浸膏粉5g，按文献[6]法进行薄层鉴别，结果见图2。
, 百拇医药
图2 芍药苷TLC比较
1，2，3：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ干膏样品；4：芍药苷对照品；
5，6，7；工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ滤渣样品
分别取各工艺滤渣，分别按2.4.3和2.4.1法进行薄层层析，结果见图2和图1。
由TLC图谱可见，各工艺干浸膏均能检出黄芪甲苷和芍药苷斑点；各滤渣的薄层图谱中，只有工艺Ⅱ(醇沉法)可检出较浅的黄芪甲苷和芍药苷斑点，说明滤渣中有微量有效成分。
3 讨论
上述各项研究表明，工艺Ⅰ未采用除杂技术，其收率和有效成分的保留最多，但过滤困难，制剂单服量大，不能达到现代制剂的要求。工艺Ⅲ和工艺Ⅱ相比，在有效成分的保留及生产成本和周期上，均有显著差别，絮凝澄清技术明显优于醇沉工艺。
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正交试验表明，澄清效果主要与絮凝剂的加入量和溶液温度有关，可作为筛选最佳条件的方法，但试验次数较多，生产上还需寻找一种更简便合理的筛选方法，替代正交试验。
絮凝剂用于澄清中药水提液，对保留多糖，苷类等水溶性成分较好。此点与文献[7]报道一致。
参考文献
1 黄兰珍，张嘉珍，苏美凤.中成药口服液制剂澄清与过滤的工艺研究.中成药，1993，15(11)：6
2 黄玲，黄大国.正交设计法在中药研究中的应用概况.河南中医学刊，1996，11(2)：13
3 夏丕芳.中药汤剂制成成药后服用量的我见.中国中药杂志，1992，17(6)：351
4 李玲，苏健，王宝.黄芪及其复方制剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定.中成药，1993，15(6)：10
5 泰雪梅，郭媛媛，梁小梅等.内蒙黄芪地上部分多糖的含量测定.山西中医，1995，11(1)：50
6 中国药典.一部，1995：86
7 张彤，张青华.壳聚糖用于大青叶等中药浸提液澄清效果的研究.中成药，1998，20(10)：7
收稿日期：1998年12月11日, 百拇医药
单位：山西医科大学药学系 太原 030001
关键词：中药，水提液，絮凝剂，澄清
中国医院药学杂志991208
摘要 目的:论证中药水提絮凝澄清工艺的合理性。方法:用正交试验筛选中药水提絮凝澄清工艺的最佳条件；从澄清效果、成分分析、生产过程等方面比较了3种工艺。结果:絮凝澄清技术澄清效果好、生产成本低、周期短、能更多地保留中药有效成分。结论:可替代水提醇沉工艺。
Study on cleaning technology of water extracts of
tranditional Chinese medicine by flocculating agents
, http://www.100md.com
Qin Xuemei Qi Xiaomei Qin Xia et al
Department of Pharmacy,Shanxi Medical Univesity,Taiyuan 030001
ABSTRACT OBJECTIVE：To study cleaning technology of water extracts of traditional Chinese medicine.METHODS：The best process that boiling water extracts of tranditional Chinese medicine cleaned by flocculating agents is selected by orthogonal design. Three technologies were compared from effectiveness of cleaning, analysis of active constituents and process of produce.RESULTS：The cleaning technology of flocculence is effective, cost is low,and it can keep more active constituents.CONCLUSION：The water alcohol extractive method can be replaced by cleaning technology of flocculence.
, 百拇医药
KEY WORDS tranditional medicine,boiling water extracst,flocculating agenst,clear
中药水提液的澄清，目前生产上多采用醇沉法除去杂质，该法存在一些不合理性[1]，一些醇不溶性有效成分，如多糖丢失，降低了药品疗效；有些高分子物质如鞣质因溶于乙醇不能被除去，影响药品的稳定性；耗醇量大、成本高、生产周期长。絮凝澄清工艺是在混浊的水提液中，加入一种天然絮凝剂，可使水提液迅速变澄清，经过滤达到精制目的。本文比较研究了宫瘀净处方3种除杂工艺过程及半成品质量，以期为絮凝澄清工艺的合理性提供科学依据。
1 仪器和药品
CS-930薄层扫描仪(日本岛津)；UV-260自动分光光度计(日本岛津)；黄芪甲苷(供含量测定用)、芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所)；葡萄糖(成都制药四厂，批号980518)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；几丁质(食用级，上海试剂二厂)；其余试剂均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法
2.1 处方及3种工艺路线 宫瘀净处方由黄芪、当归、白芍、牛膝、炮姜组成。按处方量称取药材共84g，加水煎2次，合并煎液，浓缩至1∶3生药浓度(相对密度1.02)时，计240ml，分别采用静置法、醇沉法、絮凝澄清法3种除杂技术，普通定性滤纸过滤，滤渣经蒸馏水(醇沉用45%乙醇)洗净、干燥，称量备用；洗液与滤液合并，干燥得干浸膏，各除杂工艺路线如下：
工艺Ⅰ(水提静置法)：浓缩液静置24h，过滤，滤渣干燥备用；水滤液浓缩干燥，得干浸膏Ⅰ。
工艺Ⅱ(水提醇沉法)：浓缩液加乙醇使含醇量达70%，静置48h，过滤，滤渣经洗涤干燥备用；醇水滤液减压回收乙醇，水溶液再浓缩干燥得干浸膏Ⅱ。
工艺Ⅲ(水提絮凝法，处理按2.2的最佳条件进行)：浓缩液加几丁质，静置15min，过滤，滤渣干燥备用；水滤液浓缩干燥得干浸膏Ⅲ。
, 百拇医药
2.2 絮凝澄清工艺的正交试验 澄清效果与加入絮凝剂的量及温度等因素有关[1]，为选择最佳条件和确定各因素影响的主次关系，故采用L9(33)正交试验[2]，分别见表1和表2。澄清效果以上层液的澄明度为主要指标，沉淀完全的沉降时间和上层液过滤时间为辅助指标。
表1 因素水平表 水平
A水提液温度/℃
B絮凝剂加入量/g
C放置时间
1
20
0.7
15min
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2
60
0.9
6h
3
80
1.5
12h
表2 L9(33)计算表 编号
A
B
C
澄明度
, http://www.100md.com
沉降时间/h
过滤时间/h
1
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注：-混浊；+微清；较澄清；澄清；清澈透明
由表2可知，最优组合A3B2C1，即在80℃时，加入0.9g几丁质放置15min，可使水提液中的悬浮颗粒完全凝集沉降，上层液清澈透明，易过滤。因素主次关系为B→A→C，即加入絮凝剂的量为第一影响因素，水提液温度为第二因素，放置时间对澄清效果影响不大。
2.3 制备过程及单服剂量比较 用上述各工艺制备的干浸膏比总生药量得收率；以制得的干浸膏研成细粉装胶囊，每粒0.5g，依据文献[3]及临床试验，日服生药量30g，可达到治疗剂量，每日3次，计算各工艺单服剂量；再从制备难易度和周期(澄清、浓缩、干燥)，分析3种工艺，比较结果见表3。
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表3 3种工艺过程分析 工艺
加澄清剂
过滤
滤液
周期/h
收率/%
单服量/粒
Ⅰ
无
难
混浊
45
33.3
, 百拇医药
7
Ⅱ
酒精(量大)
易
澄明
58
14.3
4
Ⅲ
几丁质(量小)
易
澄明
30
17.8
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4.5
由表3可见，工艺Ⅲ生产周期短，澄清剂用量小，操作简单，勿须回收乙醇，滤过液澄明，明显优于另两种工艺，且单服剂量较工艺Ⅰ小，易被患者接受。
2.4 3种工艺对有效成分保留效果的考查
2.4.1 黄芪甲苷的含量比较 方法学考查参考文献[4]，经试验，黄芪甲苷在1～6μl之间，浓度与峰面积呈线性关系，回归方程为：Y=3968.6X-3.077,r=0.9984。精密称取各工艺干浸膏粉6.0g，按文献[3]法制备供试品溶液，同法进行薄层层析，于CS-930薄层扫描仪测定样品含量，测定结果见表4，薄层图谱见图1。
图1 黄芪甲苷TLC比较
1，5：黄芪甲苷对照品(6μl,2μl)；2，3，4：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ干膏样品；6，7，8：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ滤渣样品
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2.4.2 多糖的含量比较 方法学考查参见文献[5]，按酚-硫酸法于UV-260紫外分光光度计上测定葡萄糖的吸收值，计算标准曲线方程：A=0.0295+0.068C,r=0.9978。精密称取各工艺干浸膏5.0g，加水溶解，其余按文献[5]制备样品液，经测定计算多糖含量(以葡萄糖计)，结果见表4。
表4 不同工艺干浸膏有效成分含量 工艺
黄芪甲苷/mg.g-1
多糖/mg.g-1
收率/%
Ⅰ
0.29
, 百拇医药
2.99
33.3
Ⅱ
0.11
1.53
14.3
Ⅲ
0.22
2.60
17.8
由表4可见，工艺Ⅲ的黄芪甲苷和多糖含量明显高于工艺Ⅱ。
2.4.3 芍药苷的薄层层析 分别取各工艺干浸膏粉5g，按文献[6]法进行薄层鉴别，结果见图2。
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图2 芍药苷TLC比较
1，2，3：工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ干膏样品；4：芍药苷对照品；
5，6，7；工艺Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ滤渣样品
分别取各工艺滤渣，分别按2.4.3和2.4.1法进行薄层层析，结果见图2和图1。
由TLC图谱可见，各工艺干浸膏均能检出黄芪甲苷和芍药苷斑点；各滤渣的薄层图谱中，只有工艺Ⅱ(醇沉法)可检出较浅的黄芪甲苷和芍药苷斑点，说明滤渣中有微量有效成分。
3 讨论
上述各项研究表明，工艺Ⅰ未采用除杂技术，其收率和有效成分的保留最多，但过滤困难，制剂单服量大，不能达到现代制剂的要求。工艺Ⅲ和工艺Ⅱ相比，在有效成分的保留及生产成本和周期上，均有显著差别，絮凝澄清技术明显优于醇沉工艺。
, http://www.100md.com
正交试验表明，澄清效果主要与絮凝剂的加入量和溶液温度有关，可作为筛选最佳条件的方法，但试验次数较多，生产上还需寻找一种更简便合理的筛选方法，替代正交试验。
絮凝剂用于澄清中药水提液，对保留多糖，苷类等水溶性成分较好。此点与文献[7]报道一致。
参考文献
1 黄兰珍，张嘉珍，苏美凤.中成药口服液制剂澄清与过滤的工艺研究.中成药，1993，15(11)：6
2 黄玲，黄大国.正交设计法在中药研究中的应用概况.河南中医学刊，1996，11(2)：13
3 夏丕芳.中药汤剂制成成药后服用量的我见.中国中药杂志，1992，17(6)：351
4 李玲，苏健，王宝.黄芪及其复方制剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定.中成药，1993，15(6)：10
5 泰雪梅，郭媛媛，梁小梅等.内蒙黄芪地上部分多糖的含量测定.山西中医，1995，11(1)：50
6 中国药典.一部，1995：86
7 张彤，张青华.壳聚糖用于大青叶等中药浸提液澄清效果的研究.中成药，1998，20(10)：7
收稿日期：1998年12月11日, 百拇医药