MCI-154的合成及其抑制血小板聚集的作用
作者：吴秋业 吴波 倪瑾 刘超美 丁青龙
单位：吴秋业(第二军医大学药学学院有机化学教研室，上海 200433)；刘超美(第二军医大学药学学院有机化学教研室，上海 200433)；吴波(军事医学科学院六所)；倪瑾(第二军医大学海军医学第369教研室)；丁青龙(解放军第102医院)
关键词：
哒嗪酮；血小板聚集
中图分类号中图分类号：R 972.1 文献标识码：B
文章编号：0258-879X(2000)01-0096-02▲
MCI-154化学名为6-[4-(4-吡啶氨基)苯基]-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮，具有很强的强心、扩张血管和抗血小板聚集作用[1]，其强心作用的机制完全不同于强心甙类和儿茶酚胺类强心药，前者是通过抑制细胞内磷酸二酯酶，提高细胞内AMP水平而发挥作用，此外，它还可提高钙离子对收缩蛋白的敏感性而发挥正性肌力作用；后两者是通过提高细胞内钙离子浓度而起作用[2]。MCI-154在国外已进入Ⅲ期临床试验。
, 百拇医药
1 方法和结果
1.1 仪器和动物 熔点由毛细管熔点仪测定，温度计未经校正。元素分析仪为Carlo Erba1106型自动元素分析仪；红外光谱仪为Hitachi 270-50型；磁共振仪为Bruker AC-300D型， DMSO-d6为溶剂，TMS为内标。薄层层析(TLC)用硅胶GF254层析板。药理实验动物为新西兰雄性大白兔，ADP为美国Sigma公司产品，CCI-17810为本教研室合成，实验食品是PAM2-PPP型自动平衡血小板聚集仪。
1.2 MCI-154的合成 参考有关文献，以乙酰苯胺和吡啶为起始原料分别合成6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮[3]和4-硝基吡啶[4]，然后两者反应得MCI-154。于50 ml茄型瓶中，加入6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3-(2H)哒嗪酮1.89 g (10.0 mmol)和干燥DMSO 10 ml，搅拌，加入4-硝基吡啶1.37 g (11 mmol)和三乙胺1.01 g (10 mmol), 加热至150℃，搅拌反应10 h。TLC(展开系统，氯仿∶甲醇=8∶1) 显示反应完毕。倾入50 ml水中，用NaOH水溶液碱化至pH 11, 析出灰白色粉末状固体，过滤，水洗数次，干燥，得2.4 g, 用DMF/水重结晶，得2.2 g, 收率82.7%，mp 250～251℃,文献值249～252℃。元素分析：C15H14N4O，计算值(%)：C 67.67, H 5.26, N 21.05；实测值(%)：C 67.64,H 5.16,N 21.33。质谱(EI)：m/z 266(M+)。1HNMR(DMSO-d6)δ:2.42(2H,t,J=8.2 Hz, -CH2C=O),2.91(2H,t,J=8.2 Hz,-CH2C=N),6.96(2H,d,J=5.4 Hz,吡啶-β-H),7.22(2H,d, J=8.6 Hz,ph-3′-H and ph-5′-H),7.71(2H,d,J=8.6 Hz,ph-2′-H and ph-6′-H),8.22(2H, d,J=5.4 Hz, 吡啶-α-H)。
, 百拇医药
1.3 药理实验 参考Born比浊法[5]，测定了CCI-17810和MCI-154对ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集的IC50。具体方法为新西兰大白兔心脏取血，离心制备富含血小板血浆(PRP)和贫含血小板血浆(PPP)；用PRP和PPP调整血小板聚集仪。取200 μl PRP于比色管中，加入1 μl DMSO ，37℃孵温10 min ，搅拌40 s 后，分别加入不同剂量的ADP，搅拌下观察5 min内血小板的最大聚集程度，从而摸索出诱导剂的阈剂量。再将供试样品配成不同浓度的DMSO溶液，加入到含200 μl PRP的比色管中，37℃孵温10 min ，搅拌40 s后，加入阈剂量的ADP，搅拌下观察5 min内血小板的最大聚集程度，计算血小板聚集的抑制百分率并用回归法求得IC50。CCI-17810的IC50=12.5 μmol/L，MCI-154的IC50=10 μmol/L。
2 讨论
, 百拇医药
文献报道MCI-154的合成是以4-氯吡啶和6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3-(2H)哒嗪酮在N-甲基吡咯烷酮溶剂中反应，然后通过萃取、柱层析、重结晶等后处理制得。溶剂价格昂贵，操作繁杂，柱层析时使用有毒的氯仿和甲醇。我们改用二甲亚砜作溶剂，加热反应，冷却后倾倒入冷水中，用稀碱调至弱碱性即析出固体。再用DMF重结晶即得，不但操作方便，而且收率高。
初步的体外药理实验表明，MCI-154有较强的抑制ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集作用，且其活性比化合物CCI-17810略强，说明MCI-154不但有较强的强心作用，而且有较强的抑制血小板聚集的作用，可能有较好的开发前景。
致谢 元素分析、红外光谱、磁共振谱由本院仪器中心杨根金、王勇提供，质谱由上海医药工业研究院王惠敏老师提供。■
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39670844)
, 百拇医药
作者简介：吴秋业(1964～)，男(汉族)，博士，讲师
参考文献：
[1]Okushima H, Narimatsu A, Kobayashi M ,et al. A novel class of cardiotonics. Synthesis and pharmacological properties of [4-(substituted-amino)phenyl] pyridazinones and related derivatives[J]. J Med Chem, 1987,30(7):1157-1160.
[2]Kitada Y, Narimatsu A, Suzuki R, et al. Does the positive inotropic action of a novel cardiotonic agent, MCI-154, involve mechanisms other than cyclic AMP?[J]. J Pharmacol Exp Ther, 1987,243(2):639-641.
, 百拇医药
[3]Thyes M, Lehmann HD, Gries J, et al. 6-Aryl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinones. A new class of compounds with platelet aggregation inhibiting and hypotensive activities[J]. J Med Chem, 1983,26(6):800-802.
[4]王葆仁主编. 有机合成反应[M]. 北京：科学技术出版社，1985. 642-643.
[5]Born GVR. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal[J]. Nature,1962,194(4832):927-929.
收稿日期：1999-08-24
修回日期：1999-12-03, 百拇医药
单位：吴秋业(第二军医大学药学学院有机化学教研室，上海 200433)；刘超美(第二军医大学药学学院有机化学教研室，上海 200433)；吴波(军事医学科学院六所)；倪瑾(第二军医大学海军医学第369教研室)；丁青龙(解放军第102医院)
关键词：
哒嗪酮；血小板聚集
中图分类号中图分类号：R 972.1 文献标识码：B
文章编号：0258-879X(2000)01-0096-02▲
MCI-154化学名为6-[4-(4-吡啶氨基)苯基]-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮，具有很强的强心、扩张血管和抗血小板聚集作用[1]，其强心作用的机制完全不同于强心甙类和儿茶酚胺类强心药，前者是通过抑制细胞内磷酸二酯酶，提高细胞内AMP水平而发挥作用，此外，它还可提高钙离子对收缩蛋白的敏感性而发挥正性肌力作用；后两者是通过提高细胞内钙离子浓度而起作用[2]。MCI-154在国外已进入Ⅲ期临床试验。
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1 方法和结果
1.1 仪器和动物 熔点由毛细管熔点仪测定，温度计未经校正。元素分析仪为Carlo Erba1106型自动元素分析仪；红外光谱仪为Hitachi 270-50型；磁共振仪为Bruker AC-300D型， DMSO-d6为溶剂，TMS为内标。薄层层析(TLC)用硅胶GF254层析板。药理实验动物为新西兰雄性大白兔，ADP为美国Sigma公司产品，CCI-17810为本教研室合成，实验食品是PAM2-PPP型自动平衡血小板聚集仪。
1.2 MCI-154的合成 参考有关文献，以乙酰苯胺和吡啶为起始原料分别合成6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3(2H)哒嗪酮[3]和4-硝基吡啶[4]，然后两者反应得MCI-154。于50 ml茄型瓶中，加入6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3-(2H)哒嗪酮1.89 g (10.0 mmol)和干燥DMSO 10 ml，搅拌，加入4-硝基吡啶1.37 g (11 mmol)和三乙胺1.01 g (10 mmol), 加热至150℃，搅拌反应10 h。TLC(展开系统，氯仿∶甲醇=8∶1) 显示反应完毕。倾入50 ml水中，用NaOH水溶液碱化至pH 11, 析出灰白色粉末状固体，过滤，水洗数次，干燥，得2.4 g, 用DMF/水重结晶，得2.2 g, 收率82.7%，mp 250～251℃,文献值249～252℃。元素分析：C15H14N4O，计算值(%)：C 67.67, H 5.26, N 21.05；实测值(%)：C 67.64,H 5.16,N 21.33。质谱(EI)：m/z 266(M+)。1HNMR(DMSO-d6)δ:2.42(2H,t,J=8.2 Hz, -CH2C=O),2.91(2H,t,J=8.2 Hz,-CH2C=N),6.96(2H,d,J=5.4 Hz,吡啶-β-H),7.22(2H,d, J=8.6 Hz,ph-3′-H and ph-5′-H),7.71(2H,d,J=8.6 Hz,ph-2′-H and ph-6′-H),8.22(2H, d,J=5.4 Hz, 吡啶-α-H)。
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1.3 药理实验 参考Born比浊法[5]，测定了CCI-17810和MCI-154对ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集的IC50。具体方法为新西兰大白兔心脏取血，离心制备富含血小板血浆(PRP)和贫含血小板血浆(PPP)；用PRP和PPP调整血小板聚集仪。取200 μl PRP于比色管中，加入1 μl DMSO ，37℃孵温10 min ，搅拌40 s 后，分别加入不同剂量的ADP，搅拌下观察5 min内血小板的最大聚集程度，从而摸索出诱导剂的阈剂量。再将供试样品配成不同浓度的DMSO溶液，加入到含200 μl PRP的比色管中，37℃孵温10 min ，搅拌40 s后，加入阈剂量的ADP，搅拌下观察5 min内血小板的最大聚集程度，计算血小板聚集的抑制百分率并用回归法求得IC50。CCI-17810的IC50=12.5 μmol/L，MCI-154的IC50=10 μmol/L。
2 讨论
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文献报道MCI-154的合成是以4-氯吡啶和6-[4-(4-氨基苯基)]-4，5-二氢-3-(2H)哒嗪酮在N-甲基吡咯烷酮溶剂中反应，然后通过萃取、柱层析、重结晶等后处理制得。溶剂价格昂贵，操作繁杂，柱层析时使用有毒的氯仿和甲醇。我们改用二甲亚砜作溶剂，加热反应，冷却后倾倒入冷水中，用稀碱调至弱碱性即析出固体。再用DMF重结晶即得，不但操作方便，而且收率高。
初步的体外药理实验表明，MCI-154有较强的抑制ADP诱导的新西兰大白兔血小板聚集作用，且其活性比化合物CCI-17810略强，说明MCI-154不但有较强的强心作用，而且有较强的抑制血小板聚集的作用，可能有较好的开发前景。
致谢 元素分析、红外光谱、磁共振谱由本院仪器中心杨根金、王勇提供，质谱由上海医药工业研究院王惠敏老师提供。■
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39670844)
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作者简介：吴秋业(1964～)，男(汉族)，博士，讲师
参考文献：
[1]Okushima H, Narimatsu A, Kobayashi M ,et al. A novel class of cardiotonics. Synthesis and pharmacological properties of [4-(substituted-amino)phenyl] pyridazinones and related derivatives[J]. J Med Chem, 1987,30(7):1157-1160.
[2]Kitada Y, Narimatsu A, Suzuki R, et al. Does the positive inotropic action of a novel cardiotonic agent, MCI-154, involve mechanisms other than cyclic AMP?[J]. J Pharmacol Exp Ther, 1987,243(2):639-641.
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[3]Thyes M, Lehmann HD, Gries J, et al. 6-Aryl-4,5-dihydro-3(2H)-pyridazinones. A new class of compounds with platelet aggregation inhibiting and hypotensive activities[J]. J Med Chem, 1983,26(6):800-802.
[4]王葆仁主编. 有机合成反应[M]. 北京：科学技术出版社，1985. 642-643.
[5]Born GVR. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal[J]. Nature,1962,194(4832):927-929.
收稿日期：1999-08-24
修回日期：1999-12-03, 百拇医药