泛影葡胺注射液细菌内毒素检测方法探新
作者：钟福清 刘宁华
单位：湖南江华瑶族自治县第二人民医院 425500
关键词：泛影葡胺/注射液；试剂，鲎；内毒素
中国药师000122
摘 要 目的： 确立用鲎试剂(TAL)法检测泛影葡胺注射液中的内毒素。 方法：参照《美国药典》23版及《中国药典》1995年版二部收载的细菌内毒素检查方法的要求进行试验。 结果：用标示值灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂检查泛影葡胺注射中的细菌内毒素是有效的。 结论： 0.5 EU.ml-1鲎试剂可以用于泛影葡胺注射液中的内毒素检测。 鲎试剂(TAL)法可替代泛影葡胺注射液热原检查项目中的家兔(RT)法。
, http://www.100md.com
Study on Bacterial Endotoxin Inspection Method of Meglumine Diatrizoate Injection
Zhong Fuqing, Liu Linghua
(2nd Peoples Hospital of Hunan Province Jianghua Yaozhu Auto-govern
County, Jianghua 425500, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To establish tachypleus amebocyte lysate(TAL) to determine the bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection. Methods: The test was conducted according to the request of bacterial endotoxin inspecting method included in “American Pharmacopeia” ed 23 and part Ⅱ in China pharmacopeia, 1995. Results: It was effective that bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection can be tested by TAL with accuracy of 0.5 EU.ml-1. Conclusions: 0.5 EU.ml-1 of TAL can not only be used to test bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection, and it may also replaces rabit test.
, 百拇医药
KEY WORDS Meglumine diatrizoate injection; Tachypleus amebocyte lysate; Bacterial endotoxin▲
用于CT诊断疾病的药物泛影葡胺注射液用量呈上升趋势。为探索泛影葡胺注射液用鲎试剂法替代家兔法的可行性，参照《美国药典》23版及《中国药典》1995年版二部附录ⅪE收载的细菌内毒素检查法中干扰抑制试验原理[1]，对60泛影葡胺注射液进行了细菌内毒素检查并与家兔法进行了比较，现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 电子恒温水浴箱(上海电子设备厂)，F-2Q-2型振荡器(江苏泰县医疗器械厂)，酸度计pH-25型(上海雷磁仪器厂生产)。
1.2 试剂 鲎试剂标示值灵敏度为0.5EU.ml-1，细菌内毒素工作标准品每Amp10EU，超纯水每Amp为2ml(均为厦门鲎试剂厂生产，批号980919，980524，980516)泛影葡胺注射液(规格60×100ml批号980529，980811，981013，湖南益阳药厂生产)。依法测得pH值为：6.85，6.95，7.00。
, 百拇医药
2 实验方法与结果
2.1 样品中细菌内毒素限量值的计算 据
公式，k为细菌内毒素对家兔致热阈值[2]k=5.0EU.ml-1。M为热原检查时该药品静脉注射剂量，本品为3.0ml.kg-1[3]。
则
2.2 最大稀释倍数(MVD)计算
由公式
λb--为鲎试剂灵敏度标示值=0.5EU.ml-1
, 百拇医药
则
若用标示值0.5EU.ml-1的鲎试剂检测泛影葡胺注射液中细菌内毒素时，理论上稀释倍数为3.4倍约为3倍。
2.3 鲎试剂灵敏度复核
按《中国药典》1995年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法对鲎试剂(980919)进行复核，其结果见表1。
表1 鲎试剂(980919)复核结果 细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
结 果
1.000
, http://www.100md.com
++++
0.500
++++
0.250----
0.125----
2.4 供试品的干扰试验
按《中国药典》1995年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中的供试品干扰试验方法进行试验。取上述3个批号样品原液为供试液即将原液按1→3稀释将细菌内毒素稀释成1.00EU.ml-1，0.5EU.ml-1，0.25EU.ml-1，0.125EU.ml-1内毒素溶液每一梯度浓度做4管，依法操作结果见表2。从表2得知，供试品原液有干扰作用而将原液按1→3稀释后的溶液无干扰作用。
, http://www.100md.com
表2 三批样品的干扰试验结果 批 号
供试品原液
及稀释倍数
细菌内毒素浓度9EU.ml-1)
1.000
0.500
0.250
0.125
980529
原 液
1→3----
++++----
, 百拇医药
++++----------------
980811
同上----
++++----
++++----------------
981013
同上----
++++----
++++----------------
2.5 将上述3个批号样品液稀释3倍后做(TAL)法试验并与家兔(RT)法比较，为增强试验的可靠性，增设样品阳性试验对照管(+)，及阴性试验对照管(-)，结果见表3。 表3 三批样品对比试验结果 批 号
, http://www.100md.com
样品
试验
样品阳性试
验对照管
阳性
试验
阴性
试验
家兔法
980529--
++
+
-
, http://www.100md.com 合格
980811--
++
+
-
合格
981013--
++
+
-
合格
3 讨论
从表2，表3试验可知原液对0.5EU.ml-1鲎试剂有干扰作用，将供试液按1→3稀释后则抑制作用消失，故用0.5EU.ml-1鲎试剂检查60泛影葡胺注射液中细菌内毒素是可行的。TAL法可以替代泛影葡胺注射液热原项中RT法检查。TAL法快速、灵敏度高，开发前景广阔。
参 考 文 献
[1]中国药典1995年版二部附录Ⅺ E： 76
[2]夏振民. 内毒素限值. 药物分析杂志， 1995， 15(3)：54
[3]中国药典95版. 二部. 1990. 318
(19990517收稿), 百拇医药
单位：湖南江华瑶族自治县第二人民医院 425500
关键词：泛影葡胺/注射液；试剂，鲎；内毒素
中国药师000122
摘 要 目的： 确立用鲎试剂(TAL)法检测泛影葡胺注射液中的内毒素。 方法：参照《美国药典》23版及《中国药典》1995年版二部收载的细菌内毒素检查方法的要求进行试验。 结果：用标示值灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂检查泛影葡胺注射中的细菌内毒素是有效的。 结论： 0.5 EU.ml-1鲎试剂可以用于泛影葡胺注射液中的内毒素检测。 鲎试剂(TAL)法可替代泛影葡胺注射液热原检查项目中的家兔(RT)法。
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Study on Bacterial Endotoxin Inspection Method of Meglumine Diatrizoate Injection
Zhong Fuqing, Liu Linghua
(2nd Peoples Hospital of Hunan Province Jianghua Yaozhu Auto-govern
County, Jianghua 425500, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To establish tachypleus amebocyte lysate(TAL) to determine the bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection. Methods: The test was conducted according to the request of bacterial endotoxin inspecting method included in “American Pharmacopeia” ed 23 and part Ⅱ in China pharmacopeia, 1995. Results: It was effective that bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection can be tested by TAL with accuracy of 0.5 EU.ml-1. Conclusions: 0.5 EU.ml-1 of TAL can not only be used to test bacterial endotoxin in meglumine diatrizoate injection, and it may also replaces rabit test.
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KEY WORDS Meglumine diatrizoate injection; Tachypleus amebocyte lysate; Bacterial endotoxin▲
用于CT诊断疾病的药物泛影葡胺注射液用量呈上升趋势。为探索泛影葡胺注射液用鲎试剂法替代家兔法的可行性，参照《美国药典》23版及《中国药典》1995年版二部附录ⅪE收载的细菌内毒素检查法中干扰抑制试验原理[1]，对60泛影葡胺注射液进行了细菌内毒素检查并与家兔法进行了比较，现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 电子恒温水浴箱(上海电子设备厂)，F-2Q-2型振荡器(江苏泰县医疗器械厂)，酸度计pH-25型(上海雷磁仪器厂生产)。
1.2 试剂 鲎试剂标示值灵敏度为0.5EU.ml-1，细菌内毒素工作标准品每Amp10EU，超纯水每Amp为2ml(均为厦门鲎试剂厂生产，批号980919，980524，980516)泛影葡胺注射液(规格60×100ml批号980529，980811，981013，湖南益阳药厂生产)。依法测得pH值为：6.85，6.95，7.00。
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2 实验方法与结果
2.1 样品中细菌内毒素限量值的计算 据
公式，k为细菌内毒素对家兔致热阈值[2]k=5.0EU.ml-1。M为热原检查时该药品静脉注射剂量，本品为3.0ml.kg-1[3]。则
2.2 最大稀释倍数(MVD)计算
由公式
λb--为鲎试剂灵敏度标示值=0.5EU.ml-1, 百拇医药
则
若用标示值0.5EU.ml-1的鲎试剂检测泛影葡胺注射液中细菌内毒素时，理论上稀释倍数为3.4倍约为3倍。
2.3 鲎试剂灵敏度复核
按《中国药典》1995年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法对鲎试剂(980919)进行复核，其结果见表1。
表1 鲎试剂(980919)复核结果 细菌内毒素浓度(EU.ml-1)
结 果
1.000
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++++
0.500
++++
0.250----
0.125----
2.4 供试品的干扰试验
按《中国药典》1995年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中的供试品干扰试验方法进行试验。取上述3个批号样品原液为供试液即将原液按1→3稀释将细菌内毒素稀释成1.00EU.ml-1，0.5EU.ml-1，0.25EU.ml-1，0.125EU.ml-1内毒素溶液每一梯度浓度做4管，依法操作结果见表2。从表2得知，供试品原液有干扰作用而将原液按1→3稀释后的溶液无干扰作用。
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表2 三批样品的干扰试验结果 批 号
供试品原液
及稀释倍数
细菌内毒素浓度9EU.ml-1)
1.000
0.500
0.250
0.125
980529
原 液
1→3----
++++----
, 百拇医药
++++----------------
980811
同上----
++++----
++++----------------
981013
同上----
++++----
++++----------------
2.5 将上述3个批号样品液稀释3倍后做(TAL)法试验并与家兔(RT)法比较，为增强试验的可靠性，增设样品阳性试验对照管(+)，及阴性试验对照管(-)，结果见表3。 表3 三批样品对比试验结果 批 号
, http://www.100md.com
样品
试验
样品阳性试
验对照管
阳性
试验
阴性
试验
家兔法
980529--
++
+
-
, http://www.100md.com 合格
980811--
++
+
-
合格
981013--
++
+
-
合格
3 讨论
从表2，表3试验可知原液对0.5EU.ml-1鲎试剂有干扰作用，将供试液按1→3稀释后则抑制作用消失，故用0.5EU.ml-1鲎试剂检查60泛影葡胺注射液中细菌内毒素是可行的。TAL法可以替代泛影葡胺注射液热原项中RT法检查。TAL法快速、灵敏度高，开发前景广阔。
参 考 文 献
[1]中国药典1995年版二部附录Ⅺ E： 76
[2]夏振民. 内毒素限值. 药物分析杂志， 1995， 15(3)：54
[3]中国药典95版. 二部. 1990. 318
(19990517收稿), 百拇医药