RP-HPLC法测定急支糖浆中阿魏酸的含量
作者：杨水新 严建民 叶勇 蒋国强
单位：杨水新(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；严建民(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；叶勇(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；蒋国强(浙江省湖州市药品检验所，浙江 湖州 313000)
关键词：急支糖浆；阿魏酸；RP-HPLC▲
中国中药杂志000121 摘 要：目的：测定急支糖浆中阿魏酸的含量。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱Shim-pack CLC-ODS柱(150 mm×4.6 mm，ID，5 μm)；流动相甲醇-1%乙酸(28∶72)，检测波长323 nm，流速1 ml.min-1。结果：平均回收率102.16%，RSD 1.46%。结论：方法可用于急支糖浆中阿魏酸的含量测定。
, 百拇医药
急支糖浆为1995年版《中国药典》[1]一部新收载的中药品种，主要含金荞麦、鱼腥草、四季青和麻黄碱等。药典中对其有效成分阿魏酸和原儿茶酸，采用TCL鉴别，而对其含量测定则未作规定。文献对阿魏酸的含量测定多有报道[2，3]。本文采用高效液相色谱法，可同时对阿魏酸进行定性定量分析。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，包括Waters 996二极管阵列检测器，Waters 515泵，7725进样阀，Millennium 2010 v 2.15.01色谱管理系统。
阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，773-9001)。甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸馏水，急支糖浆(太极集团四川涪陵制药厂)。
2 实验条件
, 百拇医药
2.1 色谱条件 YGW C18预柱(大连物化所)，Shim-pack CLC-ODS分析柱(150 mm×4.6 mm，ID，5 μm)。流动相甲醇-1%乙酸水溶液(28∶72)，流速1 ml.min-1，检测波长323 nm。检测器扫描范围200～350 nm，扫描速度1 spec.s-1，分辨率1.2 nm。
2.2 样品预处理 精密吸样品25 ml，水浴蒸至近干，加甲醇加热回流提取2次，每次50 ml，回流30 min，滤过，液滤蒸干，残渣加水40 ml溶解，以稀盐酸调节pH 1～2，煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚20，10，10，10 ml提取4次，合并乙醚液，用2%碳酸钠20，10，10，10 ml提取4次，合并提取液，用乙酸乙酯25 ml洗涤，弃去洗涤液，碱液用稀盐酸调pH 1～2，以乙醚20，10，10，10 ml提取4次，合并乙醚液，40～45 ℃蒸干，残渣精密加甲醇2 ml溶解，以0.45 μm滤膜滤过，备用。
, 百拇医药
3 方法与结果
3.1 色谱行为与系统适应性试验 照2.2项下方法制备供试品溶液，另取阿魏酸对照品适量，以甲醇配成约40 μg.ml-1对照液，照2.1项下色谱条件，各进样10 μl，同时采集200～350 nm光谱图，以对照品阿魏酸的光谱作为标准光谱，经Millennium 2010中色谱峰纯度分析，光谱匹配对照和系统适应性专用软件包计算。结果显示相应色谱峰能通过一级纯度(Purity pass 1)检验，二者光谱一致。阿魏酸的保留时间25.6 min，理论塔板数4 000，分离度2.4，在323.5 nm有最大吸收波长。对照品和供试品的色谱图见图1。
图1 对照品及供试品色谱图
A.对照品 B.供试品
3.2 标准曲线 精密称取阿魏酸对照品30 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解，并加至刻度，摇匀。精密吸取5 ml置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样4，8，12，16，20 μl，各2次。按上述色谱条件测定，以平均峰面积对各自进样量(ng)回归，得回归方程A=3243.05C+13369.05，r=0.9998。
, 百拇医药
3.3 加样回收率试验 取已测定含量的样品2批，精密吸取25 ml，分别加入阿魏酸对照品溶液(60 μg.ml-1)0.5，1.0，2.0 ml。照2.2项下操作，各进样10 μl，3次。以平均峰面积计算回收率，见表1。
3.4 样品测定 取2批样品，照2.2项下制备供试品溶液，进样10 μl，3次。按外标法以平均峰面积计算含量，结果见表1。
表1 样品中阿魏酸含量测定与加样回收率结果 批号
样品含量/μg.ml-1
加入量/μg.ml-1
测得总量/μg.ml-1
, http://www.100md.com
回收率/%
平均回收率/%
RSD/%
980421462
3.97±0.07
1.20
5.21±0.06
103.33
2.40
6.38±0.06
100.25
4.80
, http://www.100md.com
8.92±0.13
103.78
102.16
1.46
980418444
4.43±0.03
1.20
5.66±0.09
102.50
2.40
6.95±0.12
102.71
, 百拇医药
4.80
8.25±0.13
100.42
3.5 精密度试验 取上述供试品溶液1份，进样10μl，连续进样5次，峰面积RSD<0.7%。
4 讨论
4.1 色谱条件的选择为本实验的关键，曾采用梯度法。甲醇的比例在10%～40%变化，在Nova-pak C18柱，Alltch C18柱和大连依利特C18柱上，均没有找到合适的分离条件，采用Shim-pack CLC-ODS柱，才取得满意的结果。流动相中以0.02 mol.L-1磷酸二氢钾代替1%乙酸，有助于改善峰形，但考虑到对仪器的损害，故不采用。
, 百拇医药
4.2 样品经0.45 μm微孔滤膜滤过后可直接进样，但阿魏酸的浓度太低，结果偏差太大。所以采用了提取浓缩的方法。
参考文献：
[1]中国药典.一部.1995.556
[2]金 芳.高效液相色谱法测定龙克栓胶囊中阿魏酸含量.中国医院药学杂志，1995，16(10)：456
[3]游勇基.HPLC测定增乳保育膏中阿魏酸的含量.中国药学杂志，1996，31(10)：619
收稿日期:1998-10-19, 百拇医药
单位：杨水新(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；严建民(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；叶勇(浙江省湖州市第二人民医院，浙江 湖州 313000)；蒋国强(浙江省湖州市药品检验所，浙江 湖州 313000)
关键词：急支糖浆；阿魏酸；RP-HPLC▲
中国中药杂志000121 摘 要：目的：测定急支糖浆中阿魏酸的含量。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱Shim-pack CLC-ODS柱(150 mm×4.6 mm，ID，5 μm)；流动相甲醇-1%乙酸(28∶72)，检测波长323 nm，流速1 ml.min-1。结果：平均回收率102.16%，RSD 1.46%。结论：方法可用于急支糖浆中阿魏酸的含量测定。
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急支糖浆为1995年版《中国药典》[1]一部新收载的中药品种，主要含金荞麦、鱼腥草、四季青和麻黄碱等。药典中对其有效成分阿魏酸和原儿茶酸，采用TCL鉴别，而对其含量测定则未作规定。文献对阿魏酸的含量测定多有报道[2，3]。本文采用高效液相色谱法，可同时对阿魏酸进行定性定量分析。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，包括Waters 996二极管阵列检测器，Waters 515泵，7725进样阀，Millennium 2010 v 2.15.01色谱管理系统。
阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，773-9001)。甲醇为色谱纯，乙酸为分析纯，水为重蒸馏水，急支糖浆(太极集团四川涪陵制药厂)。
2 实验条件
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2.1 色谱条件 YGW C18预柱(大连物化所)，Shim-pack CLC-ODS分析柱(150 mm×4.6 mm，ID，5 μm)。流动相甲醇-1%乙酸水溶液(28∶72)，流速1 ml.min-1，检测波长323 nm。检测器扫描范围200～350 nm，扫描速度1 spec.s-1，分辨率1.2 nm。
2.2 样品预处理 精密吸样品25 ml，水浴蒸至近干，加甲醇加热回流提取2次，每次50 ml，回流30 min，滤过，液滤蒸干，残渣加水40 ml溶解，以稀盐酸调节pH 1～2，煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚20，10，10，10 ml提取4次，合并乙醚液，用2%碳酸钠20，10，10，10 ml提取4次，合并提取液，用乙酸乙酯25 ml洗涤，弃去洗涤液，碱液用稀盐酸调pH 1～2，以乙醚20，10，10，10 ml提取4次，合并乙醚液，40～45 ℃蒸干，残渣精密加甲醇2 ml溶解，以0.45 μm滤膜滤过，备用。
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3 方法与结果
3.1 色谱行为与系统适应性试验 照2.2项下方法制备供试品溶液，另取阿魏酸对照品适量，以甲醇配成约40 μg.ml-1对照液，照2.1项下色谱条件，各进样10 μl，同时采集200～350 nm光谱图，以对照品阿魏酸的光谱作为标准光谱，经Millennium 2010中色谱峰纯度分析，光谱匹配对照和系统适应性专用软件包计算。结果显示相应色谱峰能通过一级纯度(Purity pass 1)检验，二者光谱一致。阿魏酸的保留时间25.6 min，理论塔板数4 000，分离度2.4，在323.5 nm有最大吸收波长。对照品和供试品的色谱图见图1。
图1 对照品及供试品色谱图
A.对照品 B.供试品
3.2 标准曲线 精密称取阿魏酸对照品30 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解，并加至刻度，摇匀。精密吸取5 ml置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样4，8，12，16，20 μl，各2次。按上述色谱条件测定，以平均峰面积对各自进样量(ng)回归，得回归方程A=3243.05C+13369.05，r=0.9998。
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3.3 加样回收率试验 取已测定含量的样品2批，精密吸取25 ml，分别加入阿魏酸对照品溶液(60 μg.ml-1)0.5，1.0，2.0 ml。照2.2项下操作，各进样10 μl，3次。以平均峰面积计算回收率，见表1。
3.4 样品测定 取2批样品，照2.2项下制备供试品溶液，进样10 μl，3次。按外标法以平均峰面积计算含量，结果见表1。
表1 样品中阿魏酸含量测定与加样回收率结果 批号
样品含量/μg.ml-1
加入量/μg.ml-1
测得总量/μg.ml-1
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回收率/%
平均回收率/%
RSD/%
980421462
3.97±0.07
1.20
5.21±0.06
103.33
2.40
6.38±0.06
100.25
4.80
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8.92±0.13
103.78
102.16
1.46
980418444
4.43±0.03
1.20
5.66±0.09
102.50
2.40
6.95±0.12
102.71
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4.80
8.25±0.13
100.42
3.5 精密度试验 取上述供试品溶液1份，进样10μl，连续进样5次，峰面积RSD<0.7%。
4 讨论
4.1 色谱条件的选择为本实验的关键，曾采用梯度法。甲醇的比例在10%～40%变化，在Nova-pak C18柱，Alltch C18柱和大连依利特C18柱上，均没有找到合适的分离条件，采用Shim-pack CLC-ODS柱，才取得满意的结果。流动相中以0.02 mol.L-1磷酸二氢钾代替1%乙酸，有助于改善峰形，但考虑到对仪器的损害，故不采用。
, 百拇医药
4.2 样品经0.45 μm微孔滤膜滤过后可直接进样，但阿魏酸的浓度太低，结果偏差太大。所以采用了提取浓缩的方法。
参考文献：
[1]中国药典.一部.1995.556
[2]金 芳.高效液相色谱法测定龙克栓胶囊中阿魏酸含量.中国医院药学杂志，1995，16(10)：456
[3]游勇基.HPLC测定增乳保育膏中阿魏酸的含量.中国药学杂志，1996，31(10)：619
收稿日期:1998-10-19, 百拇医药