舌鳞状细胞癌p53基因突变的研究
作者：傅其宏 郭琦 吴求亮
单位：傅其宏(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)；郭琦(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)；吴求亮(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)
关键词：
中国肿瘤临床000221
现已发现，p53基因的突变是人类肿瘤发生发展过程中最常见的基因事件，与口腔癌发生发展的关系密切。本研究采用单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术，对35例舌鳞癌组织及20例正常舌粘膜的p53基因第7，8外显子和第7内含子突变进行检测，并分析它与舌鳞癌的发生发展，包括临床分期、细胞分化程度、淋巴结转移的关系，探讨上述检测指标作为指导舌癌治疗及判断预后手段的可能性。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 标本来源
收集本科1993～1996年舌鳞状细胞癌术后新鲜组织标本35例，其中5例系活检术后标本。所有标本均作常规石蜡切片HE染色，确定病理类型。20例正常舌粘膜标本取自正常的新鲜尸体。
1.2 临床及随访资料
35例舌鳞状细胞癌患者中，男性18例，女性17例;年龄24～75岁，平均年龄54岁。按通用的T分类及临床分期，T1期6例，T2期12例，T3期10例，T4期7例;临床早期(T1+T2)18例，晚期(T3+T4)17例，均无远处转移。行根治术者30例，颈淋巴结转移7例。病理组织学分级：高分化鳞状细胞癌21例，中分化12例，低分化2例。随访时间为6个月至3年不等，其中术后局部复发6例，淋巴结转移者3例。
, 百拇医药
1.3 实验试剂及方法
p53基因引物：p53-1:5′AGGTTGGCTCTGACTGTACC3′，p53-2:5′ATTGTCCTGCTTGCTTACCTC3′由美国Cybersyn公司合成，检测7、8外显子和第7内含子，目的扩增片段610bp。新鲜组织标本经酚氯仿抽提法进行DNA提取，然后行PCR扩增，将PCR扩增产物作聚丙烯酰胺凝胶电泳，在银染色后进行单链构象多态性分析，判断标准与正常对照组比较，若出现额外DNA条带或出现DNA条带迁移度的异常，即为阳性。
1.4 结果的统计学处理
数据输入486/DX微机，在SPSS for Windows统计软件上采用χ2检验进行分析处理，如总体样本<40，则采用确切概率计算法。
2 结果
, http://www.100md.com
2.1 舌鳞状细胞癌组织中的p53基因突变
p53基因在舌鳞状细胞癌组织中的突变率为51.4%(18/35)，而正常舌粘膜未出现p53基因突变，说明癌变的舌粘膜存在着较高的p53基因突变率。
2.2 舌癌分化程度与p53基因突变之间的关系
21例高分化鳞癌中有6例发生p53基因突变，突变率为28.6%(6/21)，而14例中低分化鳞癌(其中低分化鳞癌2例)中，有12例的p53基因发生突变，突变率为85.7%(12/14)，两者之间有显著性差异(P<0.05)，说明细胞分化越差，p53基因突变率越高。
2.3 p53基因突变与舌癌临床分期之间的关系
在病例的T临床分期中，T1期患者p53基因的突变率为16.7%，T2期患者中p53基因的突变率为16.7%(2/12)，而T3期及T4期患者中的突变率分别为90%(9/10)和85.7%(6/7)。临床早期与晚期之间有显著性差异(P<0.05)。提示随着肿瘤的进展，p53基因的突变率明显增加。
, 百拇医药
2.4 p53基因突变与淋巴结转移之间的关系
35个病例中有30例做根治手术的作为可评价病例，其中有p53基因突变的17例中发生颈淋巴结转移的占41.2%(7/17)，另13例无突变的病例均未发现有颈淋巴结的转移(0/13)，两者在统计学上有显著性差异(P<0.05)。这提示有p53基因突变者其淋巴结转移的可能性增大。3例在随访期内发现有术后颈淋巴结转移的患者均属p53基因突变病例。
3 小结
p53基因点突变是人类恶性肿瘤中最常见的基因事件，在大约60%的直肠癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、头颈癌等多种恶性肿瘤中均可检测到p53基因的突变。本研究表明舌癌组织中p53基因的突变率为51.4%，而正常舌粘膜中无基因突变，提示了舌癌组织中存在着较为经常的p53基因突变，并随着临床分期的增加，p53基因突变率有显著增高。说明随着肿瘤的进一步发展，p53基因的突变率不断增高。从本结果来看，p53基因突变可能是舌鳞癌发展中的晚期事件。本研究表明舌鳞癌的分化程度与p53基因突变有关，中低分化鳞癌中p53基因突变率较高，因此，它可作为判断肿瘤恶性程度的一个参考指标。对舌鳞状细胞癌中p53基因突变与颈淋巴结转移的相关性进行分析，发现有p53突变的舌癌中其颈淋巴结转移率高达41.2%，这提示有p53基因突变者，其颈淋巴结转移的可能性较大，因此临床上可将其作为预测颈淋巴结转移的一个参考指标。
(韩豫生校对)
(1999-07-07收稿), http://www.100md.com
单位：傅其宏(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)；郭琦(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)；吴求亮(浙江医科大学附属第一医院口腔颌面外科 杭州市310003)
关键词：
中国肿瘤临床000221
现已发现，p53基因的突变是人类肿瘤发生发展过程中最常见的基因事件，与口腔癌发生发展的关系密切。本研究采用单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术，对35例舌鳞癌组织及20例正常舌粘膜的p53基因第7，8外显子和第7内含子突变进行检测，并分析它与舌鳞癌的发生发展，包括临床分期、细胞分化程度、淋巴结转移的关系，探讨上述检测指标作为指导舌癌治疗及判断预后手段的可能性。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 标本来源
收集本科1993～1996年舌鳞状细胞癌术后新鲜组织标本35例，其中5例系活检术后标本。所有标本均作常规石蜡切片HE染色，确定病理类型。20例正常舌粘膜标本取自正常的新鲜尸体。
1.2 临床及随访资料
35例舌鳞状细胞癌患者中，男性18例，女性17例;年龄24～75岁，平均年龄54岁。按通用的T分类及临床分期，T1期6例，T2期12例，T3期10例，T4期7例;临床早期(T1+T2)18例，晚期(T3+T4)17例，均无远处转移。行根治术者30例，颈淋巴结转移7例。病理组织学分级：高分化鳞状细胞癌21例，中分化12例，低分化2例。随访时间为6个月至3年不等，其中术后局部复发6例，淋巴结转移者3例。
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1.3 实验试剂及方法
p53基因引物：p53-1:5′AGGTTGGCTCTGACTGTACC3′，p53-2:5′ATTGTCCTGCTTGCTTACCTC3′由美国Cybersyn公司合成，检测7、8外显子和第7内含子，目的扩增片段610bp。新鲜组织标本经酚氯仿抽提法进行DNA提取，然后行PCR扩增，将PCR扩增产物作聚丙烯酰胺凝胶电泳，在银染色后进行单链构象多态性分析，判断标准与正常对照组比较，若出现额外DNA条带或出现DNA条带迁移度的异常，即为阳性。
1.4 结果的统计学处理
数据输入486/DX微机，在SPSS for Windows统计软件上采用χ2检验进行分析处理，如总体样本<40，则采用确切概率计算法。
2 结果
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2.1 舌鳞状细胞癌组织中的p53基因突变
p53基因在舌鳞状细胞癌组织中的突变率为51.4%(18/35)，而正常舌粘膜未出现p53基因突变，说明癌变的舌粘膜存在着较高的p53基因突变率。
2.2 舌癌分化程度与p53基因突变之间的关系
21例高分化鳞癌中有6例发生p53基因突变，突变率为28.6%(6/21)，而14例中低分化鳞癌(其中低分化鳞癌2例)中，有12例的p53基因发生突变，突变率为85.7%(12/14)，两者之间有显著性差异(P<0.05)，说明细胞分化越差，p53基因突变率越高。
2.3 p53基因突变与舌癌临床分期之间的关系
在病例的T临床分期中，T1期患者p53基因的突变率为16.7%，T2期患者中p53基因的突变率为16.7%(2/12)，而T3期及T4期患者中的突变率分别为90%(9/10)和85.7%(6/7)。临床早期与晚期之间有显著性差异(P<0.05)。提示随着肿瘤的进展，p53基因的突变率明显增加。
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2.4 p53基因突变与淋巴结转移之间的关系
35个病例中有30例做根治手术的作为可评价病例，其中有p53基因突变的17例中发生颈淋巴结转移的占41.2%(7/17)，另13例无突变的病例均未发现有颈淋巴结的转移(0/13)，两者在统计学上有显著性差异(P<0.05)。这提示有p53基因突变者其淋巴结转移的可能性增大。3例在随访期内发现有术后颈淋巴结转移的患者均属p53基因突变病例。
3 小结
p53基因点突变是人类恶性肿瘤中最常见的基因事件，在大约60%的直肠癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、头颈癌等多种恶性肿瘤中均可检测到p53基因的突变。本研究表明舌癌组织中p53基因的突变率为51.4%，而正常舌粘膜中无基因突变，提示了舌癌组织中存在着较为经常的p53基因突变，并随着临床分期的增加，p53基因突变率有显著增高。说明随着肿瘤的进一步发展，p53基因的突变率不断增高。从本结果来看，p53基因突变可能是舌鳞癌发展中的晚期事件。本研究表明舌鳞癌的分化程度与p53基因突变有关，中低分化鳞癌中p53基因突变率较高，因此，它可作为判断肿瘤恶性程度的一个参考指标。对舌鳞状细胞癌中p53基因突变与颈淋巴结转移的相关性进行分析，发现有p53突变的舌癌中其颈淋巴结转移率高达41.2%，这提示有p53基因突变者，其颈淋巴结转移的可能性较大，因此临床上可将其作为预测颈淋巴结转移的一个参考指标。
(韩豫生校对)
(1999-07-07收稿), http://www.100md.com