银杏叶提取物改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用
作者：周兰兰 明亮 左从文 马传庚
单位：安徽医科大学药理教研室 合肥 230032
关键词：银杏叶提取物；反复脑缺血再灌注；血液流变学
中国现代应用药学000202
摘要 目的：研究银杏叶提取物(EGB)改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用。方法：采用反复脑缺血再灌注模型鼠，应用毛细管微量热沉法和毛细管微量法分别检测血纤维蛋白原(Fib)含量和红细胞压积(HCT)数值，并将结果输入全自动血液流变仪得出血浆粘度(ηp)、血液粘度(ηb)、血液还原粘度(ηh)、血细胞聚集系数(VAL)、血栓形成系数(TEL)及微循环滞留时间(MST)。结果：EGB 25～100mg/kg均可不同程度地降低Fib、HCT，降低ηb、ηp、ηh，缩小VAL及TEL，缩短MST。结论：EGB可明显降低反复脑缺血再灌注小鼠的血液粘度、促进血液循环，对其血液流变性具明显的改善作用。
, 百拇医药
Effect of extracts of Ginkgo biloba leaves on hemorheology in repeated cerebral transient ischemia-reperfusion in mice
Zhou Lanlan(Zhou LL),Ming Liang(Ming L),Zuo Congwen(Zuo CW)
(Anhui Medical University,Hefei 230032)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effect of EGB on hemorheology in repeated cerebral transient ischemia-reperfusion in mice.METHOD:Hemotocrit(HCT) and fibrinogen(FIB) were determinded by capillary micromethod and capillary heat microprecipitation method in mice models with repeated cerebral ischema-reperfusion.ηb,ηp,ηh,VAL,TEL and MST were also determined.RESULTS:With the dosage of EGB 25～100mg/kg HCT and FIB were reduced and there were also changes to ηb,ηh,ηp,VAL TEL and MST.CONCLUSION:These data suggested EGB had remarkedly decreasing effect on blood viscvsity and could obviously improve the blood circulation of repeated cerebral ischemia-reperfusion in mice.
, 百拇医药
KEY WORDS extracts of Ginkgo biloba leaves,cerebral ischemia-reperfusion,hemorheology
银杏叶提取物(extracts of Ginkgo biloba leaves,EGB)的主要有效成份为黄酮类和内酯类，具有广泛的药理作用。有研究表明，EGB具有扩张脑血管、增加脑血流量、促进脑血液循环的作用[1]，国外广泛用于心脑血管疾病的治疗[2]。反复脑缺血再灌注可升高血液粘度，降低脑局部血流量，严重影响机体的血液循环，但有关EGB对反复脑缺血再灌注致血液系统损害的影响尚未见报道。本文就EGB改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 药品
EGB(安徽省金寨神栗食品有限公司，批号：9805011，其主要有效成份经高效液相仪检测为黄酮苷占33.84%,银杏内酯占11.18%);尼莫地平(山东新华制药股份有限公司，批号:970611)。
, 百拇医药
1.2 动物
昆明种小鼠，(30.0±3.0)g,♀♂各半(安徽医科大学实验动物中心，皖医实动准01)。随机分为6组：①反复脑缺血再灌注组；②假手术组；③尼莫地平100mg/kg组；④EGB 25、50和100mg/kg治疗组。
1.3 仪器
春光BRC-51型全自动血液流变仪(无锡春光医疗医学仪器厂)。
1.4 手术方法
反复脑缺血再灌注组：清醒小鼠仰位固定，行颈正中切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用。用橡皮泥固定拉紧丝线阻断血流,10min后松线使血流复灌15min，如此反复3次；假手术组：只分离双侧颈总动脉，不阻断；尼莫地平100mg/kg组,EGB 25,50和100mg/kg治疗组,ig,qd×21d后均行反复脑缺血术。
, 百拇医药
1.5 检测方法
各组小鼠于术后72h行断头取血(用肝素抗凝管),2h内检测指标。按文献[3],应用毛细管微量热沉法和毛细管微量法分别检测纤维蛋白原(Fib)含量和红细胞压积(HCT)数值，然后将上述指标数值输入全自动血液流变仪，得出血浆粘度(ηp)、血液粘度(ηb)、血液还原粘度(ηh)、血细胞聚集系数(VAL)、血栓形成系数(TEL)及微循环滞留时间(MST)。
1.6 统计学处理
所有实验数据均以均值±标准差(±s)表示，采用组间t检验。
2 结 果
2.1 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT的影响
如表1所示，与假手术组比较，反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT数值升高，有显著统计学差异；与反复脑缺血再灌注组比较，EGB 25～100mg/kg组、尼莫地平100mg/kg组小鼠Fib显著降低,EGB25和50mg/kg组小鼠HCT显著降低。
, 百拇医药
表1 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT的影响/±s 组 别
动物
数
剂量/
mg.kg-1
Fib/g.L-1
HCT/vol.L-1
假手术
8
-
3.23±0.69
, 百拇医药
41.70±4.69
反复脑缺血
9
-
3.91±0.72*1
47.29±3.75*1
再灌注
尼莫地平
8
100
2.79±0.52*2
42.70±3.50*3
, 百拇医药
EGB
8
25
2.76±0.87*2
39.51±2.32*2
8
50
2.42±0.31*2
42.28±1.56*2
8
100
2.97±0.90*3
, 百拇医药
42.44±2.95*3
注：与假手术组比较，*1P<0.05；与反复脑缺血再灌注组比较，*2P<0.01，*3P<0.05
2.2 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηh、ηp、VAL、MST和TEL的影响
如表2所示，与假手术组比较，反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηh、ηp数值明显升高，VAL和TEL明显增大，MST明显延长；与反复脑缺血再灌注组比较,EGB 25～100mg/kg组及尼莫地平100mg/kg组小鼠ηb、ηp、ηh显著降低，VAL及TEL明显减少，MST明显缩短。
3 讨 论
表2 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηp、ηh、VAL、MST和TEL的影响/±s
, 百拇医药
组 别
剂量/mg.kg-1
ηb/mpa.s
ηp/mpa.s
ηh/mpa.s
VAL
MST/S
TEL
假手术
-
4.35±0.46
, http://www.100md.com
7.51±0.24
1.67±0.18
0.61±0.06
23.59±6.34
0.64±0.16
反复脑缺血再灌注
-
4.95±0.44*1
7.76±0.15*1
1.87±0.18*1
0.69±0.05*1
, 百拇医药
31.61±5.47*1
0.86±0.15*1
尼莫地平
100
4.53±0.11*2
7.62±0.05*2
1.56±0.31*2
0.64±0.02*2
19.94±9.66*2
0.54±0.26*2
, 百拇医药
EGB
25
4.19±0.28*3
7.42±0.13*3
1.58±0.21*2
0.58±0.03*3
18.70±6.00*3
0.51±0.17*3
50
4.41±0.15*3
, 百拇医药
7.56±0.07*3
1.49±0.08*1，*3
0.61±0.03*3
17.46±2.50*1，*3
0.47±0.07*1，*3
100
4.42±0.29*2
7.56±0.14*2
1.63±0.22*2
, http://www.100md.com
0.62±0.04*3
21.46±6.70*3
0.58±0.18*3
注：与假手术组比较，*1P<0.05；与反复脑缺血再灌注组比较，*2P<0.05，*3P<0.01(各组动物数同表1)
正常血液流变状态对维持机体的组织血液灌注非常重要，机体有很多因素影响血液流变性如血液粘度的高低，纤维蛋白原(Fib)的含量、红细胞压积(HCT)的大小、红细胞的变形能力及聚集性等。有文献报道，脑组织缺血缺氧后ATP耗竭，乳酸大量堆积，致使pH值降低，从而使红细胞胞膜对水的通透性增加，红细胞变形能力降低，聚集程度加剧，导致血粘度升高[4]。血粘度升高后，血流缓慢，使缺血组织的血液灌注减少，加重了脑组织的缺血缺氧，使脑缺血范围扩大，如此互相影响，形成恶性循环。本实验研究结果显示反复脑缺血再灌注使小鼠Fib、HCT均明显升高，血液粘度(ηb)、血浆粘度(ηp)及血液还原粘度(ηh)明显升高，红细胞聚集性明显增大，血栓形成机率增加，微循环滞留时间明显延长，说明反复脑缺血再灌注使机体的血流变因素发生了明显的异常，导致脑部血循环障碍，脑组织出现严重的血供氧供不足。
, 百拇医药
有研究发现，应用EGB治疗家兔心肌缺血再灌注损伤时，EGB可明显抑制缺血再灌注损伤所致的组织纤溶酶原激活因子(t-pA)的降低和纤溶酶原激活抑制因子1(PAI-1)的升高，从而调节纤维蛋白溶解过程，防止血栓形成[5]。本文研究结果显示EGB 25～100mg/kg均可不同程度地降低反复脑缺血再灌注小鼠的Fib、HCT，降低血细胞聚集性，缩短微循环滞留时间，减少血栓形成系数，降低血液粘度。说明EGB可有效改善脑缺血小鼠的血液流变性，增加缺血脑组织的血液灌注，改善脑功能。本室既往研究表明EGB可以促进反复脑缺血再灌注致痴呆小鼠的学习记忆能力，血流变的改善可能与其促智作用有关。但反复脑缺血的病理损害机制非常复杂，血流变的改变可能只是其中的一个因素，但本文研究结果提示EGB通过改善血液流变性来防治脑缺血，降低其致残率和死亡率应具有广阔的临床应用前景。
安徽省自然科学基金资助项目(95-医-20)
周兰兰，女，30岁。讲师，博士研究生
, 百拇医药
参考文献
1，刘玲玲，于心若.银杏药用价值.中草药，1994，25(4)∶219.
2，Maitra I,Marcocci L,Droy Lefaix MT,et al.Peroxyl radical scavenging activaty of Ginkgo biloba extract EGB 761.Biochem Pharmacol,1995,49(11)∶1649.
3，王天佑.血液流变学.第2版.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1992∶126.
4，张孝超，王景周，陈曼娥.红细胞变形性与缺血性脑卒中.国外医学脑血管疾病分册，1998，6(1)∶21.
5，Shen JG,Zhou DY.Efficiency of Ginkgo biloba extract(EGB 761) in antioxidant protection against myocardial ischemia and reperfusion injury.Biochem Mol Bliol Int,1995,35(1)∶125.
收稿日期：1999-01-04, http://www.100md.com
单位：安徽医科大学药理教研室 合肥 230032
关键词：银杏叶提取物；反复脑缺血再灌注；血液流变学
中国现代应用药学000202
摘要 目的：研究银杏叶提取物(EGB)改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用。方法：采用反复脑缺血再灌注模型鼠，应用毛细管微量热沉法和毛细管微量法分别检测血纤维蛋白原(Fib)含量和红细胞压积(HCT)数值，并将结果输入全自动血液流变仪得出血浆粘度(ηp)、血液粘度(ηb)、血液还原粘度(ηh)、血细胞聚集系数(VAL)、血栓形成系数(TEL)及微循环滞留时间(MST)。结果：EGB 25～100mg/kg均可不同程度地降低Fib、HCT，降低ηb、ηp、ηh，缩小VAL及TEL，缩短MST。结论：EGB可明显降低反复脑缺血再灌注小鼠的血液粘度、促进血液循环，对其血液流变性具明显的改善作用。
, 百拇医药
Effect of extracts of Ginkgo biloba leaves on hemorheology in repeated cerebral transient ischemia-reperfusion in mice
Zhou Lanlan(Zhou LL),Ming Liang(Ming L),Zuo Congwen(Zuo CW)
(Anhui Medical University,Hefei 230032)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the effect of EGB on hemorheology in repeated cerebral transient ischemia-reperfusion in mice.METHOD:Hemotocrit(HCT) and fibrinogen(FIB) were determinded by capillary micromethod and capillary heat microprecipitation method in mice models with repeated cerebral ischema-reperfusion.ηb,ηp,ηh,VAL,TEL and MST were also determined.RESULTS:With the dosage of EGB 25～100mg/kg HCT and FIB were reduced and there were also changes to ηb,ηh,ηp,VAL TEL and MST.CONCLUSION:These data suggested EGB had remarkedly decreasing effect on blood viscvsity and could obviously improve the blood circulation of repeated cerebral ischemia-reperfusion in mice.
, 百拇医药
KEY WORDS extracts of Ginkgo biloba leaves,cerebral ischemia-reperfusion,hemorheology
银杏叶提取物(extracts of Ginkgo biloba leaves,EGB)的主要有效成份为黄酮类和内酯类，具有广泛的药理作用。有研究表明，EGB具有扩张脑血管、增加脑血流量、促进脑血液循环的作用[1]，国外广泛用于心脑血管疾病的治疗[2]。反复脑缺血再灌注可升高血液粘度，降低脑局部血流量，严重影响机体的血液循环，但有关EGB对反复脑缺血再灌注致血液系统损害的影响尚未见报道。本文就EGB改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用进行了研究。
1 材料与方法
1.1 药品
EGB(安徽省金寨神栗食品有限公司，批号：9805011，其主要有效成份经高效液相仪检测为黄酮苷占33.84%,银杏内酯占11.18%);尼莫地平(山东新华制药股份有限公司，批号:970611)。
, 百拇医药
1.2 动物
昆明种小鼠，(30.0±3.0)g,♀♂各半(安徽医科大学实验动物中心，皖医实动准01)。随机分为6组：①反复脑缺血再灌注组；②假手术组；③尼莫地平100mg/kg组；④EGB 25、50和100mg/kg治疗组。
1.3 仪器
春光BRC-51型全自动血液流变仪(无锡春光医疗医学仪器厂)。
1.4 手术方法
反复脑缺血再灌注组：清醒小鼠仰位固定，行颈正中切口，分离双侧颈总动脉，穿线备用。用橡皮泥固定拉紧丝线阻断血流,10min后松线使血流复灌15min，如此反复3次；假手术组：只分离双侧颈总动脉，不阻断；尼莫地平100mg/kg组,EGB 25,50和100mg/kg治疗组,ig,qd×21d后均行反复脑缺血术。
, 百拇医药
1.5 检测方法
各组小鼠于术后72h行断头取血(用肝素抗凝管),2h内检测指标。按文献[3],应用毛细管微量热沉法和毛细管微量法分别检测纤维蛋白原(Fib)含量和红细胞压积(HCT)数值，然后将上述指标数值输入全自动血液流变仪，得出血浆粘度(ηp)、血液粘度(ηb)、血液还原粘度(ηh)、血细胞聚集系数(VAL)、血栓形成系数(TEL)及微循环滞留时间(MST)。
1.6 统计学处理
所有实验数据均以均值±标准差(±s)表示，采用组间t检验。
2 结 果
2.1 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT的影响
如表1所示，与假手术组比较，反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT数值升高，有显著统计学差异；与反复脑缺血再灌注组比较，EGB 25～100mg/kg组、尼莫地平100mg/kg组小鼠Fib显著降低,EGB25和50mg/kg组小鼠HCT显著降低。
, 百拇医药
表1 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠Fib、HCT的影响/±s 组 别
动物
数
剂量/
mg.kg-1
Fib/g.L-1
HCT/vol.L-1
假手术
8
-
3.23±0.69
, 百拇医药
41.70±4.69
反复脑缺血
9
-
3.91±0.72*1
47.29±3.75*1
再灌注
尼莫地平
8
100
2.79±0.52*2
42.70±3.50*3
, 百拇医药
EGB
8
25
2.76±0.87*2
39.51±2.32*2
8
50
2.42±0.31*2
42.28±1.56*2
8
100
2.97±0.90*3
, 百拇医药
42.44±2.95*3
注：与假手术组比较，*1P<0.05；与反复脑缺血再灌注组比较，*2P<0.01，*3P<0.05
2.2 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηh、ηp、VAL、MST和TEL的影响
如表2所示，与假手术组比较，反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηh、ηp数值明显升高，VAL和TEL明显增大，MST明显延长；与反复脑缺血再灌注组比较,EGB 25～100mg/kg组及尼莫地平100mg/kg组小鼠ηb、ηp、ηh显著降低，VAL及TEL明显减少，MST明显缩短。
3 讨 论
表2 EGB对反复脑缺血再灌注小鼠ηb、ηp、ηh、VAL、MST和TEL的影响/±s
, 百拇医药
组 别
剂量/mg.kg-1
ηb/mpa.s
ηp/mpa.s
ηh/mpa.s
VAL
MST/S
TEL
假手术
-
4.35±0.46
, http://www.100md.com
7.51±0.24
1.67±0.18
0.61±0.06
23.59±6.34
0.64±0.16
反复脑缺血再灌注
-
4.95±0.44*1
7.76±0.15*1
1.87±0.18*1
0.69±0.05*1
, 百拇医药
31.61±5.47*1
0.86±0.15*1
尼莫地平
100
4.53±0.11*2
7.62±0.05*2
1.56±0.31*2
0.64±0.02*2
19.94±9.66*2
0.54±0.26*2
, 百拇医药
EGB
25
4.19±0.28*3
7.42±0.13*3
1.58±0.21*2
0.58±0.03*3
18.70±6.00*3
0.51±0.17*3
50
4.41±0.15*3
, 百拇医药
7.56±0.07*3
1.49±0.08*1，*3
0.61±0.03*3
17.46±2.50*1，*3
0.47±0.07*1，*3
100
4.42±0.29*2
7.56±0.14*2
1.63±0.22*2
, http://www.100md.com
0.62±0.04*3
21.46±6.70*3
0.58±0.18*3
注：与假手术组比较，*1P<0.05；与反复脑缺血再灌注组比较，*2P<0.05，*3P<0.01(各组动物数同表1)
正常血液流变状态对维持机体的组织血液灌注非常重要，机体有很多因素影响血液流变性如血液粘度的高低，纤维蛋白原(Fib)的含量、红细胞压积(HCT)的大小、红细胞的变形能力及聚集性等。有文献报道，脑组织缺血缺氧后ATP耗竭，乳酸大量堆积，致使pH值降低，从而使红细胞胞膜对水的通透性增加，红细胞变形能力降低，聚集程度加剧，导致血粘度升高[4]。血粘度升高后，血流缓慢，使缺血组织的血液灌注减少，加重了脑组织的缺血缺氧，使脑缺血范围扩大，如此互相影响，形成恶性循环。本实验研究结果显示反复脑缺血再灌注使小鼠Fib、HCT均明显升高，血液粘度(ηb)、血浆粘度(ηp)及血液还原粘度(ηh)明显升高，红细胞聚集性明显增大，血栓形成机率增加，微循环滞留时间明显延长，说明反复脑缺血再灌注使机体的血流变因素发生了明显的异常，导致脑部血循环障碍，脑组织出现严重的血供氧供不足。
, 百拇医药
有研究发现，应用EGB治疗家兔心肌缺血再灌注损伤时，EGB可明显抑制缺血再灌注损伤所致的组织纤溶酶原激活因子(t-pA)的降低和纤溶酶原激活抑制因子1(PAI-1)的升高，从而调节纤维蛋白溶解过程，防止血栓形成[5]。本文研究结果显示EGB 25～100mg/kg均可不同程度地降低反复脑缺血再灌注小鼠的Fib、HCT，降低血细胞聚集性，缩短微循环滞留时间，减少血栓形成系数，降低血液粘度。说明EGB可有效改善脑缺血小鼠的血液流变性，增加缺血脑组织的血液灌注，改善脑功能。本室既往研究表明EGB可以促进反复脑缺血再灌注致痴呆小鼠的学习记忆能力，血流变的改善可能与其促智作用有关。但反复脑缺血的病理损害机制非常复杂，血流变的改变可能只是其中的一个因素，但本文研究结果提示EGB通过改善血液流变性来防治脑缺血，降低其致残率和死亡率应具有广阔的临床应用前景。
安徽省自然科学基金资助项目(95-医-20)
周兰兰，女，30岁。讲师，博士研究生
, 百拇医药
参考文献
1，刘玲玲，于心若.银杏药用价值.中草药，1994，25(4)∶219.
2，Maitra I,Marcocci L,Droy Lefaix MT,et al.Peroxyl radical scavenging activaty of Ginkgo biloba extract EGB 761.Biochem Pharmacol,1995,49(11)∶1649.
3，王天佑.血液流变学.第2版.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1992∶126.
4，张孝超，王景周，陈曼娥.红细胞变形性与缺血性脑卒中.国外医学脑血管疾病分册，1998，6(1)∶21.
5，Shen JG,Zhou DY.Efficiency of Ginkgo biloba extract(EGB 761) in antioxidant protection against myocardial ischemia and reperfusion injury.Biochem Mol Bliol Int,1995,35(1)∶125.
收稿日期：1999-01-04, http://www.100md.com