HPLC法同时测定注射用甲氧异腈中FSA和MIBI的含量
作者：周杏琴 胡名扬
单位：江苏省原子医学研究所核医学国家重点实验室 无锡 214063
关键词：反相高效液相色谱；注射用甲氧异腈 ；二氧硫脲；四(甲氧基异丁基异腈)络铜(Ⅰ)氟硼酸盐
中国现代应用药学000224
摘要 目的：采用RP-HPLC法同时测定了注射用甲氧异腈中两种说要成份二氧硫脲(FSA)和(甲氧基异丁基异腈)络铜(I)氟硼酸盐(MIBI)的含量。方法：以甲醇、磷酸二氢铵(80：20)为流动相，检测波长215mm，HPLC法测定含量。结果：试验表明，FSA和MIBI在25～125μg/ml，50～250μg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程分别为Y=0.23+0.02X(r=0.9946),Y=-2.19+0.03X(r=0.998),相对标准偏差分别为1.25%和0.42%。结论：该方法简便、准确、可靠。
, 百拇医药
Simultaneous Determination of MIBI and FSA in Methoxy Isobutyl Isonitri le for Injection by High performance Liquid Chromatography
Zhou Xingqin(Zhou XQ),Hu Mingyang(Hu MY)
(State Key Labor atory of Nuclear Medicine，Jiangsu Institute of Nuclear Medicine，WuXi 214063)
ABSTRACT OBJECTIVE：To develope a reversed-pha se high performance liquid chromatographic method for the simultaneous deteminat ion of MIBI and FSA in Methoxy Isobutyl Isonitril for Injection.METHOD:The mobile phase was methanol 80% and NH4H2PO4(0.01mol/l)20%.The detect or wavelength was set at 215nm and the flow rate was 1.2ml/min.RESULTS:The linear ranges were 25～125μg/ml(FSA)(Y=0.23+0.02X,r=0. 9946)，and 50～250μg/ml(MIBI)(Y=-2.19+0.03X,r=0.9998).The rel ative standard deviation was 1.25%(FSA)and 0.42%(MIBI)(n=5).CONCLUSION:This method was simple,rapid and sensitive.
, 百拇医药
KEY WORDS reversed-phase highperformance liquid chromatographic,me thoxy isobutyl isonitril for injection,formamidinesulfinic acid,tetra(methoxy is obutyl isonitril) copper(Ⅰ) borofluoride
注射用甲氧异腈是目前使 用最广泛的心肌灌注显像药物，对各种心血管疾病[1]、恶性肿瘤[2，3] 都有很好的临床诊断意义。其主要成份MIBI和FSA的含量对药盒的质量具有直接的影响，故 准确测定此两种成份的含量对药盒的质量控制极为重要。目前MIBI的含量通常采用原子吸收 光谱法测定，FSA的测定不是定量测定，为限度检查。本实验采用反相高效液相色谱法能同 时定量测定MIBI和FSA的含量。同时测定两种成份的方法未见文献报导。
1 试验部分
, 百拇医药
1.1 仪器与试剂
仪器：BIO-RAD 5000T型高效液相色谱仪；BIO-DIMENION二极管阵列检测器；7125型进样 器。
试剂：甲醇(色谱级)；水(二次蒸溜水)；其它试剂均为分析纯。所有试剂和样品均经 过0.45μm的滤膜过滤。
对照品：MIBI、FSA(核医学国家重点实验室药厂)。
样品(核医 学国家重点实验室药厂)。
1.2 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2(5μm,4.6×150mm，大连化物所)；流动相：甲醇80%，磷酸二氢铵( 0.01mol/L)20%；流速1.2ml/min；检测波长215nm；检测器灵敏度0.05AUFS；压力1600psi； 进样量20μl；室温操作。
, 百拇医药
1.3 样品处理
注射用甲氧异腈冻干品2瓶 ，用洗脱液溶解并转移至10ml容量瓶内定容，摇匀，经0.45μm有机相微孔滤膜过滤后备用 。
2 结果与讨论
2.1 流动相的选择
配制不同比例的甲醇和磷酸二氢铵混合液，甲醇在80%、0.01mol/L磷酸二氢铵为20%时，注 射用甲氧异腈中FSA和MIBI能达到较好的分离度。甲醇浓度低于80%时峰发生拖尾。
2.2 干扰因素的考察
按处方配制不含MIBI和FSA作阴性试验，色谱图显 示不含有与FSA和MIBI重迭的色谱峰；用对照品FSA和MIBI在相同条件下所得色谱图，其保留 时间与注射用甲氧异腈中两峰的保留时间相吻合；从200～320nm扫描，FSA与MIBI的最大吸 收波长均为215nm。色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 色谱图
a-不加FSA和MIBI的阴性色谱图 ；b-注射用甲氧异腈色谱图；c-对照品MIBI的色谱图；d-对照品FSA的色谱图
2.3 线性关系考察
精密称取干燥恒重的FSA 12.5mg、MIBI 25mg分别用流动相溶解，在50ml容量瓶中定容，分 别精密量取1，2，3，4和5 ml置10ml的容量瓶中，用流动相定容，分别进样20μl,每个样品 重复进样3次，积分面积(以Million为单元)对样品量作图,回归方程式为FSA：Y=0. 23+0.02X，r=0.9946,在25～125μg/ml 的范围内呈良好的线性关系；MIBI：Y=-2.19+0.03X，r=0.9998，在50～250μg/ml的范围内呈良好的线性关系 。
2.4 回收率与精密度的测定
, 百拇医药
按处方配比，在辅料中分别精密加入一定量的FSA和MIBI对照品，加流动相至50ml量瓶中定 容，进样20μl，测得回收率见表1。用一已知含量的样品，进样20μl，连续做5次，测得峰 面积的相对标准偏差分别为FSA RSD=1.25%，MIBI RSD= 0.42%。
表1 回收率测定
加入量
/μg.ml- 1
测得量
/μg.ml-1
回收率
/%
, 百拇医药 平均回收
率/%
FSA
25
24.83
9 9.32
75
75.87
101.16
100.63
100
101.4
101.4
, 百拇医药
MIBI
50
50.2
100.4
150
148.9
99.27
99.92
200
200.2
100.1
2.5 样品测定
取同一批号的注射用甲氧异腈2瓶，用流动 相溶解，转移至10ml的量瓶中，过滤，取清液进样20μl，以上述两条标准曲线计算，所得 含量见表2。表2 二种方法的含量测定结果 批 号
, 百拇医药
MIBI标示量/%
二氧硫脲标
示量/ %
原子吸收法
HPLC法
971103
106.4
104.8
48.8
970806
105.2
104.5
59.4
, http://www.100md.com
971208
105.8
103.7
60.6
970901
107.6
106.1
63.1
参考文献
1，李维绥，吴可贵，林好学,等.99mTc-MIBI心肌spect显 像与心电图诊断冠心病的价值.中华核医学杂志，1997，17(4)∶240.
2，杜勇，任长征，龙艳.乳腺肿块99mTc-MIBI显像规律与 其组织病理学关系的探讨.中华核医学杂志，1997，17(2)∶43.
3，王辉，Simone Maurea,CiroMainoifi,等.99mTc-MIBI s pect显像诊断肺癌的临床评价.中华核医学杂志，1996，16(4)∶257.
收稿日期：1998-11-02, 百拇医药
单位：江苏省原子医学研究所核医学国家重点实验室 无锡 214063
关键词：反相高效液相色谱；注射用甲氧异腈 ；二氧硫脲；四(甲氧基异丁基异腈)络铜(Ⅰ)氟硼酸盐
中国现代应用药学000224
摘要 目的：采用RP-HPLC法同时测定了注射用甲氧异腈中两种说要成份二氧硫脲(FSA)和(甲氧基异丁基异腈)络铜(I)氟硼酸盐(MIBI)的含量。方法：以甲醇、磷酸二氢铵(80：20)为流动相，检测波长215mm，HPLC法测定含量。结果：试验表明，FSA和MIBI在25～125μg/ml，50～250μg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程分别为Y=0.23+0.02X(r=0.9946),Y=-2.19+0.03X(r=0.998),相对标准偏差分别为1.25%和0.42%。结论：该方法简便、准确、可靠。
, 百拇医药
Simultaneous Determination of MIBI and FSA in Methoxy Isobutyl Isonitri le for Injection by High performance Liquid Chromatography
Zhou Xingqin(Zhou XQ),Hu Mingyang(Hu MY)
(State Key Labor atory of Nuclear Medicine，Jiangsu Institute of Nuclear Medicine，WuXi 214063)
ABSTRACT OBJECTIVE：To develope a reversed-pha se high performance liquid chromatographic method for the simultaneous deteminat ion of MIBI and FSA in Methoxy Isobutyl Isonitril for Injection.METHOD:The mobile phase was methanol 80% and NH4H2PO4(0.01mol/l)20%.The detect or wavelength was set at 215nm and the flow rate was 1.2ml/min.RESULTS:The linear ranges were 25～125μg/ml(FSA)(Y=0.23+0.02X,r=0. 9946)，and 50～250μg/ml(MIBI)(Y=-2.19+0.03X,r=0.9998).The rel ative standard deviation was 1.25%(FSA)and 0.42%(MIBI)(n=5).CONCLUSION:This method was simple,rapid and sensitive.
, 百拇医药
KEY WORDS reversed-phase highperformance liquid chromatographic,me thoxy isobutyl isonitril for injection,formamidinesulfinic acid,tetra(methoxy is obutyl isonitril) copper(Ⅰ) borofluoride
注射用甲氧异腈是目前使 用最广泛的心肌灌注显像药物，对各种心血管疾病[1]、恶性肿瘤[2，3] 都有很好的临床诊断意义。其主要成份MIBI和FSA的含量对药盒的质量具有直接的影响，故 准确测定此两种成份的含量对药盒的质量控制极为重要。目前MIBI的含量通常采用原子吸收 光谱法测定，FSA的测定不是定量测定，为限度检查。本实验采用反相高效液相色谱法能同 时定量测定MIBI和FSA的含量。同时测定两种成份的方法未见文献报导。
1 试验部分
, 百拇医药
1.1 仪器与试剂
仪器：BIO-RAD 5000T型高效液相色谱仪；BIO-DIMENION二极管阵列检测器；7125型进样 器。
试剂：甲醇(色谱级)；水(二次蒸溜水)；其它试剂均为分析纯。所有试剂和样品均经 过0.45μm的滤膜过滤。
对照品：MIBI、FSA(核医学国家重点实验室药厂)。
样品(核医 学国家重点实验室药厂)。
1.2 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2(5μm,4.6×150mm，大连化物所)；流动相：甲醇80%，磷酸二氢铵( 0.01mol/L)20%；流速1.2ml/min；检测波长215nm；检测器灵敏度0.05AUFS；压力1600psi； 进样量20μl；室温操作。
, 百拇医药
1.3 样品处理
注射用甲氧异腈冻干品2瓶 ，用洗脱液溶解并转移至10ml容量瓶内定容，摇匀，经0.45μm有机相微孔滤膜过滤后备用 。
2 结果与讨论
2.1 流动相的选择
配制不同比例的甲醇和磷酸二氢铵混合液，甲醇在80%、0.01mol/L磷酸二氢铵为20%时，注 射用甲氧异腈中FSA和MIBI能达到较好的分离度。甲醇浓度低于80%时峰发生拖尾。
2.2 干扰因素的考察
按处方配制不含MIBI和FSA作阴性试验，色谱图显 示不含有与FSA和MIBI重迭的色谱峰；用对照品FSA和MIBI在相同条件下所得色谱图，其保留 时间与注射用甲氧异腈中两峰的保留时间相吻合；从200～320nm扫描，FSA与MIBI的最大吸 收波长均为215nm。色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 色谱图
a-不加FSA和MIBI的阴性色谱图 ；b-注射用甲氧异腈色谱图；c-对照品MIBI的色谱图；d-对照品FSA的色谱图
2.3 线性关系考察
精密称取干燥恒重的FSA 12.5mg、MIBI 25mg分别用流动相溶解，在50ml容量瓶中定容，分 别精密量取1，2，3，4和5 ml置10ml的容量瓶中，用流动相定容，分别进样20μl,每个样品 重复进样3次，积分面积(以Million为单元)对样品量作图,回归方程式为FSA：Y=0. 23+0.02X，r=0.9946,在25～125μg/ml 的范围内呈良好的线性关系；MIBI：Y=-2.19+0.03X，r=0.9998，在50～250μg/ml的范围内呈良好的线性关系 。
2.4 回收率与精密度的测定
, 百拇医药
按处方配比，在辅料中分别精密加入一定量的FSA和MIBI对照品，加流动相至50ml量瓶中定 容，进样20μl，测得回收率见表1。用一已知含量的样品，进样20μl，连续做5次，测得峰 面积的相对标准偏差分别为FSA RSD=1.25%，MIBI RSD= 0.42%。
表1 回收率测定
加入量
/μg.ml- 1
测得量
/μg.ml-1
回收率
/%
, 百拇医药 平均回收
率/%
FSA
25
24.83
9 9.32
75
75.87
101.16
100.63
100
101.4
101.4
, 百拇医药
MIBI
50
50.2
100.4
150
148.9
99.27
99.92
200
200.2
100.1
2.5 样品测定
取同一批号的注射用甲氧异腈2瓶，用流动 相溶解，转移至10ml的量瓶中，过滤，取清液进样20μl，以上述两条标准曲线计算，所得 含量见表2。表2 二种方法的含量测定结果 批 号
, 百拇医药
MIBI标示量/%
二氧硫脲标
示量/ %
原子吸收法
HPLC法
971103
106.4
104.8
48.8
970806
105.2
104.5
59.4
, http://www.100md.com
971208
105.8
103.7
60.6
970901
107.6
106.1
63.1
参考文献
1，李维绥，吴可贵，林好学,等.99mTc-MIBI心肌spect显 像与心电图诊断冠心病的价值.中华核医学杂志，1997，17(4)∶240.
2，杜勇，任长征，龙艳.乳腺肿块99mTc-MIBI显像规律与 其组织病理学关系的探讨.中华核医学杂志，1997，17(2)∶43.
3，王辉，Simone Maurea,CiroMainoifi,等.99mTc-MIBI s pect显像诊断肺癌的临床评价.中华核医学杂志，1996，16(4)∶257.
收稿日期：1998-11-02, 百拇医药