HPLC法同时测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬的含量
作者：钟玉莲
单位：广州市药品检验所 广州 510160
关键词：HPLC；甲硝唑；芬布芬
中国现代应用药学000223 摘要 目的：建立测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-0. 01mol/L十二烷基硫酸钠(63∶37)(用磷酸调节pH值至2.5),检测波长为295nm.结 果：同时测定甲硝唑和芬布芬的含量。甲硝唑平均回收率为99.8%,n=6,RSD为0.40%。芬布芬平均回收率为100.1%,n=6,RSD为0.36%。结论 ：本方法简便、快速、可靠，可用于牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬的含量测定。
Simultaneous determinatio n of metronidazole and fenbufen in the Yazhoukang capsule by HPLC
, 百拇医药
Zhong Yulian(Zhong YL)
(Guangzhou Cicy Institute of Drug Control,Guangzhou 510160)
ABSTRACT OBJECTIVE：T o establish a method for determination of metronidazole and fenbufen in the Yazh oukang capsule.METHODS:The HPLC method empolyed a C18 column w ith the mobile phase methanol-0.01mol/L sodium dodecyl sulphate(63∶37)(adjuste d the solution with phosphoric acid to pH 2.5).The detection wavelength was set a 295nm.RESULTS:The content of metronidazole and that of fenbufen wa s assaged respectively.The average recovery for metronidazole was 99.8%(n= 6),RSD=0.40%,and the average recovery for fenbufen was 100.1%(n=6),R SD=0.36%.CONCLUSION:The method is simple,fast and reliable.It was a good method for the determination of metronidazole and fenbufen in the Yaz houkang capsule.
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KEY WORDS HPLC,metronidazole,fenbufen
牙周康胶囊由甲硝唑(metronidazole)100mg与芬布芬(fenbufen)75mg组成的 复方制剂，具有消炎止痛双重功效。适用于治疗溃疡性牙龈炎，牙周炎，齿龈脓肿以及棱状 杆菌引起的急性牙感染和拨牙前后的消炎止痛。该品种在广东省药品标准[1]收载 ，其甲硝唑的含量测定方法是采用紫外分光光度法，芬布芬的含量测定方法是采用酸碱滴定 法。本文参考有关文献[2]采用HPLC同时测定牙周康胶囊中两组分的含量，该方法 简便快捷，专属性强，结果准确。与广东省药品标准方法对比结果基本一致。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-10A型高效液 相色谱仪,SPD-10A紫外检测器，岛津C-R6A型数据处理机。
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1.2 试药
牙周康胶囊、甲硝唑及芬布芬对照品(广州欧化药业有限公司 )；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱 条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶(Lichrospher 100RP-18 5μm,4×125mm,德国默克 公司)；流动相：甲醇-0.01mol/L十二烷基硫酸钠溶液(63∶37)(用磷酸调节pH值至2.5);流 速:1.0ml/min;检测波长:295nm;进样量:20μl。
2.2 线性关系
对照品贮备液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的甲硝 唑对照品25mg与芬布芬对照品18.75mg置100ml量瓶中，加甲醇适量超声溶解，并稀释至刻度 ，摇匀。精密量取0.5,1,2,4,8和16ml,分别置于25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。 取20μl注入液相色谱仪，记录各浓度的色谱峰面积，以浓度为x，峰面积为Y进行 线性回归，得线性回归方程：甲硝唑为Y=5610.3+26130.8x,r=0.9999(n=6),线性 范围为5～160μg/ml;芬布芬为Y=17408.6+64369.4x,r=1.0000(n=6),线性范围为3.75 ～120μg/ml。
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2.3 回收率试验
精密称取已知含量的样品内容物适量 ，分别各加甲硝唑对照品15,25和35mg及芬布芬对照品10,20和30mg,照样品测定项下的方法 测定，测得平均回收率甲硝唑为99.8%,RSD为0.40%,芬布芬为100.1%,RS D为0.36%(n=6)。
2.4 样品的测定
取本品20粒内容物，精密称定，混匀。精密称取适量(约相当于甲硝唑50mg及芬布芬37.5mg) 置100ml量瓶中，加甲醇适量超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml置 50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；另取甲硝唑与芬布芬对照品照对照品贮备液的 制备方法制成浓度甲硝唑为50μg/ml,芬布芬为37μg/ml的溶液，在选定的色谱条件下对照 液与样品液分别进样20μl,记录各自的色谱峰面积，用外标法计算样品液中甲硝唑与芬布芬 的含量。测定样品4批并与原方法对比，结果见表1。
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表1 各自两法测定结果比较 批 号
甲硝唑
芬布芬
原方法/%
HPLC/%
原方法/%
HPLC/%
980322
101.8
101.7
100.6
100.0
, http://www.100md.com 980504
103.8
104.5
101.1
99.5
980505
105.0
104.5
101.3
100.6
980506
103.6
104.3
, 百拇医药
101.0
99.4
2.5 精密度与稳定性试验
取制备好的样品溶液连续进样5次，峰面积基 本无变化，甲硝唑RSD为0.3%(n=5),芬布芬RSD 为0.1%(n=5)。取同一份样品溶液分别在0,2,4,8和24h进行测定，结果24h内峰 面积基本无变化，甲硝唑RSD为0.5%,芬布芬RSD为0.3%。
3 讨 论
3.1 波长的选择 通过绘制甲硝唑和芬布 芬两种成份的各自紫外吸收图谱，选定295nm为检测波长，在此波长甲硝唑和芬布芬吸收度 适宜，能满足测定的需要。
3.2 溶剂的选择 因甲硝唑在乙醇中略溶 ，在水中微溶[3]；芬布芬在乙醇中溶解，在水中几乎不溶[4]，为了溶解 完全，故第一步选甲醇作溶剂并超声助溶。
, 百拇医药
3.3 流动相的选择 参考 有关文献在原基础上加以修改，加大了十二烷基硫酸钠的浓度，使芬布芬峰形有所改善，减 少甲醇比例使甲硝唑延长其保留时间，曾分别用pH2.0,2.5,3.0,3.5和4.0的流动相试验，甲 硝唑和芬布芬的出峰时间与峰形在pH2.5的流动相较为适宜。在本文选用的色谱条件下，两 种成份的峰形尖锐，较对称，分离度达8以上,9min内即可完成整个色谱过程。
参考文献
1，广东省药品标准.粤Q/WS-2631-96.
2，Yoshihiro K,Kohji N,Nobuhiro I,et al. Simplified procedures for the simultaneous determination of enoxacin ,fenbufen and felbinac in rat plasma by high-performance liquid chromatography.Byoin Yakugaku,1989,15(4):292.
3，中国药典.二部.1995:152.
4，中国药典.二部.1995:261.
收稿日期：1999-04-27, 百拇医药
单位：广州市药品检验所 广州 510160
关键词：HPLC；甲硝唑；芬布芬
中国现代应用药学000223 摘要 目的：建立测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量的方法。方法：高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相：甲醇-0. 01mol/L十二烷基硫酸钠(63∶37)(用磷酸调节pH值至2.5),检测波长为295nm.结 果：同时测定甲硝唑和芬布芬的含量。甲硝唑平均回收率为99.8%,n=6,RSD为0.40%。芬布芬平均回收率为100.1%,n=6,RSD为0.36%。结论 ：本方法简便、快速、可靠，可用于牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬的含量测定。
Simultaneous determinatio n of metronidazole and fenbufen in the Yazhoukang capsule by HPLC
, 百拇医药
Zhong Yulian(Zhong YL)
(Guangzhou Cicy Institute of Drug Control,Guangzhou 510160)
ABSTRACT OBJECTIVE：T o establish a method for determination of metronidazole and fenbufen in the Yazh oukang capsule.METHODS:The HPLC method empolyed a C18 column w ith the mobile phase methanol-0.01mol/L sodium dodecyl sulphate(63∶37)(adjuste d the solution with phosphoric acid to pH 2.5).The detection wavelength was set a 295nm.RESULTS:The content of metronidazole and that of fenbufen wa s assaged respectively.The average recovery for metronidazole was 99.8%(n= 6),RSD=0.40%,and the average recovery for fenbufen was 100.1%(n=6),R SD=0.36%.CONCLUSION:The method is simple,fast and reliable.It was a good method for the determination of metronidazole and fenbufen in the Yaz houkang capsule.
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KEY WORDS HPLC,metronidazole,fenbufen
牙周康胶囊由甲硝唑(metronidazole)100mg与芬布芬(fenbufen)75mg组成的 复方制剂，具有消炎止痛双重功效。适用于治疗溃疡性牙龈炎，牙周炎，齿龈脓肿以及棱状 杆菌引起的急性牙感染和拨牙前后的消炎止痛。该品种在广东省药品标准[1]收载 ，其甲硝唑的含量测定方法是采用紫外分光光度法，芬布芬的含量测定方法是采用酸碱滴定 法。本文参考有关文献[2]采用HPLC同时测定牙周康胶囊中两组分的含量，该方法 简便快捷，专属性强，结果准确。与广东省药品标准方法对比结果基本一致。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-10A型高效液 相色谱仪,SPD-10A紫外检测器，岛津C-R6A型数据处理机。
, http://www.100md.com
1.2 试药
牙周康胶囊、甲硝唑及芬布芬对照品(广州欧化药业有限公司 )；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱 条件
固定相：十八烷基硅烷键合硅胶(Lichrospher 100RP-18 5μm,4×125mm,德国默克 公司)；流动相：甲醇-0.01mol/L十二烷基硫酸钠溶液(63∶37)(用磷酸调节pH值至2.5);流 速:1.0ml/min;检测波长:295nm;进样量:20μl。
2.2 线性关系
对照品贮备液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的甲硝 唑对照品25mg与芬布芬对照品18.75mg置100ml量瓶中，加甲醇适量超声溶解，并稀释至刻度 ，摇匀。精密量取0.5,1,2,4,8和16ml,分别置于25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。 取20μl注入液相色谱仪，记录各浓度的色谱峰面积，以浓度为x，峰面积为Y进行 线性回归，得线性回归方程：甲硝唑为Y=5610.3+26130.8x,r=0.9999(n=6),线性 范围为5～160μg/ml;芬布芬为Y=17408.6+64369.4x,r=1.0000(n=6),线性范围为3.75 ～120μg/ml。
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2.3 回收率试验
精密称取已知含量的样品内容物适量 ，分别各加甲硝唑对照品15,25和35mg及芬布芬对照品10,20和30mg,照样品测定项下的方法 测定，测得平均回收率甲硝唑为99.8%,RSD为0.40%,芬布芬为100.1%,RS D为0.36%(n=6)。
2.4 样品的测定
取本品20粒内容物，精密称定，混匀。精密称取适量(约相当于甲硝唑50mg及芬布芬37.5mg) 置100ml量瓶中，加甲醇适量超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml置 50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；另取甲硝唑与芬布芬对照品照对照品贮备液的 制备方法制成浓度甲硝唑为50μg/ml,芬布芬为37μg/ml的溶液，在选定的色谱条件下对照 液与样品液分别进样20μl,记录各自的色谱峰面积，用外标法计算样品液中甲硝唑与芬布芬 的含量。测定样品4批并与原方法对比，结果见表1。
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表1 各自两法测定结果比较 批 号
甲硝唑
芬布芬
原方法/%
HPLC/%
原方法/%
HPLC/%
980322
101.8
101.7
100.6
100.0
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103.8
104.5
101.1
99.5
980505
105.0
104.5
101.3
100.6
980506
103.6
104.3
, 百拇医药
101.0
99.4
2.5 精密度与稳定性试验
取制备好的样品溶液连续进样5次，峰面积基 本无变化，甲硝唑RSD为0.3%(n=5),芬布芬RSD 为0.1%(n=5)。取同一份样品溶液分别在0,2,4,8和24h进行测定，结果24h内峰 面积基本无变化，甲硝唑RSD为0.5%,芬布芬RSD为0.3%。
3 讨 论
3.1 波长的选择 通过绘制甲硝唑和芬布 芬两种成份的各自紫外吸收图谱，选定295nm为检测波长，在此波长甲硝唑和芬布芬吸收度 适宜，能满足测定的需要。
3.2 溶剂的选择 因甲硝唑在乙醇中略溶 ，在水中微溶[3]；芬布芬在乙醇中溶解，在水中几乎不溶[4]，为了溶解 完全，故第一步选甲醇作溶剂并超声助溶。
, 百拇医药
3.3 流动相的选择 参考 有关文献在原基础上加以修改，加大了十二烷基硫酸钠的浓度，使芬布芬峰形有所改善，减 少甲醇比例使甲硝唑延长其保留时间，曾分别用pH2.0,2.5,3.0,3.5和4.0的流动相试验，甲 硝唑和芬布芬的出峰时间与峰形在pH2.5的流动相较为适宜。在本文选用的色谱条件下，两 种成份的峰形尖锐，较对称，分离度达8以上,9min内即可完成整个色谱过程。
参考文献
1，广东省药品标准.粤Q/WS-2631-96.
2，Yoshihiro K,Kohji N,Nobuhiro I,et al. Simplified procedures for the simultaneous determination of enoxacin ,fenbufen and felbinac in rat plasma by high-performance liquid chromatography.Byoin Yakugaku,1989,15(4):292.
3，中国药典.二部.1995:152.
4，中国药典.二部.1995:261.
收稿日期：1999-04-27, 百拇医药