冻干麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗的研制
作者：张信 魏树源 曹涛 祁春华 方志正
单位：卫生部武汉生物制品研究所， 武汉 430060
关键词：麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗；稳定性；中和试验
同济医科大学学报000214 摘要：由麻疹病毒沪191株和腮腺炎病毒WM84株在SPF鸡胚成纤维细胞上制备的单价病毒液 ，在特定的工艺流程中，按比例配制后加入适宜的保护剂，经冻干而制备成冻干麻疹流行性 腮腺炎二联活疫苗。6批冻干二联疫苗经自检和中国药品生物制品检定所检定，结果提示： 冻干疫苗的基础滴度与热稳定性等指标均符合WHO规程和《中国生物制品规程》(1995年版) 中对单价麻疹疫苗和单价腮腺炎疫苗的规程要求；冻干二联疫苗在2～8 ℃保存18个月的 滴度稳定性与单价疫苗一致。
中图法分类号：R979.5， R511.1， R512.1
, 百拇医药
Development of Measles Mumps Combined Vaccine
Zhang Xin, Wei Shuyuan, Chao Tao et al
Institute of Wuhan Biological Products, Wuhan 430060
Abstract：A lyophilized live measles mumps combined vaccine, in which the strain S191 (measles) and WM84 (mumps) were used on chick embryo fibro blast of SPF poultry flocks, was developed according to the specially designated proportion of measles:mumps:stability. Six patches of the lyophilized combined vaccine were tested by National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products. The results showed that the quality of 6 patches of measles mumps combined vaccine met the current criterion of WHO and national standards of China for monovalent vaccine in basic titer and stability, ect. After being s tored at 2 to 8 ℃ for 18 months, the stability of the combined vaccine was ba sically consistent with that of monovalent vaccine under the same conditions.
, 百拇医药
Key words：live measles mumps combined vaccine; stability; neutralizing test
在欧美发达国家，麻腮风(MMR)三联疫苗作为常规免疫疫苗已生产使用多年，长期人体 观察结果表明，该联合疫苗在抗体产生强度方面与单价疫苗相同，且一般人均可耐受。在国 内，麻疹疫苗作为常规接种疫苗已使用多年，WM84株腮腺炎疫苗已使用多年，虽未列入常规 免疫计划，但从国内外免疫经验来看，为控制和减少流行性腮腺炎的流行，有必要进一步扩 大接种率。麻疹、腮腺炎二联疫苗及其相关制品的研制和开发已经成为一种趋势。我所自80 年代开始研究麻腮二联活疫苗，1997年又陆续研制多批疫苗，经中国药品生物制品检定所检 定合格。
1 材料与方法
1.1 单价麻疹疫苗和腮腺炎疫苗的制备
, 百拇医药 按《中国生物制品规程》(1995版)规程的要求[1]，由山东省农业科学研究院SPF 实验种鸡场提供的7 d龄以内SPF鸡蛋，在38 ℃孵化10 d，挑拣发育良好的鸡胚，用胰蛋白 酶(Gibco公司产品)消化后制成原代鸡胚成纤维细胞，分别采用麻疹病毒沪191株30代，腮 腺炎病毒WM84株14代按MOI为100∶1的比例，同时接种后置于定温温室培养，用以制备单价 的麻疹疫苗和腮腺炎疫苗。细胞培养液为1 g/L水解乳蛋白(Gibco公司产品)欧氏液和30 m l/L的无支原体污染的小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所产品)，疫苗液为含2.5 g/L白蛋白的199(Gibco公司产品)液 。
1.2 麻疹腮腺炎二联疫苗的制备
将用以上方法所制备的单价麻疹和腮腺炎疫苗，分别按单价疫苗液∶199液为1∶1、1∶2、 1∶3的比例分3组稀释后检测疫苗滴度，以选择二联疫苗中麻疹、腮腺炎疫苗的混合比例。参照文献报道: 麻疹腮腺炎二联疫苗中麻疹病毒>1000 CCID50/人份，腮腺炎病毒>50 00 CCID50/人份[2～4]，同时也考虑到冻干过程中疫苗滴度下降及热稳定性 要求等，而确定了制备麻疹腮腺炎二联疫苗中的单价麻疹和腮腺炎疫苗的冻干配比前滴度。 二联疫苗冻干保护剂和冻干工艺参照现行疫苗的要求执行[1，5]。
, 百拇医药
1.3 实验室检测
二联疫苗病毒检测项目及所用方法按照《中国生物制品规程》(1995版)要求执行。麻 疹腮腺炎二联疫苗病毒效价检测过程中必须用特定抗血清在37℃ 1 h分别中和对应的病毒后 ，才能使用微量细胞病变(CPE)法检测。麻疹和腮腺炎病毒的效价检测分别用Fl和Vero细 胞，抗麻疹病毒标准血清和抗腮腺炎病毒标准血清，均来源于中国药品生物制品检定所。
2 结果
2.1 单价疫苗冻干配比前滴度的确定
不同比例稀释的2种单价疫苗滴度检定结果表明1∶1配比滴度下降约0.3 logCCID50/ ml，1∶2下降约0.5 logCCID50/ml，1∶3下降约0.8 logCCID50/ml, 同时考 虑到疫苗滴度在冻干过程及热稳定性方面的损失，确定配比前的麻疹疫苗滴度应≥5.0 log CCID50/ml，腮腺炎滴度应≥5.5 logCCID50/ml。结果见表1。
, 百拇医药
表1 不同比例稀释的单价疫苗滴度检测结果 疫 苗
病毒液滴度
稀释后滴度
1∶1
1∶2
1∶3
麻 疹
5.00
4.80
4.63
4.25
5.00
4.63
, http://www.100md.com
4.38
3.88
5.00
4.75
4.50
4.13
腮腺炎
5.50
5.25
5.00
4.88
5.50
5.13
, 百拇医药
4.88
4.63
5.50
5.38
5.13
4.75
2.2 麻疹腮腺炎二联疫苗的检定结果
根据以上实验结果确定的单价疫苗冻干配比条件，制备6批麻疹腮腺炎二联疫苗, 冻干后的 麻疹和腮腺炎病毒效价检测结果见表2、3。其它检测项目：安全、无菌、水分含量、残余牛 血清含量均达到《中国生物制品规程》(1995版)单价疫苗标准。表2 6批冻干麻疹腮腺炎二联疫苗的检定结果 二联疫苗
批号
, 百拇医药
病毒名称
滴度
水份
(%)
残余牛血清
(ng/ml)
4℃ 37 ℃ 7 d
试970901
麻 疹
4.80
4.30
2.04
25
, http://www.100md.com
腮腺炎
5.18
4.80
试970902
麻 疹
4.68
4.18
2.58
25
腮腺炎
5.43
5.18
试970903
, 百拇医药
麻 疹
4.93
4.55
1.76
25
腮腺炎
5.30
4.93
试980501
麻 疹
4.18
3.93
2.65
, http://www.100md.com
25
腮腺炎
5.05
4.80
试980502
麻 疹
3.93
3.80
2.23
25
腮腺炎
4.93
4.68
, 百拇医药
试980503
麻 疹
4.18
3.93
2.44
25
腮腺炎
5.05
4.18
表3 中国药品生物制品检定所报告的检定结果 二联疫苗
批号
病毒名称
滴度
, http://www.100md.com
水份
(%)
残余牛血清
(ng/ml)
4℃ 37 ℃ 7 d
试980501
麻 疹
3.75
3.63
2.01
3.13
腮腺炎
4.50
, 百拇医药
4.00
试980502
麻 疹
4.00
3.63
2.06
<3.13
腮腺炎
4.50
4.13
试980503
麻 疹
4.00
, http://www.100md.com
3.88
2.22
<3.13
腮腺炎
4.75
4.55
2.3 麻疹腮腺炎二联疫苗的稳定性
6批麻疹腮腺炎二联疫苗37 ℃ 7 d后麻疹病毒滴度为3.80～4.55，腮腺炎病毒滴度为4 .18～5.18 logCCID50/ml, 麻疹病毒滴度下降0.13～0.50 logCCID50/ml, 腮腺炎病毒滴度下降0.25～0.37 logCCID50/ml(表2)；在不同时间观察3批二联疫 苗的病毒滴度变化，结果显示：2～8 ℃保存18个月，病毒滴度下降≤1.0 logCCID5 0/ml(表4)，二联苗与单价苗的稳定性一致，达到《中国生物制品规程》(1995年版)单 价疫苗的规程要求。 表4 麻腮二联疫苗与单价疫苗2～8 ℃稳定性比较 疫苗批号
, 百拇医药
病毒名称
不同贮存期滴度 (月)
0
6
9
12
15
18
二联疫苗
试970901
麻 疹
4.80
4.80
, http://www.100md.com
4.55
4.55
4.43
4.30
腮腺炎
5.18
4.93
5.05
5.18
4.93
4.80
试970902
麻 疹
, 百拇医药
4.93
4.55
4.43
4.30
4.18
3.93
腮腺炎
5.05
5.05
5.18
4.93
4.80
4.80
, 百拇医药
试970903
麻 疹
5.05
4.80
4.55
4.43
4.43
4.18
腮腺炎
4.93
4.80
4.93
4.80
, 百拇医药
4.80
4.93
单价疫苗
试970901
麻 疹
5.05
4.93
4.55
4.30
4.30
4.05
试970901
腮腺炎
, http://www.100md.com
5.18
4.93
5.05
4.80
4.80
4.75
3 讨论
麻疹、腮腺炎单价活疫苗国内外已使用多年。80年代以来，欧美等国普遍推广麻腮风(MMR )三联疫苗，经临床观察证明与单价苗一样安全有效。在国内麻疹疫苗已列入常规免疫计划 ，流腮疫苗已开始广泛应用，所以制备麻腮二联疫苗已成为必然趋势。目前国际上公认 J eryl-Lynn是安全有效的疫苗株，我所的流腮WM84株在多年的使用中被证明：人体反应轻微 、免疫应答高，具有很高的人体保护率。在麻腮二联苗研制过程中，参照文献报道，考虑到 麻疹疫苗相对滴度低，冻干损失大，而流腮WM84株疫苗稳定性好，采用提高二联疫苗中麻疹 病毒数的同时仍保持流腮病毒数多于麻疹病毒数的混合比例，获得较好结果。
, http://www.100md.com
按研制工艺制备的6批疫苗，自检结果和中国药品生物制品检定所检定结果均符合单价苗规 程，该二联苗的稳定性与单价苗一致。
鉴于流腮WM84株系我所自行研制的毒株，该二联疫苗的人群保护效果，将有待今后人体流行 病学观察结果验证。
张信，男，1962年生，生物医学工程师
参考文献
1，中华人民共和国卫生部. 中国生物制品规程(一部), 1995. 126～127
2，卫生部生物制品标准化委员会办公室. 国外生物制品质量标准比较, 1997. 16 ～17
3，Nicole B, Gaston D S, Samuel P et al. Measles,Mumps,and Rubella antibodies in children 5～6 years after immunization:effect of vaccine type and age at vaccination. Vaccine, 1995, 13: 1611
4，Hristo O, Nina G. Vaccinoprophylaxis of mumps using mumps vaccine, strain Sofia 6, in Bulgaria. Vaccine, 1994,12：1251
5，方志正. 冻干麻疹活疫苗保护剂及冻干条件的比较. 中国生物制品学杂志，1997，10(1)： 47
(收稿：1999-09-07), 百拇医药
单位：卫生部武汉生物制品研究所， 武汉 430060
关键词：麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗；稳定性；中和试验
同济医科大学学报000214 摘要：由麻疹病毒沪191株和腮腺炎病毒WM84株在SPF鸡胚成纤维细胞上制备的单价病毒液 ，在特定的工艺流程中，按比例配制后加入适宜的保护剂，经冻干而制备成冻干麻疹流行性 腮腺炎二联活疫苗。6批冻干二联疫苗经自检和中国药品生物制品检定所检定，结果提示： 冻干疫苗的基础滴度与热稳定性等指标均符合WHO规程和《中国生物制品规程》(1995年版) 中对单价麻疹疫苗和单价腮腺炎疫苗的规程要求；冻干二联疫苗在2～8 ℃保存18个月的 滴度稳定性与单价疫苗一致。
中图法分类号：R979.5， R511.1， R512.1
, 百拇医药
Development of Measles Mumps Combined Vaccine
Zhang Xin, Wei Shuyuan, Chao Tao et al
Institute of Wuhan Biological Products, Wuhan 430060
Abstract：A lyophilized live measles mumps combined vaccine, in which the strain S191 (measles) and WM84 (mumps) were used on chick embryo fibro blast of SPF poultry flocks, was developed according to the specially designated proportion of measles:mumps:stability. Six patches of the lyophilized combined vaccine were tested by National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products. The results showed that the quality of 6 patches of measles mumps combined vaccine met the current criterion of WHO and national standards of China for monovalent vaccine in basic titer and stability, ect. After being s tored at 2 to 8 ℃ for 18 months, the stability of the combined vaccine was ba sically consistent with that of monovalent vaccine under the same conditions.
, 百拇医药
Key words：live measles mumps combined vaccine; stability; neutralizing test
在欧美发达国家，麻腮风(MMR)三联疫苗作为常规免疫疫苗已生产使用多年，长期人体 观察结果表明，该联合疫苗在抗体产生强度方面与单价疫苗相同，且一般人均可耐受。在国 内，麻疹疫苗作为常规接种疫苗已使用多年，WM84株腮腺炎疫苗已使用多年，虽未列入常规 免疫计划，但从国内外免疫经验来看，为控制和减少流行性腮腺炎的流行，有必要进一步扩 大接种率。麻疹、腮腺炎二联疫苗及其相关制品的研制和开发已经成为一种趋势。我所自80 年代开始研究麻腮二联活疫苗，1997年又陆续研制多批疫苗，经中国药品生物制品检定所检 定合格。
1 材料与方法
1.1 单价麻疹疫苗和腮腺炎疫苗的制备
, 百拇医药 按《中国生物制品规程》(1995版)规程的要求[1]，由山东省农业科学研究院SPF 实验种鸡场提供的7 d龄以内SPF鸡蛋，在38 ℃孵化10 d，挑拣发育良好的鸡胚，用胰蛋白 酶(Gibco公司产品)消化后制成原代鸡胚成纤维细胞，分别采用麻疹病毒沪191株30代，腮 腺炎病毒WM84株14代按MOI为100∶1的比例，同时接种后置于定温温室培养，用以制备单价 的麻疹疫苗和腮腺炎疫苗。细胞培养液为1 g/L水解乳蛋白(Gibco公司产品)欧氏液和30 m l/L的无支原体污染的小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所产品)，疫苗液为含2.5 g/L白蛋白的199(Gibco公司产品)液 。
1.2 麻疹腮腺炎二联疫苗的制备
将用以上方法所制备的单价麻疹和腮腺炎疫苗，分别按单价疫苗液∶199液为1∶1、1∶2、 1∶3的比例分3组稀释后检测疫苗滴度，以选择二联疫苗中麻疹、腮腺炎疫苗的混合比例。参照文献报道: 麻疹腮腺炎二联疫苗中麻疹病毒>1000 CCID50/人份，腮腺炎病毒>50 00 CCID50/人份[2～4]，同时也考虑到冻干过程中疫苗滴度下降及热稳定性 要求等，而确定了制备麻疹腮腺炎二联疫苗中的单价麻疹和腮腺炎疫苗的冻干配比前滴度。 二联疫苗冻干保护剂和冻干工艺参照现行疫苗的要求执行[1，5]。
, 百拇医药
1.3 实验室检测
二联疫苗病毒检测项目及所用方法按照《中国生物制品规程》(1995版)要求执行。麻 疹腮腺炎二联疫苗病毒效价检测过程中必须用特定抗血清在37℃ 1 h分别中和对应的病毒后 ，才能使用微量细胞病变(CPE)法检测。麻疹和腮腺炎病毒的效价检测分别用Fl和Vero细 胞，抗麻疹病毒标准血清和抗腮腺炎病毒标准血清，均来源于中国药品生物制品检定所。
2 结果
2.1 单价疫苗冻干配比前滴度的确定
不同比例稀释的2种单价疫苗滴度检定结果表明1∶1配比滴度下降约0.3 logCCID50/ ml，1∶2下降约0.5 logCCID50/ml，1∶3下降约0.8 logCCID50/ml, 同时考 虑到疫苗滴度在冻干过程及热稳定性方面的损失，确定配比前的麻疹疫苗滴度应≥5.0 log CCID50/ml，腮腺炎滴度应≥5.5 logCCID50/ml。结果见表1。
, 百拇医药
表1 不同比例稀释的单价疫苗滴度检测结果 疫 苗
病毒液滴度
稀释后滴度
1∶1
1∶2
1∶3
麻 疹
5.00
4.80
4.63
4.25
5.00
4.63
, http://www.100md.com
4.38
3.88
5.00
4.75
4.50
4.13
腮腺炎
5.50
5.25
5.00
4.88
5.50
5.13
, 百拇医药
4.88
4.63
5.50
5.38
5.13
4.75
2.2 麻疹腮腺炎二联疫苗的检定结果
根据以上实验结果确定的单价疫苗冻干配比条件，制备6批麻疹腮腺炎二联疫苗, 冻干后的 麻疹和腮腺炎病毒效价检测结果见表2、3。其它检测项目：安全、无菌、水分含量、残余牛 血清含量均达到《中国生物制品规程》(1995版)单价疫苗标准。表2 6批冻干麻疹腮腺炎二联疫苗的检定结果 二联疫苗
批号
, 百拇医药
病毒名称
滴度
水份
(%)
残余牛血清
(ng/ml)
4℃ 37 ℃ 7 d
试970901
麻 疹
4.80
4.30
2.04
25
, http://www.100md.com
腮腺炎
5.18
4.80
试970902
麻 疹
4.68
4.18
2.58
25
腮腺炎
5.43
5.18
试970903
, 百拇医药
麻 疹
4.93
4.55
1.76
25
腮腺炎
5.30
4.93
试980501
麻 疹
4.18
3.93
2.65
, http://www.100md.com
25
腮腺炎
5.05
4.80
试980502
麻 疹
3.93
3.80
2.23
25
腮腺炎
4.93
4.68
, 百拇医药
试980503
麻 疹
4.18
3.93
2.44
25
腮腺炎
5.05
4.18
表3 中国药品生物制品检定所报告的检定结果 二联疫苗
批号
病毒名称
滴度
, http://www.100md.com
水份
(%)
残余牛血清
(ng/ml)
4℃ 37 ℃ 7 d
试980501
麻 疹
3.75
3.63
2.01
3.13
腮腺炎
4.50
, 百拇医药
4.00
试980502
麻 疹
4.00
3.63
2.06
<3.13
腮腺炎
4.50
4.13
试980503
麻 疹
4.00
, http://www.100md.com
3.88
2.22
<3.13
腮腺炎
4.75
4.55
2.3 麻疹腮腺炎二联疫苗的稳定性
6批麻疹腮腺炎二联疫苗37 ℃ 7 d后麻疹病毒滴度为3.80～4.55，腮腺炎病毒滴度为4 .18～5.18 logCCID50/ml, 麻疹病毒滴度下降0.13～0.50 logCCID50/ml, 腮腺炎病毒滴度下降0.25～0.37 logCCID50/ml(表2)；在不同时间观察3批二联疫 苗的病毒滴度变化，结果显示：2～8 ℃保存18个月，病毒滴度下降≤1.0 logCCID5 0/ml(表4)，二联苗与单价苗的稳定性一致，达到《中国生物制品规程》(1995年版)单 价疫苗的规程要求。 表4 麻腮二联疫苗与单价疫苗2～8 ℃稳定性比较 疫苗批号
, 百拇医药
病毒名称
不同贮存期滴度 (月)
0
6
9
12
15
18
二联疫苗
试970901
麻 疹
4.80
4.80
, http://www.100md.com
4.55
4.55
4.43
4.30
腮腺炎
5.18
4.93
5.05
5.18
4.93
4.80
试970902
麻 疹
, 百拇医药
4.93
4.55
4.43
4.30
4.18
3.93
腮腺炎
5.05
5.05
5.18
4.93
4.80
4.80
, 百拇医药
试970903
麻 疹
5.05
4.80
4.55
4.43
4.43
4.18
腮腺炎
4.93
4.80
4.93
4.80
, 百拇医药
4.80
4.93
单价疫苗
试970901
麻 疹
5.05
4.93
4.55
4.30
4.30
4.05
试970901
腮腺炎
, http://www.100md.com
5.18
4.93
5.05
4.80
4.80
4.75
3 讨论
麻疹、腮腺炎单价活疫苗国内外已使用多年。80年代以来，欧美等国普遍推广麻腮风(MMR )三联疫苗，经临床观察证明与单价苗一样安全有效。在国内麻疹疫苗已列入常规免疫计划 ，流腮疫苗已开始广泛应用，所以制备麻腮二联疫苗已成为必然趋势。目前国际上公认 J eryl-Lynn是安全有效的疫苗株，我所的流腮WM84株在多年的使用中被证明：人体反应轻微 、免疫应答高，具有很高的人体保护率。在麻腮二联苗研制过程中，参照文献报道，考虑到 麻疹疫苗相对滴度低，冻干损失大，而流腮WM84株疫苗稳定性好，采用提高二联疫苗中麻疹 病毒数的同时仍保持流腮病毒数多于麻疹病毒数的混合比例，获得较好结果。
, http://www.100md.com
按研制工艺制备的6批疫苗，自检结果和中国药品生物制品检定所检定结果均符合单价苗规 程，该二联苗的稳定性与单价苗一致。
鉴于流腮WM84株系我所自行研制的毒株，该二联疫苗的人群保护效果，将有待今后人体流行 病学观察结果验证。
张信，男，1962年生，生物医学工程师
参考文献
1，中华人民共和国卫生部. 中国生物制品规程(一部), 1995. 126～127
2，卫生部生物制品标准化委员会办公室. 国外生物制品质量标准比较, 1997. 16 ～17
3，Nicole B, Gaston D S, Samuel P et al. Measles,Mumps,and Rubella antibodies in children 5～6 years after immunization:effect of vaccine type and age at vaccination. Vaccine, 1995, 13: 1611
4，Hristo O, Nina G. Vaccinoprophylaxis of mumps using mumps vaccine, strain Sofia 6, in Bulgaria. Vaccine, 1994,12：1251
5，方志正. 冻干麻疹活疫苗保护剂及冻干条件的比较. 中国生物制品学杂志，1997，10(1)： 47
(收稿：1999-09-07), 百拇医药