大鼠实验性肝硬变腹水形成及其与内皮素的关系
作者：高飞 闫晋平 韩德五 许瑞龄 马学惠
单位：高飞(山西医科大学第一临床医学院内科 太原 030001)；闫晋平(山西中医学院病理学教研室)；韩德五(山西医科大学肝病研究所)；许瑞龄(山西医科大学肝病研究所)；马学惠(山西医科大学肝病研究所)
关键词：腹水；肝硬化，实验性；内皮缩血管肽类；内毒素血症；大鼠
山西医科大学学报000204 摘要：目的 研究大鼠实验性肝硬变晚期腹水形成与内皮素及肠源性内毒素血症的关系，探讨肝硬变腹水形成的机制。方法 以大鼠为实验对象，分为正常对照组(n=8)、肝硬变组(n=12)和肝硬变伴腹水组(n=18)。实验组采用复合因子建立肝硬变大鼠模型。各组均测定腹主动脉血中内皮素和内毒素水平，肝硬变组还测定了腹水量。结果 随着肝硬变形成，大鼠血中内皮素水平增高，各组含量分别为(99.6±16.9) μg/L，(246.6±21.3) μg/L和(273.8±12.4) μg/L。相关分析表明，肝硬变组腹水量与血中ET呈正相关(r=0.81，P<0.05)；内毒素水平增高，并与内皮素的浓度呈正相关(r=0.74，P<0.05)。结论 肝硬变腹水形成与血中内皮素升高相关，而内皮素的升高则源于肠源性内毒素血症的形成。
, 百拇医药
中图分类号：R363.1+3 文献标识码：A
文章编号：1007-6611(2000)02-0103-02
Relationship between ascites and endothelin of experimental liver cirrhosis
Gao Fei,Yan Jinping,Han Dewu,et al
(Dept. of Medicine,1st Hospital,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001)
Abstract: Objective To investigate the relationship between endothelin(ET)and ascites of liver cirrhotic rats.Method ET and endotoxin in blood from aorta were determined in experimental liver cirrhotic rats(n=12) and ascites in rats with ascites(n=18).Results Both cirrhosis group and cirrhosis group with ascites showed increased levels of ET and endothelin (r=0.74，P<0.05)in the cirrhosis ascites group,and a positive correlation between ET and ascites amount(r=0.81，P<0.05).Conclusion The amount of ascites of cirrhotic rats correlates with the increase of ET with gut-derived endotoxemia.
, 百拇医药
Key words: ascites; liver cirrhosis,experimental; endotoxemia; endotoxins; rats
肝硬变失代偿出现腹水形成是肝硬变的主要并发症之一。腹水的形成一方面是由于血液动力学的改变，另一方面则和某些体液因素相关。传统观点认为体液因素主要是抗利尿激素和醛固酮的调制异常。随着对细胞间信息传递研究的逐渐深入，一些细胞因子作为血管活性物质参与组织液的生成和回流，其作用已日益受到重视。我们通过大鼠肝硬变动物模型研究了腹水量和内皮素(endothelin,ET)之间的关系，同时测定了血浆内皮素的水平，以探讨腹水形成的确切机制。
1 材料和方法
1.1 材料 Wistar雄性大鼠38只，体重230～260 g(山西医科大学实验动物中心提供)。分为正常对照组(n=8)，肝硬变组(n=12)和肝硬变伴腹水组(n=18，9周末检测时有腹水者归入该组)。
, 百拇医药
1.2 方法 正常对照组大鼠不作任何处理，实验组大鼠按文献介绍的方法建立大鼠肝硬变模型[1]，于第9周末杀检取材。各组动物分别于乙醚麻醉下，无菌开腹取腹主动脉血分别以RIA法测ET(北京东亚免疫技术研究所试剂盒)，以鲎试剂基质法测定内毒素(鲎试剂盒由上海临床检验中心提供)。肝硬变动物有腹水者(n=18)取血后收集腹腔液体，量其体积。取肝左叶，100 g/L福尔马林固定，石蜡包埋、切片，作HE染色，光镜观察。资料分析采用方差分析和相关分析。
2 结果
内皮素和内毒素测定结果见表1。肝硬变与肝硬变并发腹水组血浆内皮素与内毒素水平较正常组显著升高，且两者间存在正相关关系(肝硬变对照组：r=0.69，P<0.05；肝硬变伴腹水组：r=0.74，P<0.05)。肝硬变与肝硬变伴腹水组血浆ET有显著差异，后者明显高于前者(P<0.05)。两组血浆内毒素水平则无明显差异，但后者较前者有增高趋势。肝硬变腹水组腹水量平均为(2.76±0.81) ml，与血浆ET含量呈正相关关系(r=0.81，P<0.05)。
, 百拇医药
肉眼观察肝硬变大鼠肝脏体积缩小，表面呈细颗粒状，质硬。石蜡切片光镜下观察显示肝组织中
表1 不同组别大鼠血浆ET和内毒素水平(μg/L，
±s) 组别
n
ET
内毒素
正常对照
8
99.6±16.9
81.26±7.29
肝硬变
, 百拇医药
12
246.6±21.3*
180.17±30.72*
肝硬变伴腹水
18
273.8±12.4*△
199.52±35.13*
*与正常对照组相比P<0.05，△与肝硬变组相比P<0.05纤维增生包绕肝细胞团块形成假小叶，肝细胞有不同程度的胞浆疏松化和脂肪变性存在。
3 讨论
, 百拇医药
肝脏发生急慢性损害与肠源性内毒素血症密切相关[2]，大鼠实验性肝硬变进程中内毒素血症起到关键作用已由以往实验证实[3]。内毒素参与肝硬变发生发展的机制，一方面在于其直接作用导致肝细胞损害和枯否细胞功能低下，另一方面在于内毒素诱生包括ET在内的大量细胞因子产生，参与肝脏诸多病理过程[4，5]。
在我们的实验中，肝硬变和肝硬变伴腹水动物均有内毒素和ET的显著增高，且二者间存在相关性。虽然两组动物间血浆内毒素水平无差异，但肝硬变伴腹水组较肝硬变组有增高趋势；ET则明显高于肝硬变组。肝硬变伴腹水组的腹水量也与ET浓度相关。说明腹水的形成与ET升高有关，内毒素诱发肝硬变或许尚有其他机制存在。内毒素与ET协同作用可直接引起微循环功能障碍[6]，肝硬变失代偿时，逐渐加重的肠源性内毒素血症会进一步诱发肾功能衰竭[7]，这些都是最终引起腹水出现与加重的因素。内毒素与ET的协同作用也是体内NO、PAF产生的诱发者[8]，而这一细胞因子的级联反应正是影响门静脉系统微循环改变的重要因素，也是肝硬变时产生腹水的原因。
, 百拇医药
作者简介：高飞，女，1972年1月生，硕士，助教
参考文献：
[1] 韩德五，马学惠，赵元昌.肝硬化动物模型的研究[J].山西医药杂志，1979，4(1)：1～4.
[2] Nolan JP.The role of endotoxin in liver injury[J].Gastroenterology,1975,69(3):1346～1352.
[3] 贾晋斌，韩德五，许瑞龄，等.肠源性内毒素血症在实验性肝纤维化发生发展中的作用[J].中国病理生理杂志，1998，14(4)：396～399.
[4] Andus T,Baner J,Gerok G.Effect of cytokines on the liver[J].Hepatology,1991,13(2):364～368.
, 百拇医药
[5] Herbert T,Axel W,Wolgang V,et al.Serum levels of cytokines in chronic liver disease[J].Gastroenterology,1992,103(1):264～269.
[6] Noiri E,Kuwata S,Nosaka J,et al.Endothelin mRNA expression in lipopolysaccharide stimulated rat kidney[J].Am J Pathol,1994,144(6):1159～1164.
[7] 韩德五.肝肾综合症.见:王迪浔.病理生理学[M].北京：人民卫生出版社，1994.666～682.
[8] Stark ME.Szusszeki JH.Hemodynamic in cirrhotic rats[J].Gastroenterology,1992,103:282.
收稿日期：1999-08-23, http://www.100md.com
单位：高飞(山西医科大学第一临床医学院内科 太原 030001)；闫晋平(山西中医学院病理学教研室)；韩德五(山西医科大学肝病研究所)；许瑞龄(山西医科大学肝病研究所)；马学惠(山西医科大学肝病研究所)
关键词：腹水；肝硬化，实验性；内皮缩血管肽类；内毒素血症；大鼠
山西医科大学学报000204 摘要：目的 研究大鼠实验性肝硬变晚期腹水形成与内皮素及肠源性内毒素血症的关系，探讨肝硬变腹水形成的机制。方法 以大鼠为实验对象，分为正常对照组(n=8)、肝硬变组(n=12)和肝硬变伴腹水组(n=18)。实验组采用复合因子建立肝硬变大鼠模型。各组均测定腹主动脉血中内皮素和内毒素水平，肝硬变组还测定了腹水量。结果 随着肝硬变形成，大鼠血中内皮素水平增高，各组含量分别为(99.6±16.9) μg/L，(246.6±21.3) μg/L和(273.8±12.4) μg/L。相关分析表明，肝硬变组腹水量与血中ET呈正相关(r=0.81，P<0.05)；内毒素水平增高，并与内皮素的浓度呈正相关(r=0.74，P<0.05)。结论 肝硬变腹水形成与血中内皮素升高相关，而内皮素的升高则源于肠源性内毒素血症的形成。
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中图分类号：R363.1+3 文献标识码：A
文章编号：1007-6611(2000)02-0103-02
Relationship between ascites and endothelin of experimental liver cirrhosis
Gao Fei,Yan Jinping,Han Dewu,et al
(Dept. of Medicine,1st Hospital,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001)
Abstract: Objective To investigate the relationship between endothelin(ET)and ascites of liver cirrhotic rats.Method ET and endotoxin in blood from aorta were determined in experimental liver cirrhotic rats(n=12) and ascites in rats with ascites(n=18).Results Both cirrhosis group and cirrhosis group with ascites showed increased levels of ET and endothelin (r=0.74，P<0.05)in the cirrhosis ascites group,and a positive correlation between ET and ascites amount(r=0.81，P<0.05).Conclusion The amount of ascites of cirrhotic rats correlates with the increase of ET with gut-derived endotoxemia.
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Key words: ascites; liver cirrhosis,experimental; endotoxemia; endotoxins; rats
肝硬变失代偿出现腹水形成是肝硬变的主要并发症之一。腹水的形成一方面是由于血液动力学的改变，另一方面则和某些体液因素相关。传统观点认为体液因素主要是抗利尿激素和醛固酮的调制异常。随着对细胞间信息传递研究的逐渐深入，一些细胞因子作为血管活性物质参与组织液的生成和回流，其作用已日益受到重视。我们通过大鼠肝硬变动物模型研究了腹水量和内皮素(endothelin,ET)之间的关系，同时测定了血浆内皮素的水平，以探讨腹水形成的确切机制。
1 材料和方法
1.1 材料 Wistar雄性大鼠38只，体重230～260 g(山西医科大学实验动物中心提供)。分为正常对照组(n=8)，肝硬变组(n=12)和肝硬变伴腹水组(n=18，9周末检测时有腹水者归入该组)。
, 百拇医药
1.2 方法 正常对照组大鼠不作任何处理，实验组大鼠按文献介绍的方法建立大鼠肝硬变模型[1]，于第9周末杀检取材。各组动物分别于乙醚麻醉下，无菌开腹取腹主动脉血分别以RIA法测ET(北京东亚免疫技术研究所试剂盒)，以鲎试剂基质法测定内毒素(鲎试剂盒由上海临床检验中心提供)。肝硬变动物有腹水者(n=18)取血后收集腹腔液体，量其体积。取肝左叶，100 g/L福尔马林固定，石蜡包埋、切片，作HE染色，光镜观察。资料分析采用方差分析和相关分析。
2 结果
内皮素和内毒素测定结果见表1。肝硬变与肝硬变并发腹水组血浆内皮素与内毒素水平较正常组显著升高，且两者间存在正相关关系(肝硬变对照组：r=0.69，P<0.05；肝硬变伴腹水组：r=0.74，P<0.05)。肝硬变与肝硬变伴腹水组血浆ET有显著差异，后者明显高于前者(P<0.05)。两组血浆内毒素水平则无明显差异，但后者较前者有增高趋势。肝硬变腹水组腹水量平均为(2.76±0.81) ml，与血浆ET含量呈正相关关系(r=0.81，P<0.05)。
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肉眼观察肝硬变大鼠肝脏体积缩小，表面呈细颗粒状，质硬。石蜡切片光镜下观察显示肝组织中
表1 不同组别大鼠血浆ET和内毒素水平(μg/L，
±s) 组别n
ET
内毒素
正常对照
8
99.6±16.9
81.26±7.29
肝硬变
, 百拇医药
12
246.6±21.3*
180.17±30.72*
肝硬变伴腹水
18
273.8±12.4*△
199.52±35.13*
*与正常对照组相比P<0.05，△与肝硬变组相比P<0.05纤维增生包绕肝细胞团块形成假小叶，肝细胞有不同程度的胞浆疏松化和脂肪变性存在。
3 讨论
, 百拇医药
肝脏发生急慢性损害与肠源性内毒素血症密切相关[2]，大鼠实验性肝硬变进程中内毒素血症起到关键作用已由以往实验证实[3]。内毒素参与肝硬变发生发展的机制，一方面在于其直接作用导致肝细胞损害和枯否细胞功能低下，另一方面在于内毒素诱生包括ET在内的大量细胞因子产生，参与肝脏诸多病理过程[4，5]。
在我们的实验中，肝硬变和肝硬变伴腹水动物均有内毒素和ET的显著增高，且二者间存在相关性。虽然两组动物间血浆内毒素水平无差异，但肝硬变伴腹水组较肝硬变组有增高趋势；ET则明显高于肝硬变组。肝硬变伴腹水组的腹水量也与ET浓度相关。说明腹水的形成与ET升高有关，内毒素诱发肝硬变或许尚有其他机制存在。内毒素与ET协同作用可直接引起微循环功能障碍[6]，肝硬变失代偿时，逐渐加重的肠源性内毒素血症会进一步诱发肾功能衰竭[7]，这些都是最终引起腹水出现与加重的因素。内毒素与ET的协同作用也是体内NO、PAF产生的诱发者[8]，而这一细胞因子的级联反应正是影响门静脉系统微循环改变的重要因素，也是肝硬变时产生腹水的原因。
, 百拇医药
作者简介：高飞，女，1972年1月生，硕士，助教
参考文献：
[1] 韩德五，马学惠，赵元昌.肝硬化动物模型的研究[J].山西医药杂志，1979，4(1)：1～4.
[2] Nolan JP.The role of endotoxin in liver injury[J].Gastroenterology,1975,69(3):1346～1352.
[3] 贾晋斌，韩德五，许瑞龄，等.肠源性内毒素血症在实验性肝纤维化发生发展中的作用[J].中国病理生理杂志，1998，14(4)：396～399.
[4] Andus T,Baner J,Gerok G.Effect of cytokines on the liver[J].Hepatology,1991,13(2):364～368.
, 百拇医药
[5] Herbert T,Axel W,Wolgang V,et al.Serum levels of cytokines in chronic liver disease[J].Gastroenterology,1992,103(1):264～269.
[6] Noiri E,Kuwata S,Nosaka J,et al.Endothelin mRNA expression in lipopolysaccharide stimulated rat kidney[J].Am J Pathol,1994,144(6):1159～1164.
[7] 韩德五.肝肾综合症.见:王迪浔.病理生理学[M].北京：人民卫生出版社，1994.666～682.
[8] Stark ME.Szusszeki JH.Hemodynamic in cirrhotic rats[J].Gastroenterology,1992,103:282.
收稿日期：1999-08-23, http://www.100md.com