薄层扫描法测定益气通脉口服液中黄芪甲苷含量的研究
作者：刘友平 张家明
单位：刘友平(成都中医药大学药学院，成都市 610075)；张家明(成都中医药大学附属医院药剂科，成都市 610075)
关键词：薄层扫描法；益气通脉口服液；黄芪甲苷
中国药房000207
摘要：目的：测定益气通脉口服液中黄芪甲苷的含量。方法：采用薄层扫描法。结果：黄芪甲苷的点样量在1μg～5μg范围内，与吸收度积分值呈良好的线性关系，平均回收率为99.33%，RSD为1.03%。结论：该方法可靠，数据准确，操作简便、易行。
中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1001-0408(2000)02-0061-02
Determination of Astragalus IV in Yiqi Tongmai Oral Liquid by TLC Scanning
, 百拇医药
LIU Youping(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)
ZHANG Jiaming(Dept.of Pharmacy,The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)
ABSTRACT：OBJECTIVE：To determine the content of astragalus IV in Yiqi Tongmai oral liquid.METHODS：Using the dualwavelength thin layer scanning method.RESULTS：The content of astragalus IV between 1μg～5μg showed a good linearity with absorption integration.The average recovery was 97.33%.RSD was 1.03%.CONCLUSION:This method is dependable,simple,and easy to operate with accurate data.
, 百拇医药
KEY WORDS：thin layer scanning;astragalus IV;Yiqi Tongmai oral liquid
益气通脉口服液系由黄芪、川芎、丹参、延胡索等药味制成的复方制剂[1]，具有化瘀通脉、温通止痛之功。临床用于治疗冠心病、心绞痛等疾病，疗效确切。为了控制制剂质量，笔者对君药黄芪所含有效成分黄芪甲苷的含量进行了测定。黄芪甲苷的含量测定方法据文献报道，主要有薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3]、反相高效液相色谱法[4]等。本文采用薄层扫描法测定制剂中黄芪甲苷含量，结果满意。
1 仪器、试药与样品
CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)；定量点样毛细管(美国Drummond公司)；黄芪甲苷对照品(含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)；薄层层析硅胶G60型(青岛海洋化工集团公司)；益气通脉口服液(成都中医药大学附属医院药剂科提供)；所用试剂均为分析纯。
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2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备：精密量取益气通脉口服液20ml，用水饱和的正丁醇提取5次，每次20ml，合并正丁醇液，用5%NaHCO3溶液洗涤4次，每次30ml，弃去NaHCO3液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(1.5cm×12cm)，用水100ml洗脱，弃去水液；再用30%乙醇60ml洗脱，弃去洗脱液；继用70%乙醇60ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣以甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 薄层色谱条件：照薄层色谱法(《中国药典》1995年版(一部)附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液3μl，供试品溶液6μl，阴性对照液(按处方比例配制的除去黄芪的其它药物制备的阴性样品，按供试品溶液的方法制备)6μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘约5min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的棕褐色斑点；置紫外灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。阴性样品对照液色谱中在相应位置无斑点出现。薄层色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 样品薄层色谱图
2.4 薄层扫描条件：采用双波长反射法锯齿扫描，λs=530nm，λR=700nm；背景补偿；线性参数Sx=3；扫描步距ΔY=0.2mm；狭缝宽度1.2mm×1.2mm，薄层扫描图见图2。
图2 样品薄层扫描图
2.5 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，按2.3项下条件进行薄层层析，显色后，取同样大小的玻璃板覆盖于薄层板上，周围用胶布固定，按2.4项下条件扫描，得吸收度积分值。以对照品总样量为横坐标，吸收度积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得一不通过原点的直线。经回归处理，得回归方程：Y=3 372.6 879+2 508.2 677，相关系数γ=0.9 954。黄芪甲苷的点样量在1μg～5μg范围内，与吸收度积分值呈良好的线性关系。
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2.6 稳定性试验：对同一斑点，每隔30min扫描，测定其吸收度积分值，结果在2h内稳定，RSD=1.5%(n=5)。
2.7 精密度试验：(1)同板精密度：取同一供试品溶液，在同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点5个6μl斑点，依法展开显色后，扫描测定，结果吸收度积分值RSD=2.56%(n=5)。(2)异板精密度：对同一供试品溶液，测定其中黄芪甲苷含量，共测定5次，结果含量的RSD=4.26%(n=5)。(3)仪器精密度：对同一斑点连续扫描测定5次，结果吸收度积分值的RSD=0.89%(n=5)。
2.8 重现性试验：取同一批号益气通脉口服液，分别制备5份供试品溶液，依法测定黄芪甲苷含量，结果RSD=2.57%(n=5)。
2.9 回收率试验：精密吸取已知含量的益气通脉口服液10ml，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(浓度为0.095mg/ml)3ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。
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表1 加样回收率试验结果 已知量mg
加入量mg
测得量mg
回收率%
平均回收率%
RSD%
0.28
0.285
0.5573
97.19
0.28
0.285
, http://www.100md.com 0.5554
96.63
0.28
0.285
0.5599
98.21
0.28
0.285
0.5607
98.49
0.28
0.285
0.5540
, http://www.100md.com
94.14
97.33
1.03
2.10 样品含量测定：精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液1μl、3μl，分别交叉点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，依法展开，测定，并以外标两点法计算黄芪甲苷含量(因标准曲线未过原点)。3批样品黄芪甲苷的含量分别为0.0 283mg/ml(批号980101)、0.0 354mg/ml(批号980102)、0.0 338mg/ml(批号980103)。
3 讨论
3.1 益气通脉口服液为中药复方制剂，成分较为复杂，采用5%NaHCO3溶液除杂，较《中国药典》1995年版(一部)黄芪项下使用氨试液除杂[6]，刺激性小，易操作，且薄层色谱斑点清晰，无色带干扰。
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3.2 首次将展开系统醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)用于黄芪甲苷含量测定，结果满意。该系统能使黄芪甲苷得到较好的分离，且斑点圆整，Rf值适中，且临配即用，不需低温放置过夜，较《中国药典》1995年版(一部)黄芪含量测定项下所载系统[6]为优。
参考文献：
[1] 刘友平，李胜涛，李祖伦，等.益气通脉口服液制备工艺研究[J].成都中医药大学学报，1999，22(1)：54.
[2] 李 玲，苏 健，王宝黄芪及复方制剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定[J].中成药，1993，15(6)：10.
[3] 付铁军，李伯刚，及元乔，等.高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J].天然产物研究与开发，1997，9(4)：53.
[4] 肖 娟，王秀兰，马 鹏，等.RP-HPLC法测定益气活血注射液中黄芪甲苷的含量[J].华西药学杂志，1999，14(1)：43.
[5] 苏 健，王宝，王广才.归芪合剂及其主药黄芪的检验方法研究[J]中国中药杂志，1994，19(3)：158.
[6] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部)[S].1995年版.广州：广东科技出版社、化学工业出版社，1995：272
(收稿日期：1999-10-30 修回日期：2000-01-10), 百拇医药
单位：刘友平(成都中医药大学药学院，成都市 610075)；张家明(成都中医药大学附属医院药剂科，成都市 610075)
关键词：薄层扫描法；益气通脉口服液；黄芪甲苷
中国药房000207
摘要：目的：测定益气通脉口服液中黄芪甲苷的含量。方法：采用薄层扫描法。结果：黄芪甲苷的点样量在1μg～5μg范围内，与吸收度积分值呈良好的线性关系，平均回收率为99.33%，RSD为1.03%。结论：该方法可靠，数据准确，操作简便、易行。
中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1001-0408(2000)02-0061-02
Determination of Astragalus IV in Yiqi Tongmai Oral Liquid by TLC Scanning
, 百拇医药
LIU Youping(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)
ZHANG Jiaming(Dept.of Pharmacy,The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075)
ABSTRACT：OBJECTIVE：To determine the content of astragalus IV in Yiqi Tongmai oral liquid.METHODS：Using the dualwavelength thin layer scanning method.RESULTS：The content of astragalus IV between 1μg～5μg showed a good linearity with absorption integration.The average recovery was 97.33%.RSD was 1.03%.CONCLUSION:This method is dependable,simple,and easy to operate with accurate data.
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KEY WORDS：thin layer scanning;astragalus IV;Yiqi Tongmai oral liquid
益气通脉口服液系由黄芪、川芎、丹参、延胡索等药味制成的复方制剂[1]，具有化瘀通脉、温通止痛之功。临床用于治疗冠心病、心绞痛等疾病，疗效确切。为了控制制剂质量，笔者对君药黄芪所含有效成分黄芪甲苷的含量进行了测定。黄芪甲苷的含量测定方法据文献报道，主要有薄层扫描法[2]、高效液相色谱法[3]、反相高效液相色谱法[4]等。本文采用薄层扫描法测定制剂中黄芪甲苷含量，结果满意。
1 仪器、试药与样品
CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)；定量点样毛细管(美国Drummond公司)；黄芪甲苷对照品(含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)；薄层层析硅胶G60型(青岛海洋化工集团公司)；益气通脉口服液(成都中医药大学附属医院药剂科提供)；所用试剂均为分析纯。
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2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备：精密量取益气通脉口服液20ml，用水饱和的正丁醇提取5次，每次20ml，合并正丁醇液，用5%NaHCO3溶液洗涤4次，每次30ml，弃去NaHCO3液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(1.5cm×12cm)，用水100ml洗脱，弃去水液；再用30%乙醇60ml洗脱，弃去洗脱液；继用70%乙醇60ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣以甲醇溶解并转移至2ml量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 薄层色谱条件：照薄层色谱法(《中国药典》1995年版(一部)附录Ⅵ B)试验，吸取对照品溶液3μl，供试品溶液6μl，阴性对照液(按处方比例配制的除去黄芪的其它药物制备的阴性样品，按供试品溶液的方法制备)6μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘约5min。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的棕褐色斑点；置紫外灯(365nm)下检视，显相同的橙黄色荧光斑点。阴性样品对照液色谱中在相应位置无斑点出现。薄层色谱图见图1。
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图1 样品薄层色谱图
2.4 薄层扫描条件：采用双波长反射法锯齿扫描，λs=530nm，λR=700nm；背景补偿；线性参数Sx=3；扫描步距ΔY=0.2mm；狭缝宽度1.2mm×1.2mm，薄层扫描图见图2。
图2 样品薄层扫描图
2.5 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，按2.3项下条件进行薄层层析，显色后，取同样大小的玻璃板覆盖于薄层板上，周围用胶布固定，按2.4项下条件扫描，得吸收度积分值。以对照品总样量为横坐标，吸收度积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得一不通过原点的直线。经回归处理，得回归方程：Y=3 372.6 879+2 508.2 677，相关系数γ=0.9 954。黄芪甲苷的点样量在1μg～5μg范围内，与吸收度积分值呈良好的线性关系。
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2.6 稳定性试验：对同一斑点，每隔30min扫描，测定其吸收度积分值，结果在2h内稳定，RSD=1.5%(n=5)。
2.7 精密度试验：(1)同板精密度：取同一供试品溶液，在同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，点5个6μl斑点，依法展开显色后，扫描测定，结果吸收度积分值RSD=2.56%(n=5)。(2)异板精密度：对同一供试品溶液，测定其中黄芪甲苷含量，共测定5次，结果含量的RSD=4.26%(n=5)。(3)仪器精密度：对同一斑点连续扫描测定5次，结果吸收度积分值的RSD=0.89%(n=5)。
2.8 重现性试验：取同一批号益气通脉口服液，分别制备5份供试品溶液，依法测定黄芪甲苷含量，结果RSD=2.57%(n=5)。
2.9 回收率试验：精密吸取已知含量的益气通脉口服液10ml，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(浓度为0.095mg/ml)3ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。
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表1 加样回收率试验结果 已知量mg
加入量mg
测得量mg
回收率%
平均回收率%
RSD%
0.28
0.285
0.5573
97.19
0.28
0.285
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96.63
0.28
0.285
0.5599
98.21
0.28
0.285
0.5607
98.49
0.28
0.285
0.5540
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94.14
97.33
1.03
2.10 样品含量测定：精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液1μl、3μl，分别交叉点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，依法展开，测定，并以外标两点法计算黄芪甲苷含量(因标准曲线未过原点)。3批样品黄芪甲苷的含量分别为0.0 283mg/ml(批号980101)、0.0 354mg/ml(批号980102)、0.0 338mg/ml(批号980103)。
3 讨论
3.1 益气通脉口服液为中药复方制剂，成分较为复杂，采用5%NaHCO3溶液除杂，较《中国药典》1995年版(一部)黄芪项下使用氨试液除杂[6]，刺激性小，易操作，且薄层色谱斑点清晰，无色带干扰。
, http://www.100md.com
3.2 首次将展开系统醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)用于黄芪甲苷含量测定，结果满意。该系统能使黄芪甲苷得到较好的分离，且斑点圆整，Rf值适中，且临配即用，不需低温放置过夜，较《中国药典》1995年版(一部)黄芪含量测定项下所载系统[6]为优。
参考文献：
[1] 刘友平，李胜涛，李祖伦，等.益气通脉口服液制备工艺研究[J].成都中医药大学学报，1999，22(1)：54.
[2] 李 玲，苏 健，王宝黄芪及复方制剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定[J].中成药，1993，15(6)：10.
[3] 付铁军，李伯刚，及元乔，等.高效液相色谱法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J].天然产物研究与开发，1997，9(4)：53.
[4] 肖 娟，王秀兰，马 鹏，等.RP-HPLC法测定益气活血注射液中黄芪甲苷的含量[J].华西药学杂志，1999，14(1)：43.
[5] 苏 健，王宝，王广才.归芪合剂及其主药黄芪的检验方法研究[J]中国中药杂志，1994，19(3)：158.
[6] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部)[S].1995年版.广州：广东科技出版社、化学工业出版社，1995：272
(收稿日期：1999-10-30 修回日期：2000-01-10), 百拇医药