氯沙坦对自发性高血压大鼠心肌纤维化抑制作用的研究
作者：张静 张承俊 朱兴雷 周士发 李耀珍 王立欣
单位：张承俊(济南市第一人民医院，济南 250011)；朱兴雷(山东省立医院，济南250021)；张静 周士发 李耀珍 王立欣(济南军区总医院老年病三科，济南 250031)
关键词：氯沙坦；高血压；左心室肥厚；心肌纤维化
中国新药杂志000208 摘要 目的：通过动物实验观察氯沙坦的降压效果及对心肌纤维化的作用。方法：自发性高血压大鼠16只随机分为治疗组(SHR-L)和对照组(SHR-C),另设同源的WKY大鼠10只为正常对照组。治疗组口服氯沙坦20mg/kg，qd,服药6周后处死动物，取左心室心肌称重，计算左室/体重比(LVW/BW)，Van-Gieson染色观察左心室心肌胶原变化，全自动图像分析系统测量心肌间质胶原容积百分比(CVF)和血管周围胶原面积/周长比(PVCA/PCL)。结果：治疗组服药后血压明显下降，服药前后心率无明显变化，左室心肌LVW/BW,CVF及PVCA/PCL服药后明显下降。结论：氯沙坦对自发性高血压大鼠治疗6周可以有效降低血压,部分逆转心肌纤维化和左室肥厚，对心率无明显影响。
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THE INHIBITORY EFFECTS OF LOSARTAN ON MYOCARDIAL
FIBROSIS IN RATS WITH SPONTANEOUS HYPERTENSION
Zhang Jing, Zhang Chengjun, Zhu Xinglei, et al.
(General Hospital, Jinan Military Area, PLA, Jinan 250031)
ABSTRACT OBJECTIVE: To study the effects of losartan on BP and mycofibrosis in rats model. METHODS: 16 rats with spontaneous hypertension were randomly divided into active group and control group. The rats in active group were treated with daily 20 mg losartan. Another 10 rats were recruited as healthy control. After 6 weeks, all the rats were killed, and all the left ventricle muscle weight (LVW) were measured to calculate the LVW/BW; the interstitial collagen volume fraction (CVF) and the ratio of perivascular collgen area to percircle length (PVCA/PCL) were calculated by an automatic analyzing system. RESULTS: After treatment, the BP decreased to normal level with a stable heart rate in animals of the active group, and their LVW/BW, CVF, and PVCA/PCL were obviously decreased. CONCLUSION: The BP in rats with spontaneous hypertension can effectively decreased by treatment with losartan for 6 weeks, at same time their myocardial fibrosis and left vertricle hypertrophy can also be regressed partially but no effect on heart rate.
, 百拇医药
KEY WORDS Losartan; Hypertension; Left ventricle hypertrophy; Myocardial fibrosis
高血压左室肥厚包括心肌细胞肥大和细胞外间质纤维化,Ⅰ型、Ⅲ型胶原过度合成及两者比例失调是心肌纤维化的主要原因。新型血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦通过受体途径阻断血管紧张素Ⅱ的作用，理论上具有抑制心肌纤维化的作用[1]。有关这方面的研究国内尚未见文献报道。本研究通过动物实验观察氯沙坦的这一作用并探讨其可能机制，以期对临床实践提供理论及实验依据。
材料与方法
1 实验动物
自发性高血压大鼠(SHR，n=16)及正常组同源的Wistar-Kyoto大鼠(WKY，n=10)购自上海高血压病研究所，两组大鼠均为16周龄，雌雄各半。前者按随机原则分为2组：治疗组(SHR-L，n=8)和对照组(SHR-C，n=8)，两组大鼠性别匹配，体重、血压无差异。保持室温、安静、12 h明暗交替人工光照环境，标准饲料喂养，实验时间共6周。
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2 药品
氯沙坦(商品名：科素亚，批号199705)50 mg/片，由杭州默沙东制药有限公司提供。
3 仪器
大鼠血压心率测量仪HX-II(湖南医科大学)，自动图像分析仪HPIAS-1000(同济医科大学)，大鼠灌胃器(14号穿刺针，自制)，电子天平Metter PM1000(瑞典)。
4 实验方法
4.1 喂药 治疗组服氯沙坦20 mg/(kg*d)，qd。
4.2 血压、心率的测量 于实验前及实验第2，4，6周测量大鼠血压、心率。测量时使大鼠保持安静、清醒状态，采用尾套法测量尾动脉收缩压，每次测血压3次，取其平均值，同时描记大鼠心率。比较各组大鼠不同时间血压心率变化。
, 百拇医药
4.3 标本取材 SHR-L组服药满6周后同期处死3组大鼠，处死前测体重。以20%乌拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉大鼠，开胸，剥离大鼠心脏，生理盐水充分灌洗，滤纸吸干，去除右室游离壁，沿房室交界处去除心房和大血管，保留左室游离壁和室间隔做为左室重量(LVW)，电子天平称重(精确到1 mg)，计算左室重量/体重比(LVW/BW)做为左室肥厚的指标。
4.4 标本处理 10%福尔马林固定左室心肌48～72 h，经烘干、脱水、透明、常规石蜡包埋，取左室中段横截面，4 μm厚连续切片5张，行Van-Gieson胶原染色，结果是胶原染成鲜红色，细胞核染成棕褐色，肌纤维染成黄色。
4.5 胶原定量分析 每个标本选一张染色切片，在显微镜上放大100倍，通过全自动图像分析系统对胶原进行定量分析。随机选取10个无冠状动脉小血管的视野，计算间质胶原容积百分比(CVF)[2]。另选择含冠状动脉小血管且直径大于10 μm的10个视野，计算血管周围且与血管连接的胶原面积，以血管周围胶原面积(PVCA)除以血管周长(PCL)作为血管周围胶原面积的校正值(PVCA/PCL)[3]。
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5 统计学分析
所有数据以±s表示，采用两两比较的t检验，以P<0.05为有统计学显著差异。
结 果
1 各组大鼠血压、心率的变化
见表1。SHR治疗组治疗前血压与对照组无显著差异(P>0.05)，服药2周平均血压下降37 mmHg，与服药前相比P<0.001，服药4～6周血压降至稳定水平，平均血压最大下降49mmHg。治疗组服药前后心率无显著变化(P>0.05)。
表1 各组大鼠实验前及实验第2，4，6周血压(SBP,mmHg)
及心率(HR,bpm)变化 时间
(周)
, 百拇医药
WKY组
SHR-C组
SHR-L组
SBP
HR
SBP
HR
SBP
HR
0
115±17
418±43
179±21
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400±41
181±22
385±59
2
116±18
420±50
172±23
406±43
144±24a
376±57
4
118±21
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406±47
173±26
396±51
132±18a
370±52
6
114±19
390±47
168±24
390±43
133±18a
355±52
, 百拇医药
与SHR-C组比,a:P<0.001
2 左心室肥厚的测定
见表2。氯沙坦治疗6周后，SHR治疗组左室重量指数较对照组显著下降(P<0.01)，但仍高于WKY组。表2 各组大鼠BW，LVW及LVW/BW比较 组 别(n)
LVW(mg)
BW(g)
LVW/BW(mg/g)
WKY(10)
790±160
338±73
2.35±0.20
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SHR-C(8)
974±221
261±75
3.80±0.28
SHR-L(8)
813±101
258±68
3.22±0.43a
与SHR-C组比,a:P<0.01
3 心肌胶原定量分析
SHR对照组CVF，PVCA/PCL显著高于正常值，SHR治疗组服氯沙坦6周后CVF，PCVA/PCL显著下降(P<0.05)，但仍明显高于正常值，详见表3。表3 各组大鼠CVF，PVCA/PCL比较 组 别(n)
, 百拇医药
CVF(%)
PVCA/PCL(μm)
WKY(10)
4.08±0.39
24.1±5.7
SHR-C(8)
6.29±0.36
40.6±6.3
SHR-L(8)
5.80±0.33a
31.5±4.0a
, 百拇医药
与SHR-C组比，a:P<0.05讨 论
高血压左心室负荷过重，导致心肌细胞肥大和心肌纤维化。许多学者认为，心肌纤维化是决定高血压心肌舒张期僵硬度的主要因素[4，5]，是导致心衰的决定性因素。本研究发现对于SHR氯沙坦治疗 6周后可部分逆转左室肥厚和心肌纤维化，表明氯沙坦有心肌修复作用，其逆转心肌纤维化的作用与其抑制循环和心肌局部肾素血管紧张素系统作用有关。
由于AngⅡ是肾素血管紧张素系统中维持和升高血压的关键因子，AT1受体是AngⅡ产生心血管作用的靶位，选择性阻断AT1受体可使肾素血管紧张素系统得到充分抑制。AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦通过与AT1受体特异性结合，阻断AT1受体与各种途径产生的AngⅡ结合，具有高度选择性[6]，它没有血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的不良反应，且通过拮抗AT1受体的作用，反馈地引起AngⅡ水平升高，反过来刺激AT2受体增加其介导的血管扩张等有利作用[7，8]。氯沙坦降压作用是否肯定优于ACEI，尚需大规模临床实验证实。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Yonezawa T, Vmemoto S, Fujii A, et al. Comparative effects of type 1 angiotensin Ⅱ-receptor blockade with ACEI on left ventricular ditensibility and collagen metabolism in spontaneously hypertensive rats. J Cardiovasc Pharmacol,1996,27(1)∶119
2，Brilla CG, Janicki JS, Weber KT, et al. Cardioreparative effects of lisinopril in rats with genetic hypertension and left venricular hypertrophy. Circulation,1991,83(4)∶1771
, 百拇医药
3，Karam H, Heudes D, Bruneval P, et al. Endothelin antagonism in end-organ damage of spontaneously hypertensive rats. Hypertension,1996,28(3)∶379
4，Cohn JN. Structural basis for heart failure: ventricular remodeling and its pharmacological inhibition. Circulation,1995,91(10)∶2504
5，Conrad CH, Brooks WW, Hayes JA, et al. Myocardial fibrosis and stiffness with hypertrophy and heart failure in the spontaneously hypertensive rat. Circulation,1995，91(1)∶161
, 百拇医药
6，Weber MA, Byyny RL, Pratt JH, et al. Blood pressure effects of the angiotensin Ⅱ receptor blocker,losartan. Arch Intern Med,1995,155(4)∶405
7，Kesteren VA, Heugten VH, Lamers JM, et al. Angiotensin Ⅱ-mediated growth and antigrowth effects in cultured neonatal rat ardiol myocytes and fibroblasts. J Mol Cell Cardiol, 1997,29(8)∶2147
8，林善炎.第五届国际ACEI及其他RAS专题讨论会摘要.中华心血管病杂志,1997,25(4)∶321
(收稿：1999-09-28 修回：1999-12-20), http://www.100md.com
单位：张承俊(济南市第一人民医院，济南 250011)；朱兴雷(山东省立医院，济南250021)；张静 周士发 李耀珍 王立欣(济南军区总医院老年病三科，济南 250031)
关键词：氯沙坦；高血压；左心室肥厚；心肌纤维化
中国新药杂志000208 摘要 目的：通过动物实验观察氯沙坦的降压效果及对心肌纤维化的作用。方法：自发性高血压大鼠16只随机分为治疗组(SHR-L)和对照组(SHR-C),另设同源的WKY大鼠10只为正常对照组。治疗组口服氯沙坦20mg/kg，qd,服药6周后处死动物，取左心室心肌称重，计算左室/体重比(LVW/BW)，Van-Gieson染色观察左心室心肌胶原变化，全自动图像分析系统测量心肌间质胶原容积百分比(CVF)和血管周围胶原面积/周长比(PVCA/PCL)。结果：治疗组服药后血压明显下降，服药前后心率无明显变化，左室心肌LVW/BW,CVF及PVCA/PCL服药后明显下降。结论：氯沙坦对自发性高血压大鼠治疗6周可以有效降低血压,部分逆转心肌纤维化和左室肥厚，对心率无明显影响。
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THE INHIBITORY EFFECTS OF LOSARTAN ON MYOCARDIAL
FIBROSIS IN RATS WITH SPONTANEOUS HYPERTENSION
Zhang Jing, Zhang Chengjun, Zhu Xinglei, et al.
(General Hospital, Jinan Military Area, PLA, Jinan 250031)
ABSTRACT OBJECTIVE: To study the effects of losartan on BP and mycofibrosis in rats model. METHODS: 16 rats with spontaneous hypertension were randomly divided into active group and control group. The rats in active group were treated with daily 20 mg losartan. Another 10 rats were recruited as healthy control. After 6 weeks, all the rats were killed, and all the left ventricle muscle weight (LVW) were measured to calculate the LVW/BW; the interstitial collagen volume fraction (CVF) and the ratio of perivascular collgen area to percircle length (PVCA/PCL) were calculated by an automatic analyzing system. RESULTS: After treatment, the BP decreased to normal level with a stable heart rate in animals of the active group, and their LVW/BW, CVF, and PVCA/PCL were obviously decreased. CONCLUSION: The BP in rats with spontaneous hypertension can effectively decreased by treatment with losartan for 6 weeks, at same time their myocardial fibrosis and left vertricle hypertrophy can also be regressed partially but no effect on heart rate.
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KEY WORDS Losartan; Hypertension; Left ventricle hypertrophy; Myocardial fibrosis
高血压左室肥厚包括心肌细胞肥大和细胞外间质纤维化,Ⅰ型、Ⅲ型胶原过度合成及两者比例失调是心肌纤维化的主要原因。新型血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦通过受体途径阻断血管紧张素Ⅱ的作用，理论上具有抑制心肌纤维化的作用[1]。有关这方面的研究国内尚未见文献报道。本研究通过动物实验观察氯沙坦的这一作用并探讨其可能机制，以期对临床实践提供理论及实验依据。
材料与方法
1 实验动物
自发性高血压大鼠(SHR，n=16)及正常组同源的Wistar-Kyoto大鼠(WKY，n=10)购自上海高血压病研究所，两组大鼠均为16周龄，雌雄各半。前者按随机原则分为2组：治疗组(SHR-L，n=8)和对照组(SHR-C，n=8)，两组大鼠性别匹配，体重、血压无差异。保持室温、安静、12 h明暗交替人工光照环境，标准饲料喂养，实验时间共6周。
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2 药品
氯沙坦(商品名：科素亚，批号199705)50 mg/片，由杭州默沙东制药有限公司提供。
3 仪器
大鼠血压心率测量仪HX-II(湖南医科大学)，自动图像分析仪HPIAS-1000(同济医科大学)，大鼠灌胃器(14号穿刺针，自制)，电子天平Metter PM1000(瑞典)。
4 实验方法
4.1 喂药 治疗组服氯沙坦20 mg/(kg*d)，qd。
4.2 血压、心率的测量 于实验前及实验第2，4，6周测量大鼠血压、心率。测量时使大鼠保持安静、清醒状态，采用尾套法测量尾动脉收缩压，每次测血压3次，取其平均值，同时描记大鼠心率。比较各组大鼠不同时间血压心率变化。
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4.3 标本取材 SHR-L组服药满6周后同期处死3组大鼠，处死前测体重。以20%乌拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉大鼠，开胸，剥离大鼠心脏，生理盐水充分灌洗，滤纸吸干，去除右室游离壁，沿房室交界处去除心房和大血管，保留左室游离壁和室间隔做为左室重量(LVW)，电子天平称重(精确到1 mg)，计算左室重量/体重比(LVW/BW)做为左室肥厚的指标。
4.4 标本处理 10%福尔马林固定左室心肌48～72 h，经烘干、脱水、透明、常规石蜡包埋，取左室中段横截面，4 μm厚连续切片5张，行Van-Gieson胶原染色，结果是胶原染成鲜红色，细胞核染成棕褐色，肌纤维染成黄色。
4.5 胶原定量分析 每个标本选一张染色切片，在显微镜上放大100倍，通过全自动图像分析系统对胶原进行定量分析。随机选取10个无冠状动脉小血管的视野，计算间质胶原容积百分比(CVF)[2]。另选择含冠状动脉小血管且直径大于10 μm的10个视野，计算血管周围且与血管连接的胶原面积，以血管周围胶原面积(PVCA)除以血管周长(PCL)作为血管周围胶原面积的校正值(PVCA/PCL)[3]。
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5 统计学分析
所有数据以±s表示，采用两两比较的t检验，以P<0.05为有统计学显著差异。
结 果
1 各组大鼠血压、心率的变化
见表1。SHR治疗组治疗前血压与对照组无显著差异(P>0.05)，服药2周平均血压下降37 mmHg，与服药前相比P<0.001，服药4～6周血压降至稳定水平，平均血压最大下降49mmHg。治疗组服药前后心率无显著变化(P>0.05)。
表1 各组大鼠实验前及实验第2，4，6周血压(SBP,mmHg)
及心率(HR,bpm)变化 时间
(周)
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WKY组
SHR-C组
SHR-L组
SBP
HR
SBP
HR
SBP
HR
0
115±17
418±43
179±21
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400±41
181±22
385±59
2
116±18
420±50
172±23
406±43
144±24a
376±57
4
118±21
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406±47
173±26
396±51
132±18a
370±52
6
114±19
390±47
168±24
390±43
133±18a
355±52
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与SHR-C组比,a:P<0.001
2 左心室肥厚的测定
见表2。氯沙坦治疗6周后，SHR治疗组左室重量指数较对照组显著下降(P<0.01)，但仍高于WKY组。表2 各组大鼠BW，LVW及LVW/BW比较 组 别(n)
LVW(mg)
BW(g)
LVW/BW(mg/g)
WKY(10)
790±160
338±73
2.35±0.20
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SHR-C(8)
974±221
261±75
3.80±0.28
SHR-L(8)
813±101
258±68
3.22±0.43a
与SHR-C组比,a:P<0.01
3 心肌胶原定量分析
SHR对照组CVF，PVCA/PCL显著高于正常值，SHR治疗组服氯沙坦6周后CVF，PCVA/PCL显著下降(P<0.05)，但仍明显高于正常值，详见表3。表3 各组大鼠CVF，PVCA/PCL比较 组 别(n)
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CVF(%)
PVCA/PCL(μm)
WKY(10)
4.08±0.39
24.1±5.7
SHR-C(8)
6.29±0.36
40.6±6.3
SHR-L(8)
5.80±0.33a
31.5±4.0a
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与SHR-C组比，a:P<0.05讨 论
高血压左心室负荷过重，导致心肌细胞肥大和心肌纤维化。许多学者认为，心肌纤维化是决定高血压心肌舒张期僵硬度的主要因素[4，5]，是导致心衰的决定性因素。本研究发现对于SHR氯沙坦治疗 6周后可部分逆转左室肥厚和心肌纤维化，表明氯沙坦有心肌修复作用，其逆转心肌纤维化的作用与其抑制循环和心肌局部肾素血管紧张素系统作用有关。
由于AngⅡ是肾素血管紧张素系统中维持和升高血压的关键因子，AT1受体是AngⅡ产生心血管作用的靶位，选择性阻断AT1受体可使肾素血管紧张素系统得到充分抑制。AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦通过与AT1受体特异性结合，阻断AT1受体与各种途径产生的AngⅡ结合，具有高度选择性[6]，它没有血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的不良反应，且通过拮抗AT1受体的作用，反馈地引起AngⅡ水平升高，反过来刺激AT2受体增加其介导的血管扩张等有利作用[7，8]。氯沙坦降压作用是否肯定优于ACEI，尚需大规模临床实验证实。
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参 考 文 献
1，Yonezawa T, Vmemoto S, Fujii A, et al. Comparative effects of type 1 angiotensin Ⅱ-receptor blockade with ACEI on left ventricular ditensibility and collagen metabolism in spontaneously hypertensive rats. J Cardiovasc Pharmacol,1996,27(1)∶119
2，Brilla CG, Janicki JS, Weber KT, et al. Cardioreparative effects of lisinopril in rats with genetic hypertension and left venricular hypertrophy. Circulation,1991,83(4)∶1771
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3，Karam H, Heudes D, Bruneval P, et al. Endothelin antagonism in end-organ damage of spontaneously hypertensive rats. Hypertension,1996,28(3)∶379
4，Cohn JN. Structural basis for heart failure: ventricular remodeling and its pharmacological inhibition. Circulation,1995,91(10)∶2504
5，Conrad CH, Brooks WW, Hayes JA, et al. Myocardial fibrosis and stiffness with hypertrophy and heart failure in the spontaneously hypertensive rat. Circulation,1995，91(1)∶161
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6，Weber MA, Byyny RL, Pratt JH, et al. Blood pressure effects of the angiotensin Ⅱ receptor blocker,losartan. Arch Intern Med,1995,155(4)∶405
7，Kesteren VA, Heugten VH, Lamers JM, et al. Angiotensin Ⅱ-mediated growth and antigrowth effects in cultured neonatal rat ardiol myocytes and fibroblasts. J Mol Cell Cardiol, 1997,29(8)∶2147
8，林善炎.第五届国际ACEI及其他RAS专题讨论会摘要.中华心血管病杂志,1997,25(4)∶321
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